參與適應性免疫應答的細胞

1、參與適應性免疫應答的細胞第一節(jié) T淋巴細胞及其亞群nT淋巴細胞是一群具有免疫活性的小淋巴細胞。n骨髓造血干細胞進入胸腺，并在胸腺內微環(huán)境中多種因素的共同作用下分化、成熟為淋巴細胞，故稱胸腺依賴淋巴細胞（thymus-dependent lymphocyte）,也就是T淋巴細胞(T lymphocyte)，簡稱T細胞（T cell）。n成熟T細胞轉移到淋巴結、脾等外周淋巴組織，接受抗原提呈細胞表面特異性抗原肽及其它信號的共同刺激，成為效應性和記憶性T細胞，參與適應性免疫應答和免疫記憶的維持。一、T淋巴細胞在胸腺中的分化nT淋巴細胞來源于骨髓或胚肝淋巴樣干細胞分化發(fā)育的祖T細胞(Pro-T) 。n

2、祖T細胞是指骨髓中定向分化為T細胞的祖細胞，在進入胸腺之前或進入胸腺被膜下尚未到達胸腺皮質前又稱前胸腺(prethymic)淋巴細胞(Pre-T)。nPre-T從進入胸腺皮質后至離開胸腺前，均稱胸腺細胞(thymocyte)。成熟的胸腺細胞進入外周血液和外周淋巴組織中稱為T細胞。n當祖T細胞(pro-T)自胚肝或骨髓進入胸腺后，在胸腺微環(huán)境主要是由胸腺基質細胞(thymic stroma cell，TSC)、細胞外基質(extra-cellular matrix，ECM)和細胞因子等組成作用下不斷分化和發(fā)育，從皮質外層進入皮質深層，通過皮髓連接處進入髓質。在其分化成熟過程中，可先后發(fā)生各種分化

3、抗原的表達，各種細胞受體的表達，并通過陽性和陰性選擇過程，最終形成T細胞庫。(一) T細胞受體(TCR)的發(fā)育 nT細胞在胸腺發(fā)育的不同階段，可表達不同的細胞表面分子。這些表面分子不僅是T細胞不同發(fā)育階段的表面標志，同時也一定程度上影響著T細胞在胸腺中的發(fā)育。nPre-T細胞進入胸腺之初尚未表達T細胞表面標志，但表達末端脫氧核苷轉移酶(TdT)，它們在胸腺微環(huán)境中胸腺基質細胞(TSC)及其所分泌細胞因子和胸腺激素作用下，分化發(fā)育。T細胞在發(fā)育的每一個階段，其TCR、CD3、CD4和CD8等分子的表達情況各異，涉及嚴密而復雜的調節(jié)機制，逐漸分化成成熟的T細胞。n根據TCR組成鏈的不同，可將T細胞

4、分為T細胞和T細胞，其中T細胞約占T細胞的95% 99%，T細胞約占1% 5%。nT細胞發(fā)育過程中，圍繞TCR的發(fā)育和成熟，發(fā)生一系列基因的有序表達和關閉。最早開始表達的T細胞系特異性基因是CD3；隨即出現(xiàn)pre-TCR替代輕鏈pT的mRNA，以及TCR的胚系轉錄本；其后是RAG-1 (recombination activating genes l)和RAG-2的表達。n胸腺細胞在雙陰性階段的一個時期，即CD44lowCD25+ 階段，在RAGs的作用下，TCR 基因開始進行V、D、J基因重排及表達，表達 鏈蛋白并與pT 組裝成的pre-TCR pT: 二肽鏈，表達于CD44-CD25- 階

5、段的細胞表面，并與低水平表達的CD3、 鏈共同開始行使信號轉導功能，誘導T細胞進一步克隆擴增和關閉TCR基因的進一步重排，分化至CD4+CD8+ pT:CD3low的DP階段，細胞停止增殖，TCR 基因開始重排，表達成熟的功能性的TCR。n只有表達功能性TCR的細胞才能經歷選擇過程。(二) T細胞在胸腺中的選擇n成熟的、有功能的T細胞必須經過在胸腺中陽性選擇和陰性選擇。 n主要組織相容性復合體(MHC)抗原在這兩種選擇中起著關鍵的作用。n1陽性選擇(positive selection) 在胸腺淺皮質區(qū), 功能性表達TCR 的CD4+CD8+ 雙陽性細胞與胸腺皮質上皮細胞表面MHC類或類分子以

6、適當親和力進行特異性結合，可繼續(xù)分化為CD4+ 或CD8+ 的SP細胞。如果DP細胞的TCR 能與MHC類分子以中等親和力結合，則DP細胞表面的CD8分子表達水平增高， 而CD4分子水平表達降低直至丟失，這時DP細胞就轉變?yōu)镃D4-CD8+ 的SP細胞；如果DP細胞的TCR 與MHC類分子結合，則分化成CD4CD8 的SP細胞。n陽性選擇過程使CD8+ T細胞和CD4+ T細胞分別具有MHC類和或類限制性識別能力。這是T細胞MHC分子限制性的基礎。n2. 陰性選擇(negative selection) 位于深皮質與髓質交界處的樹突狀細胞(DC)和巨噬細胞表達高水平的MHC類分子和類分子， 自

7、身抗原成分與DC或巨噬細胞表面MHC類或類分子形成自身抗原肽-MHC復合物。 經過陽性選擇后的胸腺細胞TCR 如能識別DC或巨噬細胞表面自身抗原-MHC抗原復合物，即被激活而發(fā)生程序性細胞死亡（凋亡），產生自身耐受(self tolerance)，而不發(fā)生識別結合的胸腺細胞則繼續(xù)發(fā)育為成熟、能識別外來抗原的T細胞，成熟的T細胞離開胸腺進入外周血。n胸腺細胞經歷了TCR基因重排、陽性選擇和陰性選擇等復雜過程，最終分化發(fā)育成熟。在這個過程中，TCR不能重排的細胞死亡；如果DP細胞的TCR 以高親和力與MHC分子結合，則在胸腺皮質中發(fā)生凋亡而被清除或成為無能細胞；不能與MHC分子結合的細胞發(fā)生凋亡；

8、能與自身抗原肽-MHC分子結合的胸腺細胞也死亡。最終分化中的細胞的95以上都凋亡了，只有約5的細胞能分化發(fā)育成熟，經選擇而存活。n外周T細胞庫中的成熟T細胞有兩大特點：即自身MHC限制性和自身免疫耐受性。 二、成熟T細胞的膜表面分子（一）TCR-CD3復合物nT 細胞受體（T cell receptor，TCR）是T細胞識別抗原肽-MHC分子復合物的特異性受體，屬于免疫球蛋白超家族。TCR有兩種類型： TCR（TCR1） 和TCR（TCR2）。n每個T細胞只表達一種TCR。不同的T細胞克隆其TCR的分子結構也是不相同的。nTCR 的抗原結合位點至少有兩個功能：（1）結合抗原肽；（2）識別和結合

9、與抗原肽關聯(lián)的MHC分子。n一種TCR 鏈和 鏈的組合只能識別一種抗原肽-MHC分子的組合。n1TCR的結構和功能（1）TCR 的結構和功能TCR 存在于絕大多數外周T細胞表面，識別并結合抗原遞呈細胞或靶細胞表面的抗原肽-MHC分子復合物。nTCR的 鏈和 鏈均有一個V區(qū)和一個C區(qū)，類似Ig結構。在C區(qū)與穿膜區(qū)之間有一段約20個氨基酸的連接肽，連接肽中的半胱氨酸殘基在 鏈和 鏈間形成二硫鍵。 鏈和 鏈的穿膜區(qū)約有20 40個氨基酸殘基，其中有帶正電的氨基酸與CD3分子帶負電的氨基酸形成鹽橋。n其C末端是一段由5 12個氨基酸殘基組成的胞漿內尾肽。n 鏈和 鏈的可變區(qū)中至少各有3個CDR。它們共

10、同組成TCR 的抗原結合位點。n 鏈和 鏈的CDR3在兩條鏈接觸區(qū)的中間，共同識別和結合嵌入MHC分子槽中的抗原肽表位。其中， 鏈的CDR3與抗原肽的N端相關而 鏈CDR3識別抗原肽C末端的氨基酸，兩條鏈的CDR1和CDR2則一起識別和結合MHC分子，并參與細胞識別中的MHC限制性。n另外，在 鏈上還有與超抗原結合的部位。n 鏈主要與T細胞的激活有關，而 鏈主要與T細胞區(qū)分MHC 類和類分子有關。The invariant CD3 components are required for TCR surface expression and for transmitting antigen si

11、gnal to the cell. CD3 components are invariant, i.e., identical in all T cells.n（2）TCR 的結構和功能TCR 多見于胸腺內早期T細胞，而在人外周血成熟T細胞中所占比例甚少，約1% 10%。正常人胸腺細胞、胎兒血T細胞和許多免疫缺陷病患者血中的T細胞表面也表達TCR。TCR 在TCR 之前表達。n大多數TCR T細胞并不表達CD4或CD8分子。n一些TcR+ T細胞能識別非肽配體，如多糖或多核苷酸，可能參與對某些微生物（如分枝桿菌）的免疫應答。n 鏈和 鏈也各有一個可變區(qū)和一個恒定區(qū)。在恒定區(qū)與穿膜區(qū)之間也有一段

12、連接肽，在 鏈和 鏈的穿膜區(qū)中分別有兩個（Lys和Arg）和一個（Lys）帶正電荷的氨基酸，分別與CD3復合物上帶負電荷的氨基酸（ 鏈穿膜區(qū)的Glu或 鏈穿膜區(qū)的Asp）形成鹽橋，以穩(wěn)定TCR/CD3復合體并傳導信號。 n小鼠的TcR 能識別抗原肽-非典型的MHC分子復合物。TCR 還能識別HSP。TCR T細胞對HSP的反應可能與某些自身免疫?。ㄈ鏡A）有關。n人外周TCR T細胞有非MHC限制的細胞毒活性。這種NK樣的活性使TCR T細胞能夠參與免疫監(jiān)視作用。n2CD3CD3分子表達在人全部T細胞上，是鑒定T細胞的重要標記。 CD3分子是由 、和 等幾種多肽鏈組成。每個CD3分子都由6條肽

13、鏈組成，其中 、 及 (約占90%)呈二聚體狀態(tài)，也有少數 (10%)。CD3亞基之間都是通過非共價鍵連接的。n、和 鏈的胞漿內部分都有一個共同序列，由于它和T細胞識別抗原后進一步活化有關，故稱免疫受體酪氨酸活化基序（Immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM）。nITAM由17個氨基酸殘基組成，其中包括兩個酪氨酸-兩個任意氨基酸-亮氨酸（YxxL/V）樣的保守序列。nITAM參與細胞活化信號的傳遞。、和肽鏈上各含一個ITAM，鏈上有3個ITAM，鏈上有2個ITAM。此結構還可見于Ig、Ig、FcR 、FcR的肽鏈。另外，CD3 鏈

14、的胞漿部分和p59fyn（一種PTK）相連。nTCR與CD3形成TCR/CD3復合物。其中TCR特異性識別自身MHC分子提呈的抗原肽，而TCR與抗原結合后所產生的活化信號是由CD3分子傳遞到T細胞內部。（二）T細胞輔助受體n成熟的T細胞只能表達CD4或CD8分子，即CD4T細胞或CD8T細胞。nCD4和CD8分子的主要功能是輔助TCR識別抗原和參與T細胞活化信號的轉導。n1CD4分子 nCD4分子是由單鏈組成的跨膜分子，胞膜外有4個Ig結構區(qū)，其中遠膜端的2個結構域能夠與MHC II類分子的2 結構域結合。與T細胞識別抗原及產生MHC 類分子限制性有關。CD4分子的胞漿區(qū)結合Lck酶，與活化信

15、號的傳遞有關。此外，CD4（或CD8）還參與T細胞在胸腺內的分化發(fā)育和成熟過程。CD4分布于多數外周T細胞上。CD4分子還是人類免疫缺陷病毒(HIV)外殼蛋白gp120 的受體， HIV 感染CD4T細胞后細胞數量明顯減少，功能降低，是發(fā)生獲得性免疫缺陷綜合征 (AIDS)的主要原因。n2CD8分子 nCD8分子由、兩條鏈組成，兩條肽鏈的胞外區(qū)各含一個Ig結構域，能夠與MHC類分子的3 功能區(qū)結合。CD8分子的胞漿區(qū)也結合Lck酶，具有轉導活化信號的功能。當T細胞識別APC上的抗原肽-MHC類分子復合物時，CD8同時也與MHC類分子結合。因此CD8增強了Tc細胞與抗原提呈細胞或Tc細胞與靶細胞

16、的相互作用并輔助TCR識別結合抗原肽，被稱作TCR的共受體（coreceptor）。CD8分子表達于部分外周T細胞上。（三）協(xié)同刺激分子受體n1CD28和CTLA-4（CD152）（1）CD28 是由兩條相同的肽鏈組成的同源二聚體，表達于90 CD4 T細胞和50 CD8+ T細胞。CD28分子的配體是B7分子，包括B7-1(CD80)和B7-2(CD86)，表達于專職性APC。CD28分子與B7分子的結合產生的協(xié)同刺激信號在T細胞活化中發(fā)揮重要作用，該信號可促進T細胞增值和IL-2的生成。作用機制包括誘導T細胞表達抗細胞凋亡蛋白（Bcl-x）、刺激T細胞合成IL-2及其它細胞因子，并促進T細

17、胞的增值和分化。n（2）CTLA-4 表達于活化的CD4 T細胞和CD8+ T細胞，其配體亦是B7分子，但與B7分子結合的親和力顯著高于CD28。與CD28相反，CTLA-4與B7分子的結合產生抑制性信號，終止T細胞活化。這是因為CTLA-4分子的胞漿區(qū)含有I/VxYxxL 基序，稱為ITIM（immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif）。ITIM中的酪氨酸殘基被PTK磷酸化后，可與蛋白酪氨酸磷酸酶（如SHP-1,SHIP）結合。抑制T細胞活化信號的轉導。從而避免T細胞的過渡激活。n2ICOSICOS（inducible costimulato

18、r）是另一協(xié)同刺激分子受體，表達于活化的T細胞，與CD28具有同源性，人的ICOS分子的配體為B7-H2。初始T細胞主要依賴CD28提供協(xié)同刺激信號，ICOS則在CD28之后起作用，調節(jié)活化T細胞多種細胞因子的產生，上調T細胞黏附分子的表達，促進T細胞增值。n3CD2CD2分子即是LFA-2（lymphocyte function associated antigen-2），又稱為綿羊紅細胞受體 (erythrocyte receptor, ER)。人的CD2分子表達于95的成熟T細胞、5070胸腺細胞以及部分NK細胞表面。CD2分子的配體包括CD58（LFA-3）和CD59。CD2可能與早期

19、胸腺細胞的增殖和分化有關，也參與細胞間相互識別和粘附作用。除作為黏附分子，介導T細胞與APC或靶細胞之間的黏附外，還介導T細胞旁路激活途徑和為效應T細胞提供活化信號。n4CD40L(CD154)CD40L也稱gp39、腫瘤壞死因子相關激活蛋白（TNF-associated activation protein, TRAP）或T細胞-B細胞活化分子，是分子量為33kDa的II型跨膜糖蛋白。CD40L由266個氨基酸組成，其胞外區(qū)有214個氨基酸，含有4個半胱氨酸和一個N-糖基化位點，與TNF- 有較高的同源性?？拷缒^(qū)的兩個精氨酸是蛋白酶作用位點，所以CD40L可以從膜上被剪切下來形成可溶性分

20、子。不同的蛋白酶作用可以形成不同長度的可溶性分子，比較常見的是p31和p18兩種形式?？缒^(qū)有24個氨基酸殘基。胞漿區(qū)很短，只有22個氨基酸殘基。nCD40L有多種表達形式，在細胞膜表面可以形成同源三聚體，也可由一完整單體與另兩個截短體p31和p18形成異源三聚體，在胞漿內則以p18的同源三聚體存在。CD40L主要表達于活化的CD4 T細胞、部分活化的CD8 T細胞、嗜堿性粒細胞、肥大細胞、NK細胞等，CD40表達于APC（B細胞、樹突細胞、巨噬細胞）。nCD40L與CD40的結合所產生的效應是雙向性的。一方面，促進抗原提呈細胞的活化，B7分子表達增加和細胞因子（如IL-12）的合成增加；另一

21、方面，由于APC表達B7分子增加和分泌促進T細胞分化的細胞因子，也促進T細胞的活化。n5.LFA-1和ICAM-1LFA-1分子是屬于白細胞整合素家族的一類粘附分子，由 和 鏈通過二硫建連接而成異二聚體。其配體是ICAM-1。LFA-1/ICAM-1的結合參與T細胞的活化、增值、分化及歸巢等多種生理過程。T細胞在受到外來抗原等信號刺激后可相互凝集，這種凝集作用就依賴于LFA-1/ICAM-1的相互作用，而這兩種粘附分子在活化淋巴細胞的表達水平并沒有顯著增加。n靜止淋巴細胞即表達一定水平的LFA-1和ICAM-1，但它們不相互凝集。NKI-L16是抗LFA-1的單克隆抗體，其識別表位的表達是粘附

22、作用發(fā)生的重要條件。nLFA-1分子至少以三種形式存在：靜止淋巴細胞表達的LFA-1分子，暴露很少的NKI-L16表位，與ICAM-1分子結合的親和力（affinity）低；中間狀態(tài)的LFA-1分子，暴露大量的NKI-L16表位，但與ICAM-1結合的親和力仍較低；活化狀態(tài)的LFA-1分子，暴露出大量的NKI-L16表位，結合力高。不同狀態(tài)的LFA-1分子在淋巴細胞表面分布不同，靜止淋巴細胞的LFA-1分子分布分散，而活化的外周血淋巴細胞及效應T細胞的LFA-1分子呈集中分布，在局部形成高密度的LFA-1分子區(qū)域，可以大大提高其與配體結合時的親合力（avidity）。（四）主要組織相容性復合體

23、抗原(MHC) nT細胞胞膜上表達的MHC抗原有類和類抗原，其中MHC類抗原表達在所有發(fā)育階段的T細胞表面，靜止T細胞無MHC類抗原,但T細胞活化后即可表達。（五）絲裂原結合分子n有絲分裂原(mitogen)屬于外源凝集素(lectin)，多來自植物種子中可與某些糖和寡糖特異性結合的蛋白質，可與細胞膜表面的糖或寡糖等有絲分裂原受體結合，促使細胞活化并誘導細胞分裂，故可認為有絲分裂原是非特異性多克隆活化劑。n在免疫學中，有絲分裂原主要是指刺激多克隆淋巴細胞增殖的物質。不同的有絲分裂原對T細胞和B細胞的作用有很大差別。（六）細胞因子受體nT細胞活化后表達多種細胞因子受體（如IL-1R、IL-2R、

24、IL-4R、IL-6R、IL-7R、IL-8R、IL-9R、IL-12R、TNF-R、G-CSFR和TGF-R等。靜止和活化T細胞表面細胞因子受體的數目以及親和力可有很大差別，如靜止T細胞IL-2R表達鏈和 鏈，T細胞活化后可同時表達IL-2R的 鏈，并與 鏈、 鏈組成與IL-2結合的高親和力受體。（七）其它nT細胞還可表達Fc受體和補體受體等?；罨腡細胞還表達FasL。FasL和Fas結合，可誘導Fas細胞的凋亡。三、T細胞亞群n根據所處的活化階段：naive T cell、effector T cell和memory T celln根據TCR類型不同分TCR 和TCR T細胞n根據CD分

25、子不同分：CD4+細胞，CD8+細胞n根據T細胞功能不同分：helper T cell, Th；cytotoxic T cell, Tc，或CTL；regulatory T cell, Tr （一）初始T細胞、效應T細胞和Tm細胞n1、初始T細胞指從未接受過抗原刺激的成熟T細胞。處于細胞周期的G0期，存活期短，表達CD45RA和高水平的L-選擇素，參與淋巴細胞再循環(huán)。n2、效應T細胞表達高親和力IL-2R、粘附分子和CD45RO，不參與淋巴細胞再循環(huán)，而是向外周炎癥組織遷移。n3、記憶性T細胞 存活期長，表達CD45RO，接受抗原刺激后可迅速活化。（二）TCR T細胞和TCR T細胞（三）CD

26、4+T細胞和CD8+T細胞n人成熟的T細胞分為CD4+T細胞和CD8+T細胞，都表達TCRnCD4+T細胞表型：CD3+、CD4+、CD8-，識別1317aa的抗原肽，受MHC-類分子限制，主要是Th細胞nCD8+T細胞表型：CD3+、CD4-、CD8+，識別810aa的抗原肽，受MHC-類分子限制，是Tc。Tc1能產生IL-2、TNF-、IFN-等，介導細胞毒活性；Tc2主要產生IL-4、IL-5和IL-10等，參與對B細胞的輔助。（四）輔助性T細胞、CTL和調節(jié)性T細胞nTh細胞：Thp在抗原刺激下，分化為Th0。在不同因素的作用下，Th0可分化為Th1和Th2。n分別分泌不同的細胞因子，

27、發(fā)揮不同的免疫效應。 Th1和Th2分別在細胞免疫和體液免疫中發(fā)揮重要作用。 nTh1和Th2 產生的細胞因子有所不同。nTh1和Th2 是相互調節(jié)、相互制約的，它們的失調與感染性疾病以及自身免疫性疾病相關。nCTL（Tc ）細胞：CTL-P識別MHC-I類分子提呈的抗原，在Th細胞分泌的細胞因子的作用下活化增值分化為效應性CTL，CTL特異性識別抗原，殺傷靶細胞。調節(jié)性T細胞：自然調節(jié)性T細胞（nTreg）nCD4+CD25+foxp3+ ndown-regulating immune response（直接與靶細胞接觸，分泌TGF-、IL-10、IL-35等）n主要抑制自身反應性T細胞應答

28、。還參與腫瘤的發(fā)生和誘導移植耐受。適應性調節(jié)性T細胞（iTreg）nTr1： TGF-、IL-10nTh3： TGF-其他調節(jié)性T細胞：CD8 Treg, Th1,Th2,NK,NKT,T CELL etc三、T細胞功能 （一）CD4+ 輔助性T細胞n1、CD4+ Th細胞的亞群（見圖）n2、CD4+ Th細胞分化的調節(jié)nTh0細胞的分化方向受抗原的性質、局部環(huán)境中的激素及細胞因子等多種因素的調控。其中細胞因子的種類最為重要。n巨噬細胞分泌IL-12，NK細胞分泌IFN- 促進Th1細胞分化，抑制Th2細胞的增殖。nNKT細胞和肥大細胞產生IL-4，誘導Th2分化。nTGF-、IL-4、IL-

29、10能促進Th3細胞的分化。3、CD4+ Th細胞的效應功能（1）Th1細胞功能：主要效應功能是增強吞噬細胞介導的抗感染機制。 IFN-可活化巨噬細胞，還可促進IgG的生成。IL-2、IFN- 、IL-12可增強NK細胞的殺傷作用。IL-2和IFN- 刺激CTL分化。TNF誘導靶細胞凋亡，促進炎癥反應。Th1還是TDTH細胞。還參與某些自身免疫病的發(fā)生。Th1參與機體的細胞免疫應答。n（2）Th2細胞功能：n分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13等，與B細胞增殖、成熟和促進抗體生成有關，可增強抗體介導的免疫應答。n在適應性免疫應答中，Th1和Th2細胞處于相對平衡狀

30、態(tài)。許多疾病的發(fā)生與其失衡有關。n（3）Th17介導炎癥反應nTh17細胞主要產生IL-17，同時還分泌IL-22和IL-21nIL-17可以刺激多種細胞產生IL-1、IL-6、TNF、GM-CSF、趨化因子等多種細胞因子，可募集和激活中性粒細胞至感染部位，產生明顯的炎癥反應，清除胞外病原菌和真菌。nTh-17細胞與自身免疫性疾病發(fā)生和發(fā)展相關nTh-17細胞與免疫介導炎癥性的組織損傷關系密切（二）CD8+ 殺傷性T細胞nCTL可特異性、連續(xù)性的殺傷靶細胞nCTL殺傷靶細胞的過程可分為三個時相：接觸相、分泌相和裂解相nCTL的識別機制：CTL在識別抗原前，可通過CD2及LFA-1等粘附分子與靶

31、細胞連接，并加強TCR對抗原的結合能力。CTL通過TCR特異性的識別靶細胞表面的抗原肽-MHC-I類分子復合物。 nCTL的殺傷機制：nTCR識別抗原肽-MHC，CTL與靶細胞緊密接觸，通過顆粒胞吐釋放穿孔素（perforin） ，在Ca2+ 存在下，插入靶細胞膜，并多聚化形成穿膜通道，細胞腫脹死亡。顆粒酶（granzyme）經穿孔素形成的跨膜通道進入細胞內激活casppase10，誘導靶細胞凋亡。TNF可以與靶細胞表面的相應受體結合，啟動靶細胞的凋亡。nCTL表達的FasL與靶細胞膜上的Fas結合，激活caspase8，經caspase級聯(lián)反應，最終激活內源性DNA內切酶，導致靶細胞凋亡（a

32、poptosis） 。（三）T細胞抑制功能n活化的CD4+ CD25+ Tr細胞的主要是通過接觸抑制的方式抑制T細胞的活化和增值（ CD4+ CD25+ Tr細胞表面的B-7分子與活化T細胞表面的CTLA-4結合）。nTr1通過分泌IL-10發(fā)揮免疫抑制作用（抑制抗原特異性T細胞的增值）。nTh3通過分泌TGF-來發(fā)揮抑制作用：抑制免疫效應細胞的增值；抑制細胞的分化和活性；抑制細胞因子的產生及其免疫調節(jié)作用。第二節(jié) B淋巴細胞及其亞群nB淋巴細胞(B1ymphocyte)簡稱B細胞，因其在法氏囊(bursa of Fabricius)中分化成熟而得名。n哺乳動物沒有法氏囊，其B細胞在骨髓發(fā)育成

33、熟。成熟B細胞在周圍淋巴組織B細胞區(qū)定居n體內唯一能產生抗體的細胞n每一B細胞克隆可產生一種能與相應抗原結合的Ig分子n外周血中淋巴細胞的525%為 B細胞一、 B細胞的分化發(fā)育n哺乳類動物的B細胞在中樞免疫器官中的分化發(fā)育發(fā)生于骨髓。造血干細胞在骨髓造血微環(huán)境與基質細胞相互作用，并在基質細胞分泌的細胞因子（如IL-7）的作用下分化發(fā)育成熟。nB細胞的中樞分化發(fā)育是抗原非依賴的。發(fā)育成熟的B細胞進入外周免疫器官定居，當遇到抗原刺激時則繼續(xù)分化為合成和分泌抗體的漿細胞，這個階段是抗原依賴階段n1.祖B細胞 早期祖B細胞（表型為B220low和CD43）Ig重鏈可變區(qū)基因開始發(fā)生D-J基因重排，隨

34、后晚期祖B細胞發(fā)生V-DJ重排。n2大前B細胞(pre-B cell) 由于VDJ基因重排完成，可表達完整的 鏈，胞漿中可檢測到IgM的重鏈鏈，但無輕鏈，也無膜表面Ig的表達， 因此缺乏對抗原的反應能力。 鏈與5/VpreB替代輕鏈共同組成preB受體，丟失CD43。n3小前B細胞 分化到小前B細胞階段， 鏈在胞漿和胞膜均有表達，而且輕鏈的VJ基因發(fā)生重排。n4. 不成熟B細胞（immature B cell） 開始表達mIgM。只表達mIgM的未成熟B細胞的BCR能與骨髓細胞表面的自身膜抗原發(fā)生反應，則該細胞的發(fā)育成熟被阻滯。被阻滯的未成熟B細胞通過受體編輯機制改變其受體特性，成為對自身抗原

35、無反應性的克隆而繼續(xù)發(fā)育成熟。若受體編輯不成功，則該細胞死亡，出現(xiàn)克隆清除，發(fā)生免疫耐受，這是B細胞自身耐受的主要機制。若未成熟B細胞的BCR識別可溶性自身抗原，則mIgM表達下降，該B細胞克隆雖可進入外周，但對抗原刺激不產生應答，稱為失能（anergy）。這種失能狀態(tài)可因抗原消失而轉逆。n5. 成熟B細胞(mature B cell) 骨髓中發(fā)育成熟B細胞經血液遷移至外周淋巴器官，此時膜表面同時表達mIgM和mIgD，mIgD的表達防止了B細胞與抗原結合后所引起的免疫耐受。 二、B淋巴細胞表面的分子（一）BCR復合物nBCR復合物由識別和結合抗原的膜表面免疫球蛋白(mIg)和傳遞抗原刺激信號

36、的CD79a（Ig）/CD79b（Ig）異源二聚體組成。nmIg表達于所有成熟的B細胞表面，屬于IgSF。nmIg的作用是結合特異性抗原。nmIgH的胞內部分很短，mIgM和mIgD的胞內區(qū)僅有3個氨基酸(KVK)。mIgA和mIgE的胞內區(qū)略長，mIgG的胞內區(qū)最長，為28個氫基酸。這一結構特點決定mIg不能傳遞抗原刺激信號，而需要其它輔助分子的參與。nCD79a和CD79b分別由mb-1和B29基因編碼。它們均是Ig基因超家族的成員，有胞外區(qū)、穿膜區(qū)和相對較長的胞內區(qū)。CD79a和CD79b在跑外區(qū)的近胞膜處藉二硫鍵相連，構成二聚體。CD79a/CD79b的穿膜區(qū)也含有極性氫基酸，藉靜電吸

37、引而與BCR組成復合物。nCD79a/CD79b的功能主要有兩個：一是Ig和Ig的胞內區(qū)有ITAM基序，作為信號傳導分子傳導抗原與BCR結合所產生的信號；另一個是參與Ig從胞內向胞膜的轉運，無mb-1基因表達的B細胞的Ig只表達于胞漿，而不能表達于胞膜。（二）替代性BCR復合物nBCR復合物開始表達于不成熟B細胞。在Pre-B細胞階段。Ig的 鏈基因已完成重排，盡管Ig輕鏈基因重排尚未完成，但由其它基因編碼的5鏈和Vpre-B鏈藉非共價鍵相聯(lián)。構成假輕鏈。假輕鏈與 鏈藉共價鍵相聯(lián)，組成替代性BCR，再與Ig/Ig一起組成替代件BCR復合物，表達于pre-B細胞表面。這與B細胞在骨髓中的發(fā)育至關

38、重要。有證據表明，pre-B細胞的替代性BCR復合物與骨髓中一些至今還未清楚的配體結合。產生pre-B細胞進一步分化必不可少的信號。（三）B細胞表面的輔助受體n1激活性輔助受體 CDl9/CD21/CD81(coreceptor)是BCR復合物的激活性輔助受體。B細胞表面的CDl9、CD2l與CD8l以非共價鍵相聯(lián)，形成個B細胞特異的多分子活化輔助受體，其作用是增強B細胞對抗原刺激的敏感性。nCD21即CR2，亦為C3d的受體。CR2與補體成分的結合按親和性的高低程度依次為C3dg、C3di、C3b。CD21也是B細胞上的EB病毒受體。n2抑制性輔助受體(CD32、CD22、CD72) n(1

39、)CD22：I型跨膜蛋白，胞漿區(qū)有ITIM。配體為自身細胞表面的唾液酸聚糖分子。BCR交聯(lián)可活化Lyn，Lyn使ITIM磷酸化，抑制B細胞活化。n(2)CD72：是C型凝集素超家族成員，為II型跨膜蛋白。組成性表達于除漿細胞外的所有B細胞。CD72胞內區(qū)有2個ITIM基序，當BCR交聯(lián)時，PTK使Y磷酸化，抑制B細胞活化。CD72的配體是CD100，表達于大部分造血細胞。CD100與CD72結合可抑制胞漿區(qū)ITIM磷酸化，阻斷CD72介導的抑制作用。n(3)CD32（FcR-b）：含有ITIM基序（三）共刺激分子n1CD40 組成性地表達于成熟B細胞，屬腫瘤壞死因子受體家族(TNFRSF)。C

40、D40的配體（CD40L，CDl54）屬TNF超家族(TNFSF)，表達于活化T細胞。T細胞經由CD40與CD40L的結合對B細胞的協(xié)同刺激在B細胞分化成熟中起十分重要的作用。n2CD80和CD86 在靜息B細胞不表達或低表達，在活化B細胞表達增強?；罨疊細胞是專職性抗原提呈細胞?；罨疊細胞向T細胞提呈抗原中，經由CD80和CD86分子與T細胞表面的CD28分子間的相互作用，向T細胞提供共刺激信號。n3CD27 為TNFRSF成員。B細胞受抗原刺激活化后表達CD27，與組成性表達于T細胞表面的CD70相互作用。CDl54+CD70+ T細胞經由CD70-CD27途徑在B細胞分化成漿細胞中起作用

41、。n4CD70 表達在活化的B細胞表面。T細胞中的CD45RA+CD4+ 亞群也表達CD27?；罨腂細胞可經由CD70-CD27途徑誘導CD45RA+CD4+ T細胞分化成調節(jié)性T細胞，以抑制抗體產生。這是B細胞活化中的自我調節(jié)機制之一。n5CD20 表達于除漿細胞外的發(fā)育分化各階段的B細胞，可能通過調節(jié)跨膜鈣離子流動直接對B細胞起作用，在B細胞增殖和分化中起重要的調節(jié)作用。n6粘附分子 Th細胞對B細胞的輔助以及活化B細胞向T細胞提呈抗原，均需要細胞細胞的接觸，粘附分子在此過程中起很大作用。表達于B細胞的粘附分子有ICAM-1(CD54)、LFA-l(CDlla/CDl8)等。（四）主要組織相容性復合體抗原(MHC)nB細胞不僅表達MHC類抗原，而且表達較高比例和密度的MHC類抗原。除了漿細胞外，從前B細胞至活化B細胞均表達MHC類抗原。B細胞表面的MHC類抗原在B細胞與T細胞相互協(xié)作時起重要作用，此外，還參與B細胞作為輔佐細胞的抗原提呈作用。（五）絲裂原的膜結合分子 n美洲商陸有絲分裂原(pokeweed mitogen, PWM)對T細胞和B細胞均有致有絲分裂作用。在小鼠，脂多糖(lipopolysaccharide