非洲豬瘟PCR檢測實驗室建設(shè)方案參考

1、非洲豬瘟PCR檢測實驗室建設(shè)方案參考非洲豬瘟病毒在入侵中國以來，中國的生豬產(chǎn)業(yè)鏈各個環(huán)節(jié)都受到很多影響，非洲豬瘟檢測實驗室的設(shè)計建設(shè)迫在眉睫。首先，生豬生產(chǎn)企業(yè)需要建立標準化的非洲豬瘟檢測實驗室。通過檢測豬的血清或唾液或環(huán)境土壤來判斷非洲豬瘟是否感染，通過豬場生物安全管理來截斷非洲豬瘟傳播，為豬場的順利生產(chǎn)提供安全保障。其次，定點屠宰企業(yè)需要建立標準化的非洲豬瘟檢測實驗室。通過屠宰場場外檢測，排除非洲豬瘟感染的生豬進入場內(nèi)，通過屠宰企業(yè)內(nèi)部實驗室檢測防止有非洲豬瘟感染的豬肉流入市場，檢測加工好的肉制品或分割肉來防止肉類加工食品流入市場，避免企業(yè)受到不可估量的經(jīng)濟損失。第三，各級畜牧局需要建立標

2、準化的非洲豬瘟檢測實驗室，來加強生豬養(yǎng)殖企業(yè)、生豬屠宰企業(yè)的管理，加強非洲豬瘟的防控。第四，肉類加工企業(yè)需要建立標準化的非洲豬瘟檢測實驗室。肉類加工企業(yè)，只要需要豬肉就需要檢測進場豬肉的非洲豬瘟檢測項目，防止有感染非洲豬瘟的肉品流入企業(yè)生產(chǎn)線，防止生產(chǎn)線被非洲豬瘟病毒污染，保障企業(yè)的利益不受影響。一、什么是PCR實驗室PCR是聚合酶鏈式反應(yīng)(PolymeraseChainReaction)的簡稱。聚合酶鏈式反應(yīng)也能夠當作一項極其重要的酶促合成DNA技術(shù)。PCR又稱為無細胞克隆系統(tǒng)或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增法，是基因擴增技術(shù)的一次重大革新，它可將極微量的靶DNA特異地擴增上百萬倍。聚

3、合酶鏈反應(yīng)（PCR）是在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板以特定引物為延伸起點，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。是一項DNA體外合成放大技術(shù)，能快速特異地在體外擴增任何目的DNAo可用于基因分離克隆，序列分析，基因表達調(diào)控，基因多態(tài)性研究等很多方面。一對合成DNA的引物經(jīng)過高溫變性、低溫退火和中溫延伸三個階段為一個循環(huán),每一次循環(huán)使特異區(qū)段的基因拷貝數(shù)放大一倍，一般樣品是經(jīng)過30次循環(huán)，最終使基因放大了數(shù)百萬倍；將擴增產(chǎn)物進行電泳，經(jīng)漠化乙錠染色，在紫外燈照射下肉眼能見到擴增特異區(qū)段的DNA帶。二、PCR實驗室設(shè)計原則：1、非洲豬瘟檢測實驗室的

4、選址：符合國家檢測實驗室的相關(guān)規(guī)定，具體適用于屠宰場來說，可選擇辦公樓或者獨立的實驗室空間，選址絕對不能和屠宰線相通，如果實驗室陽性對照污染，會污染整個屠宰生產(chǎn)線，勢必對屠宰場造成巨大的經(jīng)濟損失。個別不專業(yè)的實驗室設(shè)計建造公司因為不了解非洲豬瘟檢測實驗室的檢測流程，造成設(shè)計布局不合理，對后期開展工作造成很大的不便及生物安全隱患。2、主體結(jié)構(gòu)：當前實驗室的主體多為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均釆用鋁合金R50內(nèi)角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。并且彩鋼板結(jié)構(gòu)牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。3、標準的四區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)：將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增區(qū)及產(chǎn)

5、物分析檢測區(qū)四個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)，同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié)，使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。另外：PCR實驗室根據(jù)使用儀器的功能合理設(shè)置各個工作區(qū)域，如采用聚合酶聯(lián)反應(yīng)：則設(shè)置試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域，這是最常用的分區(qū)方式。樣品需要粉碎處理的，還需增設(shè)樣品粉碎區(qū)；若使用實時熒光PCR法：基因擴增區(qū)、基因產(chǎn)物分析區(qū)能夠合并在一個房間內(nèi)；釆用標本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的全自動化PCR分析儀，則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并為一個區(qū)域，所以

6、PCR實驗室原則上設(shè)置五個區(qū)或四個區(qū)或三個區(qū)或二個單獨的工作區(qū).核酸擴增前區(qū)和核酸擴增后區(qū)可設(shè)在一個房間內(nèi)，但必須在滿足下列要求的前提下：a. 核酸擴增前區(qū)實驗室內(nèi)設(shè)置兩個不同位置的實驗區(qū)，試劑配置在超凈工作臺中操作，樣品處理在生物安全柜內(nèi)操作。b. 在核酸擴增后區(qū)使用全封閉的擴增和檢測系統(tǒng)，如實時熒光PCR儀等。c. 每個實驗人員使用各自的試劑、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。d. 在實驗前后對操作區(qū)域和共享器具進行清潔及消毒。e. 各區(qū)域的試劑、器具、儀器和設(shè)備為該區(qū)專用，不得交叉使用。4、非洲豬瘟檢測實驗室的布局：非洲豬瘟檢測實驗室用的儀器為熒光定量PCR,所以核酸擴增和分析在一個區(qū)，實

7、驗室設(shè)計需要如下功能房間：PCR緩存走廊、帶緩存間的配液室、帶緩存間的樣品處理室、帶緩存間的核酸擴增分析區(qū)及實驗室用具消毒室。5、非洲豬瘟檢測實驗室生物安全保護：理論上講非洲豬瘟檢測實驗室是BSL-2生物安全實驗室，需要配置二級生物安全柜，推薦選擇70%外排，30%內(nèi)循環(huán)，各功能房間緩存設(shè)置更衣柜和消毒器，各區(qū)的實驗服專用，物料流通需要配置帶紫外線的互鎖的傳遞窗，實行人流物流分開設(shè)置。6、非洲豬瘟檢測實驗室消毒：在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈，供消毒用。在試新準備區(qū)和標本制備區(qū)還設(shè)置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。7、非洲豬瘟檢測實驗室機械連鎖不銹鋼傳遞窗：試劑和標

8、本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。8、非洲豬瘟檢測實驗室地面地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便于進行清掃，耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800mmx800mm）接縫需要小于2mm。9、非洲豬瘟檢測實驗室照明燈具要選用凈化燈具，能達到便于清洗、不積塵的特點。PCR實驗室布局PCR走廊及緩存間傳遞窗及觀察窗三、空氣流與壓差要求PCR實驗室的空氣流向必須嚴格按照試劑儲存和準備區(qū)-標本制備區(qū)一擴增區(qū)一擴增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進行，防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域。風速流向

9、不得混亂。為了保證房間內(nèi)的壓差和避免污染，應(yīng)在空調(diào)面板處寫清楚送風機和排風機的開啟順序和關(guān)閉順序，先后順序不得混亂?？諝鉂崈艏墑e不同的相鄰房間之間的靜壓差應(yīng)大于5帕，潔凈室（區(qū)）與室外大氣的靜壓差應(yīng)大于10帕，應(yīng)配備監(jiān)測靜壓差的設(shè)備，并定期監(jiān)控。一般情況下，試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓，以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入，造成污染；能夠通過控制進風風量大于排風風量達到正壓效果。核酸擴增室及產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負壓，以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品，能夠通過控制排風風量大于進風風量達到負壓效果。在理想情況下，PCR實驗室緩沖間內(nèi)，可設(shè)置正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)。PCR實

10、驗室進風由原有中央空調(diào)控制的要求將中央空調(diào)風口安裝到指定定點。四、實驗室設(shè)施要求：實驗室基礎(chǔ)設(shè)施設(shè)計：包括實驗室基礎(chǔ)裝修、實驗室凈化工程、實驗室供排水工程、實驗室電路系統(tǒng)。1）實驗室基礎(chǔ)裝修需要潔凈天花、地板、隔斷，合理設(shè)置緩存間及配置凈化門、觀察窗、傳遞窗等。2）實驗室凈化工程實驗室應(yīng)配備單獨送排風設(shè)施，試劑配置區(qū)、核酸提取區(qū)和擴增分析區(qū)應(yīng)配備凈化系統(tǒng)。3）實驗室供排水工程包括非手動水龍頭、不銹鋼或PP水池和緊急淋浴器及供排水管線管路。4）實驗室電路系統(tǒng)：根據(jù)儀器的功率配置合適的功率，特別注意高壓滅菌鍋的功率，注意實驗室用電安全。5）配備適用的應(yīng)急器材，如應(yīng)急照明設(shè)備、消防器材、意外事故處理

11、器材等。五、實驗室儀器及設(shè)備1）更衣室儀器及設(shè)備：更衣柜或掛衣架、鞋柜以及消毒器和烘干器。2）配液室儀器及設(shè)備：佰倫超凈工作臺、冰箱、小型離心機、旋渦振蕩器、微量移液器等。3）樣品處理室儀器及設(shè)備：離心機、組織研磨機、II級生物安全柜、恒溫水浴鍋、冰柜等、可移動紫外消毒器。4）核酸提取室儀器及設(shè)備：核酸提取儀、II級生物安全柜、恒溫水浴鍋、小型離心機、微量移液器、可移動紫外消毒器等。5）擴增分析區(qū)儀器及設(shè)備：熒光定量PCR儀、電腦、打印機、不間斷電源、可移動紫外消毒器等。6）消毒洗滌室：高壓滅菌器、干燥箱、器皿柜等。（一般配置參考）實時熒光定量PCR生物安全柜六、實驗室面積及設(shè)備間距一般來說各

12、房間的面積沒有嚴格要求，只需能放置所需儀器設(shè)備，并且便于人員操作即可，但是有生物安全柜的房間面積不能小于10平米，并且每增加一臺生物安全柜，房間就要增加10平米。各實驗室緩沖間的面積一般為1300*（1300或1500）mm為宜，并且緩沖間的面積不能大于實驗室房間面積的l/8o在做平面設(shè)計的時候，首先要考慮的因素是就是“安全”，實驗室是最易發(fā)生爆炸、火災(zāi)、毒氣泄露等的場所。我們在做平面設(shè)計的時候，應(yīng)盡量地要保持實驗室的通風流暢、逃生通道暢通。根據(jù)國際人體工程學(xué)的標準。我們做如下的劃分以供參照：實驗臺與實驗臺通道劃分標準（通道間隔用L表示）L>500mm時，一邊可站人操作；L>800

13、mm時，一邊可坐人操作；L>1200mm時，一邊可坐人，一邊可站人，中間不可過人；L>1500mm時，兩邊可坐人，中間可過人；L>1800mm時，兩邊可坐人，中間可過人可過儀器天平臺、儀器臺不宜離墻太近，離墻400mm為宜。為了在工作發(fā)生危險時易于疏散，實驗臺間的過道應(yīng)全部通向走廊。另：實驗室建筑層高宜為3.7米.4.0米為宜，凈高宜為2.7米.2.8米，有潔凈度、壓力梯度、恒溫恒濕等特殊要求的實驗室凈高宜為2.5米.2.7米（不包括吊頂）；實驗室走廊凈寬宜為2.5米-3.0米.普通實驗室雙門寬以1.1米.1.5米（不對稱對開門）為宜，單門寬以0.8米.0.9米為宜。七、潔凈

14、裝修要求潔凈室（區(qū)）的內(nèi)表面應(yīng)平整光滑、無裂縫、接口嚴密、無顆粒物脫落，并能耐受清洗和消毒，墻壁與地面的交界處宜成弧形或釆取其他措施，以減少灰塵積聚和便于清潔潔凈室（區(qū)）內(nèi)各種管道、燈具、風口以及其他公用設(shè)施，在設(shè)計和安裝時應(yīng)考慮使用中避免出現(xiàn)不易清潔的部位。潔凈室（區(qū)）的窗戶、天棚及進入室內(nèi)的管道、風口、燈具與墻壁或天棚的連接部位均應(yīng)密封。八、人流路徑與物流路徑進入實驗室區(qū)域工作人員應(yīng)該按照以下路徑：公共清潔區(qū)更衣間（更換潔凈服）緩沖間污染實驗區(qū)工作人員退出實驗室的路徑為：污染試驗區(qū)一緩沖間一淋浴間（有條件的可設(shè)置）-更衣間公共清潔區(qū)所有的物品進入實驗區(qū)必須經(jīng)過雙扉互鎖傳遞窗，利用傳遞窗消毒

15、后才可進入，實驗室內(nèi)所有物品的也必須經(jīng)過傳遞窗才能夠傳遞到實驗室以外的清潔公共區(qū)。門的開啟方向?qū)嶒炇医ㄖ痈咭藶?.7米.4.0米為宜，PCR實驗室凈高宜為2.5米.2.7米（不包括吊頂）；實驗室走廊凈寬宜為2.5米.3.0米.普通實驗室雙門寬以1.1米-1.5米（不對稱對開門）為宜,單門寬以0.8米.0.9米為宜。一般實驗室門主要向里開，但如有危險的房間，房門應(yīng)朝外開，房門材質(zhì)最好選擇壓力玻璃。有壓差梯度的房間，門的開啟方向應(yīng)朝向正壓方向一側(cè)開啟；考慮到消防安全，對于那些主要逃生門的開啟方向應(yīng)朝向清潔區(qū)方向開啟。九、工作服要求在凈化車間內(nèi)工作的人員應(yīng)穿著符合要求的工作服。工作服的選材、式樣及穿戴方式應(yīng)與生產(chǎn)操作和空氣潔凈度級別要求相適合，并不得混用。潔凈工作服的質(zhì)地應(yīng)光滑、不產(chǎn)生靜電、不脫落纖維和顆粒性物質(zhì)。無