實(shí)驗(yàn)一生物組中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定

1、教學(xué)內(nèi)容：教學(xué)內(nèi)容：知識(shí)點(diǎn)知識(shí)點(diǎn)可溶性還原可溶性還原糖糖 脂肪脂肪 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 幻燈片幻燈片實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 幻燈片幻燈片7 幻燈片幻燈片8 幻燈片幻燈片9 成功關(guān)鍵成功關(guān)鍵注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 幻燈片幻燈片10 幻燈片幻燈片11 幻燈片幻燈片12 幻燈片幻燈片13討論練習(xí)討論練習(xí) 幻燈片幻燈片14 幻燈片幻燈片16作業(yè)作業(yè) 幻燈片幻燈片19教學(xué)目標(biāo)：教學(xué)目標(biāo)： 知識(shí)目標(biāo)：闡明實(shí)驗(yàn)原理知識(shí)目標(biāo)：闡明實(shí)驗(yàn)原理顏色反應(yīng)，識(shí)記顏色反應(yīng)，識(shí)記和區(qū)分用于可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)鑒定的和區(qū)分用于可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)鑒定的試劑及產(chǎn)生的特定顏色，初步掌握鑒定上述化合試劑及產(chǎn)生的特定顏色，

2、初步掌握鑒定上述化合物的基本方法，學(xué)會(huì)描述實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，掌握物的基本方法，學(xué)會(huì)描述實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，掌握NaOH溶溶液和液和CuSO4溶液的使用方法。溶液的使用方法。 能力目標(biāo)：培養(yǎng)學(xué)生主動(dòng)獲取知識(shí)，應(yīng)用知能力目標(biāo)：培養(yǎng)學(xué)生主動(dòng)獲取知識(shí)，應(yīng)用知識(shí)分析現(xiàn)象，歸納總結(jié)的能力，培養(yǎng)學(xué)生實(shí)際操識(shí)分析現(xiàn)象，歸納總結(jié)的能力，培養(yǎng)學(xué)生實(shí)際操作的能力及從現(xiàn)象出發(fā)探求事物本質(zhì)的能力。作的能力及從現(xiàn)象出發(fā)探求事物本質(zhì)的能力。 情感與價(jià)值目標(biāo)：通過親手實(shí)驗(yàn)體驗(yàn)科學(xué)家情感與價(jià)值目標(biāo)：通過親手實(shí)驗(yàn)體驗(yàn)科學(xué)家嚴(yán)謹(jǐn)治學(xué)的科學(xué)態(tài)度，培養(yǎng)實(shí)事求是的世界觀。嚴(yán)謹(jǐn)治學(xué)的科學(xué)態(tài)度，培養(yǎng)實(shí)事求是的世界觀。一、實(shí)驗(yàn)原理一、實(shí)驗(yàn)原理1.可溶性還原糖可

3、溶性還原糖 生物組織中普遍存在的可溶性糖類較多，有葡萄糖、生物組織中普遍存在的可溶性糖類較多，有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子內(nèi)都含有游離的果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子內(nèi)都含有游離的具還原性的半縮醛羥基，因此叫做還原糖；蔗糖分子內(nèi)具還原性的半縮醛羥基，因此叫做還原糖；蔗糖分子內(nèi)沒有，為非還原糖。實(shí)驗(yàn)中所用的斐林試劑，只能鑒定沒有，為非還原糖。實(shí)驗(yàn)中所用的斐林試劑，只能鑒定生物組織中可溶性還原糖，而不能鑒定可溶性非還原糖生物組織中可溶性還原糖，而不能鑒定可溶性非還原糖及不能溶解的糖。斐林試劑為及不能溶解的糖。斐林試劑為0.1g/mL的的NaOH和和 0.05g/mL的的CuSO

4、配制而成的淡藍(lán)色配制而成的淡藍(lán)色Cu(OH)2沉沉淀的懸濁液，葡萄糖溶液在加入斐林試劑后，在加熱條淀的懸濁液，葡萄糖溶液在加入斐林試劑后，在加熱條件下件下Cu(OH)2被還原為磚紅色的被還原為磚紅色的Cu2O沉淀，而葡萄沉淀，而葡萄糖氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式為糖氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式為:-CHO+Cu(OH)2-COOH+Cu2O磚紅色磚紅色2.脂肪的鑒定脂肪的鑒定 蘇丹蘇丹(蘇丹蘇丹)為一種脂肪染色劑為一種脂肪染色劑(易溶解于易溶解于酒精，不溶解于水酒精，不溶解于水)。蘇丹。蘇丹染液遇脂肪的顏色反染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為橘黃色，蘇丹應(yīng)為橘黃色，蘇丹染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為紅染液遇脂肪的顏色反應(yīng)

5、為紅色。其反應(yīng)式為色。其反應(yīng)式為: 脂肪脂肪蘇丹蘇丹 （蘇丹（蘇丹） 橘黃色橘黃色（紅色紅色）3.蛋白質(zhì)的鑒定蛋白質(zhì)的鑒定 將尿素加熱，兩分子尿素放出一分子氨而縮合成雙將尿素加熱，兩分子尿素放出一分子氨而縮合成雙縮脲。反應(yīng)式為縮脲。反應(yīng)式為: 雙縮脲在堿性環(huán)境中能和硫酸銅結(jié)合成紅紫色的雙縮脲在堿性環(huán)境中能和硫酸銅結(jié)合成紅紫色的絡(luò)化物。蛋白質(zhì)分子中含有的肽鍵結(jié)構(gòu)與雙縮脲結(jié)構(gòu)相絡(luò)化物。蛋白質(zhì)分子中含有的肽鍵結(jié)構(gòu)與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似，因此，蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)：似，因此，蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)：-CO NH -（類似雙縮尿（類似雙縮尿H2NOC - NH - CONH2結(jié)構(gòu)）結(jié)構(gòu)）

6、酸性條件下與酸性條件下與Cu2+作用形成作用形成紫色絡(luò)合物紫色絡(luò)合物雙縮尿反應(yīng)雙縮尿反應(yīng)選材：含糖量較高的選材：含糖量較高的白色或近于白色白色或近于白色，蘋果、梨最好，蘋果、梨最好 。 二、實(shí)驗(yàn)步驟與現(xiàn)象二、實(shí)驗(yàn)步驟與現(xiàn)象1.可溶性還原糖可溶性還原糖 制備組織樣液：制備組織樣液：制漿：去皮、切塊、研磨制漿：去皮、切塊、研磨過濾：（用單層紗布）過濾：（用單層紗布）取液：取液：（mL）顯色反應(yīng)顯色反應(yīng) 現(xiàn)象：現(xiàn)象： 2.脂肪的鑒定脂肪的鑒定 取材：花生種子（浸泡取材：花生種子（浸泡h），去皮，將子葉削成薄片），去皮，將子葉削成薄片 制片：制片：選取最薄的薄片移至載玻片中央選取最薄的薄片移至載玻片中

7、央在薄片上滴加蘇丹在薄片上滴加蘇丹 染液染液2 3滴，染色滴，染色min滴加體積分?jǐn)?shù)為滴加體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精溶液的酒精溶液12滴，洗去浮色滴，洗去浮色吸去余液，滴吸去余液，滴1-2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片滴蒸餾水，蓋上蓋玻片觀察：觀察：先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡觀察先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡觀察結(jié)果：結(jié)果：有被染成有被染成橘黃色橘黃色的脂肪微粒的脂肪微粒3.蛋白質(zhì)的鑒定蛋白質(zhì)的鑒定 選材與制備選材與制備組織樣液：組織樣液：黃豆組織樣液（或雞蛋白稀釋液）黃豆組織樣液（或雞蛋白稀釋液）黃豆浸泡黃豆浸泡 去皮去皮切片切片研磨研磨過濾過濾濾液濾液 顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)現(xiàn)象：現(xiàn)象

8、：無色無色紫色或紫紅色紫色或紫紅色三、實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵與注意事項(xiàng)：三、實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵與注意事項(xiàng)：1.實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于實(shí)驗(yàn)材料的選擇：實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于實(shí)驗(yàn)材料的選擇： 在做可溶性還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn)中，最理想的實(shí)驗(yàn)在做可溶性還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn)中，最理想的實(shí)驗(yàn)材料是含糖量較高的生物組織材料是含糖量較高的生物組織(或器官或器官)，而且組織的顏，而且組織的顏色較淺，最好是白色或近于白色的植物組織，這樣可以避色較淺，最好是白色或近于白色的植物組織，這樣可以避免材料自身顏色對(duì)實(shí)驗(yàn)變化顏色的掩蓋。經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，顏免材料自身顏色對(duì)實(shí)驗(yàn)變化顏色的掩蓋。經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，顏色反應(yīng)的明顯程度依次為蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜。

9、色反應(yīng)的明顯程度依次為蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜。 在做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)材料最好選用富含在做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)材料最好選用富含脂肪的種子，且徒手切片要成功，要求實(shí)驗(yàn)技能較高，不脂肪的種子，且徒手切片要成功，要求實(shí)驗(yàn)技能較高，不妨改成刮取花生子葉泥制作臨時(shí)裝片，易做，效果又好。妨改成刮取花生子葉泥制作臨時(shí)裝片，易做，效果又好。 在做糖和蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好選用富含蛋白質(zhì)在做糖和蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好選用富含蛋白質(zhì)的生物組織，植物材料常用的是大豆，動(dòng)物材料常用的是的生物組織，植物材料常用的是大豆，動(dòng)物材料常用的是雞蛋，鑒定之前需要留出一部分樣液，以便與鑒定后的樣雞蛋，鑒定之前需要留出一部

10、分樣液，以便與鑒定后的樣液的顏色做比較，這樣可增強(qiáng)說服力。液的顏色做比較，這樣可增強(qiáng)說服力。 (1)斐林試劑很不穩(wěn)定，故應(yīng)將組成斐林試劑的甲液斐林試劑很不穩(wěn)定，故應(yīng)將組成斐林試劑的甲液(0.1g/mL的的NaOH溶液溶液)和乙液和乙液(0.05g/mL的的CuSO溶液溶液)分別配制、儲(chǔ)存，使用時(shí)，再臨時(shí)配制，分別配制、儲(chǔ)存，使用時(shí)，再臨時(shí)配制，將將45滴乙液滴入滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。切勿甲液中，配完后立即使用。切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。將甲液和乙液分別加入組織樣液中。 (2) 鑒定可溶性還原糖，加熱試管時(shí)，應(yīng)該用試管夾鑒定可溶性還原糖，加熱試管時(shí)，應(yīng)該用試管夾夾住試

11、管上部，放入盛開水的大燒杯加熱；注意試管底部夾住試管上部，放入盛開水的大燒杯加熱；注意試管底部不接觸燒杯底部，同時(shí)試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免試管不接觸燒杯底部，同時(shí)試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免試管內(nèi)溶液沸騰時(shí)沖出試管，造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過于內(nèi)溶液沸騰時(shí)沖出試管，造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過于沸騰，可以提起試管夾，使試管與沸水接觸面減少，以免沸騰，可以提起試管夾，使試管與沸水接觸面減少，以免溶液溢出。溶液溢出。 A.可溶性還原糖可溶性還原糖 2.注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： (3) 在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，若用花生種子作實(shí)驗(yàn)材在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，若用花生種子作實(shí)驗(yàn)材料，必須提前浸泡料，必須提前浸泡34小時(shí)

12、，浸泡時(shí)間短了，不容易小時(shí)，浸泡時(shí)間短了，不容易切片，浸泡時(shí)間過長(zhǎng)，則組織太軟，切下的薄片不易切片，浸泡時(shí)間過長(zhǎng)，則組織太軟，切下的薄片不易成形，切片要盡可能的薄。成形，切片要盡可能的薄。 (4) 染色后一定要用染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色，的酒精溶液洗去浮色，染色和洗浮色時(shí)間不宜過長(zhǎng)（否則酒精將脂肪溶解影染色和洗浮色時(shí)間不宜過長(zhǎng)（否則酒精將脂肪溶解影響實(shí)驗(yàn)效果），觀察時(shí)找最薄處最好只有響實(shí)驗(yàn)效果），觀察時(shí)找最薄處最好只有12層細(xì)胞。層細(xì)胞。B.脂肪的鑒定脂肪的鑒定 (5)在蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，若用蛋白質(zhì)作實(shí)驗(yàn)在蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，若用蛋白質(zhì)作實(shí)驗(yàn)材料，必須稀釋，如果稀釋不夠，與雙縮

13、脲試劑發(fā)材料，必須稀釋，如果稀釋不夠，與雙縮脲試劑發(fā)生反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不徹底，且生反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不徹底，且試管不易洗刷干凈。試管不易洗刷干凈。 (6)雙縮脲試劑的使用，應(yīng)先雙縮脲加試劑雙縮脲試劑的使用，應(yīng)先雙縮脲加試劑A(0.1g/mL的的NaOH溶液溶液)，造成堿性的反應(yīng)環(huán)，造成堿性的反應(yīng)環(huán)境，再加試劑境，再加試劑B(0.01g/mL的的CuSO溶液溶液)。C.蛋白質(zhì)的鑒定蛋白質(zhì)的鑒定 1結(jié)論：上述實(shí)驗(yàn)證明蘋果果肉中、花生種子中、結(jié)論：上述實(shí)驗(yàn)證明蘋果果肉中、花生種子中、黃豆組織中各存在什么樣物質(zhì)黃豆組織中各存在什么樣物質(zhì)? 答：答： 。 2討論：為什么根據(jù)

14、某些化學(xué)反應(yīng)能夠使生物組討論：為什么根據(jù)某些化學(xué)反應(yīng)能夠使生物組織中的有關(guān)有機(jī)物產(chǎn)生固定的顏色反應(yīng)可以鑒定生物織中的有關(guān)有機(jī)物產(chǎn)生固定的顏色反應(yīng)可以鑒定生物組織有糖、脂肪、蛋白質(zhì)的存在組織有糖、脂肪、蛋白質(zhì)的存在? 四、討論與練習(xí)：四、討論與練習(xí)：可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì) 因?yàn)槟承┗瘜W(xué)試劑與生物組織中的化合物發(fā)生一因?yàn)槟承┗瘜W(xué)試劑與生物組織中的化合物發(fā)生一定的化學(xué)反應(yīng)后，可產(chǎn)生新的化合物，而這種化合物定的化學(xué)反應(yīng)后，可產(chǎn)生新的化合物，而這種化合物是有固定的顏色的。因此，根據(jù)待檢測(cè)物與某些化學(xué)是有固定的顏色的。因此，根據(jù)待檢測(cè)物與某些化學(xué)試劑反應(yīng)的固有顏色，如磚紅色、

15、橘黃色、紫色等。試劑反應(yīng)的固有顏色，如磚紅色、橘黃色、紫色等?？梢澡b定生物組織中存在有糖、脂肪、蛋白質(zhì)?？梢澡b定生物組織中存在有糖、脂肪、蛋白質(zhì)。 各種可供實(shí)驗(yàn)的材料各種可供實(shí)驗(yàn)的材料梨梨 黃桃黃桃 胡蘿卜胡蘿卜 黃豆黃豆 花生種子花生種子 小麥種子小麥種子 其中適合于鑒定糖的是其中適合于鑒定糖的是 ，理由是，理由是梨的組織梨的組織細(xì)胞細(xì)胞 ，你打算，你打算用什么試劑鑒定用什么試劑鑒定? 。 小麥種子不如花生種子更適合用來鑒定脂肪，這小麥種子不如花生種子更適合用來鑒定脂肪，這是因?yàn)槭且驗(yàn)?，你打算用什么試劑鑒定你打算用什么試劑鑒定? . 適合于鑒定蛋白質(zhì)的是適合于鑒定蛋白質(zhì)的是 ，理由是，理由

16、是 ，鑒定所用的試劑是，鑒定所用的試劑是 。 3. 討論討論: 做生物組織中可溶性還原糖、脂肪、做生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇不同蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇不同的實(shí)驗(yàn)材料。清根據(jù)下表所列各種材料回答問題：的實(shí)驗(yàn)材料。清根據(jù)下表所列各種材料回答問題：梨梨 顏色為白色，并且糖含量較高顏色為白色，并且糖含量較高 斐林試劑或班氏試劑斐林試劑或班氏試劑脂肪含量不如花生高，也不容易做切片脂肪含量不如花生高，也不容易做切片 用蘇丹用蘇丹或蘇丹或蘇丹試劑試劑黃豆和花生黃豆和花生 蛋白質(zhì)含量高蛋白質(zhì)含量高 雙縮脲試劑雙縮脲試劑1、某些單子葉植物，如韭菜、鳶

17、尾的葉子內(nèi)含有大某些單子葉植物，如韭菜、鳶尾的葉子內(nèi)含有大量的可溶性還原糖，但這些單子葉植物的葉子不宜作實(shí)量的可溶性還原糖，但這些單子葉植物的葉子不宜作實(shí)驗(yàn)材料，原因是：驗(yàn)材料，原因是：這些葉子的顏色較深，對(duì)還原性這些葉子的顏色較深，對(duì)還原性糖與斐林試劑的顏色反應(yīng)起遮蔽作用糖與斐林試劑的顏色反應(yīng)起遮蔽作用 、下列哪組試劑在使用過程中，必須加熱：、下列哪組試劑在使用過程中，必須加熱：A.斐林試劑鑒定可溶性還原糖的過程中斐林試劑鑒定可溶性還原糖的過程中B.蘇丹蘇丹染液在鑒定動(dòng)物組織中的脂肪時(shí)染液在鑒定動(dòng)物組織中的脂肪時(shí)C.雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)時(shí)雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)時(shí)D.碘化鉀溶液鑒定淀粉時(shí)碘化鉀溶

18、液鑒定淀粉時(shí) （）（）課堂課堂練習(xí)練習(xí): :、某學(xué)生在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，在顯微鏡下觀、某學(xué)生在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，在顯微鏡下觀察花生子葉切片，當(dāng)轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器時(shí)，有一部分細(xì)胞察花生子葉切片，當(dāng)轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器時(shí)，有一部分細(xì)胞看的清楚，另一部分較模糊，這是由于看的清楚，另一部分較模糊，這是由于 （ ）A.反光鏡未調(diào)節(jié)好反光鏡未調(diào)節(jié)好 B.標(biāo)本切的厚薄不均標(biāo)本切的厚薄不均 C.細(xì)調(diào)節(jié)器未調(diào)節(jié)好細(xì)調(diào)節(jié)器未調(diào)節(jié)好D.顯微鏡物鏡損壞顯微鏡物鏡損壞 、蘇丹、蘇丹溶液的配制的方法是：溶液的配制的方法是： 稱取稱取0.1g蘇蘇丹丹干粉，溶于干粉，溶于100mL酒精的體積分?jǐn)?shù)為酒精的體積分?jǐn)?shù)為95溶液溶液中，待全部溶解

19、后再使用，為什么用酒精而不用蒸中，待全部溶解后再使用，為什么用酒精而不用蒸餾水？餾水？蘇丹蘇丹染液易溶解于酒精中染液易溶解于酒精中 ，不易溶解于水。，不易溶解于水。、鑒定蛋白質(zhì)樣品時(shí)加雙縮脲試劑的正確做法是、鑒定蛋白質(zhì)樣品時(shí)加雙縮脲試劑的正確做法是 A先加先加A液，混合后再加液，混合后再加B液搖勻觀察（）液搖勻觀察（）B先加先加B液，混合后再加液，混合后再加A液搖勻觀察液搖勻觀察CA、B混合后加入，搖勻觀察混合后加入，搖勻觀察DA、B液同時(shí)加入樣液，搖勻后觀察液同時(shí)加入樣液，搖勻后觀察 、在生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒、在生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，對(duì)實(shí)驗(yàn)材料的選擇中，錯(cuò)誤的是（）定實(shí)驗(yàn)中，對(duì)實(shí)驗(yàn)材料的選擇中，錯(cuò)誤的是（）A、甘蔗莖的薄壁組織、甜菜的塊根等，都含有較多、甘蔗莖的薄壁組織、甜菜的塊根等，都含有較多的糖且近于白色，因此可用于進(jìn)行可溶性還原糖的鑒定的糖且近于白色，因此