培訓(xùn)體系化驗(yàn)員質(zhì)監(jiān)員培訓(xùn)講義儀器分析法

1、培訓(xùn)體系）化驗(yàn)員質(zhì)監(jiān)員培訓(xùn)講義儀器分析法化驗(yàn)員、質(zhì)監(jiān)員培訓(xùn)講義第三部分儀器分析法第壹章紫外分光光度法壹、原理可見(jiàn)光、紫外線照射某些物質(zhì)，主要是由于物質(zhì)分子中價(jià)電子能級(jí)躍遷對(duì)輻射的吸收，而產(chǎn) 生化合物的可見(jiàn)紫外吸收光譜?；谖镔|(zhì)對(duì)光的選擇性吸收的特性而建立分光光度法或稱吸 收光譜法的分析方法。它是以朗伯 比耳定律為基礎(chǔ)。1朗伯比耳定律 A=lg -=ECLT式中 A 為吸收度；T 為透光率；E 為吸收系數(shù)，采用的表示方法是（ E ），其物理意義為當(dāng)溶液濃度為 1% （ g/ml ），液層厚度為 1cm 時(shí)的吸收度數(shù)值；C為 100ml 溶液中所含被測(cè)物質(zhì)的重量（按干燥品或無(wú)水物計(jì)算），g；L 為

2、液層厚度， cm 。二、使用范圍凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，根據(jù)于特定吸收波長(zhǎng)處所測(cè)得的吸收度，可用 于藥品的鑒別、純度檢查及含量測(cè)定。三、儀器可見(jiàn)-紫外分光光度計(jì)。 其應(yīng)用波長(zhǎng)范圍為 200 400nm 的紫外光區(qū)、 400 850nm 的可見(jiàn) 光區(qū)。主要由輻射源（光源） 、色散系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、吸收池、數(shù)據(jù)處理機(jī)、自動(dòng)記錄器及 顯示器等部件組成。本儀器是根據(jù)相對(duì)測(cè)量的原理工作的， 即先選定某壹溶劑 （或空氣、 試樣）作為標(biāo)準(zhǔn) （空 白或稱參比）溶液，且認(rèn)為它的透光率為 100 （或吸收度為 0 ），而被測(cè)的試樣透光率（或吸收度）是相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)溶液而言，實(shí)際上就是由出射狹縫射出的單色

3、光，分別通過(guò)被測(cè)試樣 和標(biāo)準(zhǔn)溶液，這倆個(gè)光能量之比值，就是于壹定波長(zhǎng)下對(duì)于被測(cè)試樣的透光率（或吸收度） 本儀器可精密測(cè)定具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物、有色物質(zhì)或于適當(dāng)條件下 能和某些試劑作用生成有色物的物質(zhì)。使用前應(yīng)校正測(cè)定波長(zhǎng)且按儀器說(shuō)明書進(jìn)行操作。四、儀器的校正1. 波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度試驗(yàn)以儀器顯示的波長(zhǎng)數(shù)值和單色光的實(shí)際波長(zhǎng)值之間誤差表示，應(yīng)于± 1.0nm 范圍內(nèi)?？捎脙x器中氘燈的 486.02nm 和 656.10nm 譜線進(jìn)行校正。2. 吸收度的準(zhǔn)確度試驗(yàn)3. 雜散光的試驗(yàn)4. 波長(zhǎng)重現(xiàn)性試驗(yàn)5. 分辨率試驗(yàn)五、測(cè)定方法1. 對(duì)照品比較法（ 1 ）按各品種項(xiàng)下的方法，分

4、別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分標(biāo)示量的100 ±10% ，所用溶劑也應(yīng)完全壹致，于規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度后，按下式計(jì)算含量，即得。（2）計(jì)算式A 樣 ×G 對(duì) / 稀釋倍數(shù)× 100 ×1A 對(duì)×G 樣/稀釋倍數(shù)× 100 ×12. 吸收系數(shù)法（ 1 ）按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，于規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度，再以該品種于 規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測(cè)定時(shí)，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。（2）計(jì)算式A樣含量（ %）= -×100%G

5、樣/稀釋倍數(shù)× （E）對(duì)×100 ×13. 計(jì)算分光光度法采用計(jì)算分光光度法應(yīng)慎重。本法有多種，使用時(shí)均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處于吸收曲線的陡然上升或下降的部位測(cè)定時(shí)，波長(zhǎng)的微小變化可能對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯 著影響，故對(duì)照品和供試品測(cè)試條件應(yīng)盡可能壹致。若測(cè)定時(shí)不用對(duì)照品，如維生素 A 測(cè)定 法，則應(yīng)于測(cè)定時(shí)對(duì)儀器作仔細(xì)的校正和檢定。六、注意事項(xiàng)1. 空白溶液和供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應(yīng)預(yù)先過(guò)濾，且棄去初濾液。2. 測(cè)定時(shí)， 除另有規(guī)定外， 應(yīng)以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對(duì)照， 采用 1cm 的石英吸 收池。3. 于規(guī)定的吸收峰波

6、長(zhǎng)± 2nm 以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)位置是 否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長(zhǎng)應(yīng)于該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)± 2nm 以內(nèi)；否則應(yīng)考慮該 試樣的真?zhèn)巍⒓兌纫约皟x器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度，且以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。4. 壹般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以于0.3 0.7 之間的誤差較小。5. 吸收池應(yīng)選擇配對(duì)，否則要引入測(cè)定誤差。于規(guī)定波長(zhǎng)下倆個(gè)吸收池的透光率相差小于 0.5 的吸收池作配對(duì)，于必要的情況時(shí)，須于最終測(cè)量扣除吸收池間的誤差修正值。6. 由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再 計(jì)算含量。7. 儀器的接地必須良

7、好， 壹切裸露的零件對(duì)地電位不得超過(guò) 24 伏（測(cè)電筆的氖管不得發(fā)亮）8. 于使用過(guò)程中，如需開(kāi)啟試樣室蓋時(shí)或暫時(shí)停止測(cè)試時(shí)，必須及時(shí)推入光門鈕桿（使光電 管前光門關(guān)閉） ，保護(hù)光電管，以防止光電管受強(qiáng)光或長(zhǎng)時(shí)間照射而損壞。9. 于測(cè)定時(shí)或改測(cè)其它檢品時(shí)，應(yīng)用待測(cè)溶液沖洗吸收池3 4 次，用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨損） 。10. 取吸收池時(shí)， 應(yīng)拿毛玻璃倆面，切忌用手拿捏透光面， 以免粘上油污。使用完后及時(shí)用測(cè) 定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用干凈綢布或擦鏡紙擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防塵 保存。11. 若吸收池內(nèi)外壁沾污，倆池差較大的處理。（ 1 ）可用

8、綢布纏于扁竹條外或用脫脂棉纏于細(xì)玻璃棒上蘸上乙醇，輕輕摩擦，再用純化水 沖凈。（2）如上述方法處理不好，必要時(shí)可用重鉻酸鉀-硫酸洗液泡洗 1 2 分鐘，用自來(lái)水沖凈，再用純化水沖凈。（3）不得用毛刷刷洗或硬物拭擦，以防止表面光潔度受損影響正常使用。12. 請(qǐng)務(wù)必注意經(jīng)常保持硅膠的干燥， 目的是保護(hù)光學(xué)元件和光電放大器系統(tǒng)不致受潮損壞而 影響儀器的正常工作，如發(fā)現(xiàn)有的硅膠由藍(lán)色變?yōu)榉奂t色，應(yīng)立即更換。該儀器干燥劑筒有 倆個(gè)：壹個(gè)是裝于放大器暗盒上，另壹個(gè)裝于單色光器暗盒上。13. 于更換硅膠干燥劑時(shí)，應(yīng)關(guān)閉切斷電源。14. 于停止工作期間，主機(jī)試樣室內(nèi)應(yīng)放入袋裝或筒裝硅膠干燥劑。用防塵罩罩住整個(gè)

9、儀器， 且于防塵罩內(nèi)放數(shù)袋防潮硅膠。15. 儀器于操作中， 狹縫的寬度應(yīng)從小逐漸開(kāi)大。 若狹縫過(guò)大， 由于進(jìn)入光電管的光能量強(qiáng)度 過(guò)大，將會(huì)使放大器輸出信號(hào)達(dá)到飽和，以至數(shù)字顯示出溢出（即數(shù)字閃爍或示 1 不變）。 這不是儀器有故障。16. 將波長(zhǎng)旋轉(zhuǎn)放于 625nm ，鋏縫關(guān)閉于 0.02nm 附近，選擇按鍵恢復(fù)于停止工作部位（即 三個(gè)鍵均彈出） 。17. 搬動(dòng)儀器時(shí)應(yīng)搬于主體端， 不要搬于試樣室和光電管盒端以及光源燈室部位， 以防止儀器 狹縫或光路部件受力而發(fā)生變形。且于搬動(dòng)或運(yùn)輸時(shí)，應(yīng)將可動(dòng)部分固定，如各旋鈕可用膠 布貼住，狹縫位置開(kāi)大些，然后固定，不要關(guān)小狹縫，以免運(yùn)輸時(shí)振動(dòng)使狹縫刀口

10、受損壞。18. 儀器的光柵、反射鏡絕對(duì)不能擦拭，否則將損壞儀器光學(xué)表面，增加雜散光。19. 儀器經(jīng)過(guò)搬動(dòng)請(qǐng)及時(shí)檢查且糾正波長(zhǎng)精度， 為保證測(cè)定的準(zhǔn)確性請(qǐng)經(jīng)常校準(zhǔn)波長(zhǎng)精度。 如 有異常，應(yīng)立即方案質(zhì)量保證部，但不得擅自調(diào)整，且及時(shí)做好記錄。七、結(jié)果計(jì)算AE（供試品） = CLE （供試品）含量（ %）= - ×100%E（標(biāo)準(zhǔn)值或?qū)φ掌罚┌恕⒃试S差 儀器分析方法的誤差限度，除另有規(guī)定外，其相對(duì)偏差應(yīng)于±（2.0 3.0）% 。第二章比色法壹、原理及適用范圍 于可見(jiàn)光區(qū)，除某些物質(zhì)有吸收外，很多物質(zhì)本身且沒(méi)有吸收，但可于壹定條件下加入顯色 試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后，根據(jù)顏色深淺

11、和濃度成正比關(guān)系，則可用比色法測(cè)定含量。二、儀器可見(jiàn)分光光度計(jì)（或比色計(jì)）其應(yīng)用波長(zhǎng)范圍為 400 850nm 的可見(jiàn)光區(qū)。主要由輻射源 （光源）、色散系統(tǒng)（或?yàn)V光片） 、檢測(cè)器系統(tǒng)、顯示系統(tǒng)、記錄器及吸收池等部件組成。使 用前應(yīng)校正測(cè)定波長(zhǎng)且按儀器說(shuō)明書進(jìn)行操作。三、儀器的校正 按照紫外分光光度法項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定及按儀器說(shuō)明書要求進(jìn)行校正。波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度應(yīng)于± 3nm 范圍內(nèi)。四、測(cè)定方法1. 用比色法測(cè)定時(shí)，應(yīng)取對(duì)照品同時(shí)操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積 的溶劑代替對(duì)照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，且用同樣方法處理。于規(guī) 定的波長(zhǎng)處測(cè)定對(duì)照品和供試品溶液

12、的吸收度后，按紫外分光光度法項(xiàng)下“對(duì)照品比較法” 的計(jì)算式計(jì)算含量。2. 當(dāng)吸收度和濃度關(guān)系不呈線性時(shí)， 應(yīng)取數(shù)份梯度量的對(duì)照品溶液， 用溶劑補(bǔ)充至同壹體積， 顯色后測(cè)定各份溶液的吸收度，然后以吸收度和相應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)供試品的 吸收度于標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出其含量。三、注意事項(xiàng) 測(cè)定時(shí)，應(yīng)取對(duì)照品平行操作，使所用試劑用量、反應(yīng)溫度、酸堿度、反應(yīng)時(shí)間等完全壹致， 對(duì)隨時(shí)間變化影響顯色的品種應(yīng)準(zhǔn)確控制讀數(shù)時(shí)間，操作時(shí)應(yīng)注意避光。第三章高效液相色譜法壹、原理高效液相色譜法是用高壓輸液泵將具有不同極性的單壹溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相，壓入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入供試品，由流

13、動(dòng)相帶入柱內(nèi)，于柱內(nèi)各成分被分離后，依次進(jìn)入檢測(cè)器，色譜信號(hào)由記錄儀或積分儀記錄。二、適用范圍高效液相色譜法是壹種分離分析方法，適用于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物以及離子型化合物等的定性、定量分析。中國(guó)藥典主要用于藥品的含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì) 檢查、雜質(zhì)限度檢查和鑒別等。三、儀器高效液相色譜儀主要由輸液泵系統(tǒng)、進(jìn)樣器系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、記錄器、顯示器及數(shù)據(jù) 處理機(jī)（或兼有組分收集系統(tǒng)）等組成。使用時(shí)應(yīng)按儀器的說(shuō)明書進(jìn)行操作。四、儀器的校正1. 高效液相色譜儀的柱箱控溫精度、基線噪聲、基線漂移、靈敏度或檢測(cè)限、線性范圍的檢 定均按儀器說(shuō)明書的技術(shù)要求進(jìn)行校驗(yàn)，應(yīng)符合規(guī)定。2. 以紫

14、外 - 可見(jiàn)光檢測(cè)器、 熒光檢測(cè)器、 差示折光檢測(cè)器為檢測(cè)器的實(shí)驗(yàn)室通用液相色譜儀的檢定，所用各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)使用經(jīng)國(guó)家技術(shù)監(jiān)督部門批準(zhǔn)頒發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。具體校正方法和主要技術(shù)指標(biāo)見(jiàn)“高效液相色譜儀檢測(cè)器的校驗(yàn)” 。3. 泵的耐壓試驗(yàn)4. 泵流量設(shè)定值誤差、流量穩(wěn)定性誤差的試驗(yàn)5. 柱恒溫箱溫度設(shè)定值誤差和控溫穩(wěn)定性誤差的試驗(yàn)6. 梯度準(zhǔn)確度的試驗(yàn)7. 定性定量重現(xiàn)性的試驗(yàn)五、對(duì)儀器的壹般要求1. 色譜柱的填充劑和流動(dòng)相的組分應(yīng)按各品種項(xiàng)下的規(guī)定。常用的色譜柱填充劑有硅膠（正 相色譜）和化學(xué)鍵合硅膠，后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠（反相色譜）最為常用，辛基硅烷 鍵合硅膠次之，氰基或氨基鍵合硅膠也有使用

15、。離子交換填充劑用于離子交換色譜；凝膠或 玻璃微球等填充劑用于分子排阻色譜等。除另有規(guī)定外，柱溫為室溫，檢測(cè)器為紫外吸收檢 測(cè)器。2. 藥典正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定相種類、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類型不得任意改變 外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、固定相牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、混合流動(dòng)相各組分的 比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種且達(dá)到系統(tǒng)適用 性試驗(yàn)的要求。3. 壹般色譜圖約于 20 分鐘內(nèi)記錄完畢。六、系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 按各品種項(xiàng)下要求對(duì)儀器進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)達(dá) 到規(guī)定的要求，或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度、

16、重復(fù)性和拖尾因子。1. 色譜柱的理論板數(shù)（ n ）n=5.54（t R/W h/2 ）2式中 tR 為保留時(shí)間（以分鐘或長(zhǎng)度計(jì)，下同，但應(yīng)取相同單位）；W h/2 為半峰高寬。2. 分離度（ R）除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于 1.5 。2（t R2 tR1）R=W1W2式中 tR2 為相鄰倆峰中后壹峰的保留時(shí)間；tR1 為相鄰倆峰中前壹峰的保留時(shí)間；W1 及 W2 為此相鄰倆峰的峰寬。3. 重復(fù)性取各品種項(xiàng)下的對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣 5 次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 應(yīng)不大于 2.0% 。也可按各品種校正因子測(cè)定項(xiàng)下， 配制相當(dāng)于 80% 、100% 和 120% 的對(duì)照 品溶液，

17、加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成 3 種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣 3 次，計(jì)算平均校正 因子，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)不大于2.0% 。4. 拖尾因子（ T）除另有規(guī)定外， T 應(yīng)于 0.95 1.05 之間。W 0.05hT= -2d 1式中 W 0.05h 為 0.05 峰高處的峰寬；d1 為峰極大至峰前沿之間的距離。七、測(cè)定法定量測(cè)定時(shí)，可根據(jù)供試品的具體情況采用峰面積法或峰高法。測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，須采用峰 面積法。（壹）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量1.按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶 液，配成校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液。取壹定量注入液相

18、色譜儀，記錄色譜圖。測(cè)量對(duì)照品 和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算校正因子：AS/C S校正因子（ f）= -AR/C R式中 AS 為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；AR 為對(duì)照品的峰面積或峰高；CS 為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；CR為對(duì)照品的濃度。再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)量供試品中待測(cè)成分（或其雜質(zhì)）和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算含量：AX含量（ CX） =f ·-AS/C SCX×稀釋倍數(shù)含量（ %）= × 100%GX×（1 干燥失重 ）式中 AX 為供試品（或其雜質(zhì)）的峰面積或峰高；CX為供試品（或其雜質(zhì)）的

19、濃度；GX 為供試品的稱樣量。當(dāng)配制校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液和含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液使用同壹份內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液時(shí)，則配制內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液不必精密稱（量）取。2.內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的選擇1 ）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)應(yīng)是樣品中不含有的組分，否則會(huì)使峰重疊而無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量?jī)?nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面 積。（2）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的保留時(shí)間應(yīng)和待測(cè)成分相近，且達(dá)到完全分離，分離度R1.5 。（ 3 ）內(nèi)標(biāo)物質(zhì)必須是純度符合要求的化合物，若非純品無(wú)干擾峰也可采用。已知含量的較 純物質(zhì)也可用，但需扣除內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的重量。（二）外標(biāo)法測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量1.按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對(duì)照品和供試品，配制成溶液，分別精密取壹定量， 注入液相色譜儀，

20、記錄色譜圖，測(cè)量對(duì)照品和供試品待測(cè)成分的峰面積（或峰高） ，按下式 計(jì)算含量：AX含量（ CX） =C R·-ARCX×稀釋倍數(shù)含量（ %）= × 100%GX×（1 干燥失重 ）2. 由于微量注射器不易精確控制進(jìn)樣量， 當(dāng)采用外標(biāo)法測(cè)定供試品中某雜質(zhì)或主成分含量時(shí)， 以定量環(huán)進(jìn)樣為好。（三）加校正因子的主成分自身對(duì)照法（四）不加校正因子的主成分自身對(duì)照法（五）面積歸壹化法 由于峰面積歸壹化法測(cè)定誤差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供試品中的雜質(zhì)含量。 除另有規(guī)定外，壹般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。方法是測(cè)量各雜質(zhì)峰的面積和色譜圖上除溶 劑峰以外的總色譜峰

21、面積，計(jì)算各峰面積占總峰面積的百分率，即得。八、注意事項(xiàng)1. 雖然泵能耐壓 6000PSI 的壓力，但不要使泵處于 4000PSI 之上的壓力為宜。2. 安裝及拆卸色譜柱時(shí)應(yīng)注意柱的連接方向，千萬(wàn)不能接反。否則可能導(dǎo)致柱效降低，甚至 損壞色譜柱。3. 嚴(yán)禁開(kāi)空泵。于無(wú)流動(dòng)相通過(guò)時(shí)不要扳動(dòng)進(jìn)樣閥的操作桿，使用時(shí)要注意盡可能少扳動(dòng)， 以免磨損內(nèi)部的密封墊圈。4. 為了延長(zhǎng)檢測(cè)器燈源的使用壽命，于色譜泵穩(wěn)定后再打開(kāi)檢測(cè)器電源開(kāi)關(guān)，分析結(jié)束后立 即關(guān)閉檢測(cè)器。5. 應(yīng)使用高純度、高質(zhì)量的溶劑和試劑。6. 避免 pH 值超限， pH 值應(yīng)控制于 2.27.5 之間。 pH 值偏低或偏高均會(huì)腐蝕液相系統(tǒng)的

22、不 銹鋼材料；破壞色譜柱填料的結(jié)構(gòu)，使填料失活。7. 色譜柱溫不能超過(guò)規(guī)定要求，柱溫過(guò)高會(huì)加速色譜柱填料老化，破壞其結(jié)構(gòu)。8. 使用所有溶劑必須是互溶的。這對(duì)于緩沖流動(dòng)相來(lái)說(shuō)是非常重要的，鹽類的析出會(huì)很快損 壞要維護(hù)的部件。9. 流動(dòng)相首選甲醇 - 水系統(tǒng)，如經(jīng)試用不適合時(shí)，再選用其他溶劑。為保護(hù)儀器，應(yīng)盡可能少 用含有緩沖液的流動(dòng)相。如果流動(dòng)相中含有緩沖劑，每日使用后應(yīng)用不含緩沖劑的流動(dòng)相或 新鮮純化水將儀器管路、泵、進(jìn)樣閥、色譜柱及檢測(cè)池等充分沖洗干凈。10. 如果液相系統(tǒng)使用未過(guò)濾的洗脫液、 注入未過(guò)濾的樣品、 系統(tǒng)中滯留緩沖洗脫液均能堵塞 系統(tǒng)或劃傷泵柱塞。 所以流動(dòng)相、 樣品使用前必

23、須用 0.45 m 微孔濾膜過(guò)濾； 流動(dòng)相且先經(jīng) 脫氣處理后使用。停泵后決不允許緩沖洗脫液滯留于系統(tǒng)中，須用經(jīng)過(guò)濾后的新鮮純化水進(jìn) 行清洗，且保證將緩沖劑沖洗干凈。11. 如果泵閉置于 2 天之上，應(yīng)將甲醇注滿液相系統(tǒng)，以避免水溶劑系統(tǒng)中可能存于微生物 的繁殖。12. 色譜柱保存時(shí)應(yīng)使填充劑處于潤(rùn)濕狀態(tài)， 倆端密塞。 反相柱（如十八烷基硅烷鍵合硅膠柱） 可于甲醇中保存；正相柱（如硅膠柱）可于正己烷中保存等。13. 決不能使用鹽酸溶液。壹般來(lái)說(shuō)，任何濃度的鹵化物均會(huì)腐蝕未經(jīng)鈍化的不銹鋼材料。14. 盡量避免使用于電化學(xué)過(guò)程中引起腐蝕的金屬離子。 應(yīng)避免的典型金屬離子有錳、 鉻、鋅、 銅、鎳、鉬、

24、鐵。九、允許差含量測(cè)定的精度，除另有規(guī)定外，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 2.0% 。第四章氣相色譜法壹、原理 氣相色譜法的流動(dòng)相為氣體，稱為載氣；色譜柱分為填充柱和毛細(xì)管柱倆種。填充柱內(nèi)裝吸 附劑、高分子多孔小球或涂漬固定液的載體；毛細(xì)管柱內(nèi)壁涂漬或交聯(lián)固定液。注入進(jìn)樣口 的供試品被加熱氣化，且被載氣帶入色譜柱，于柱內(nèi)各成分被分離后先后進(jìn)入檢測(cè)器，色譜 信號(hào)用記錄儀或數(shù)據(jù)處理器記錄。二、適用范圍 氣相色譜法是壹種分離分析方法，適用于含揮發(fā)性或經(jīng)裂解、衍生化等能氣化的藥品及多組 分混合物的定性、定量分析。中國(guó)藥典主要用于原料藥中殘留溶劑、揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查，制 劑中含有乙醇量的測(cè)定以及具有壹定揮發(fā)性原

25、料藥及其制劑的含量測(cè)定。三、儀器氣相色譜儀主要由氣路系統(tǒng)、 進(jìn)樣系統(tǒng)、 色譜柱、檢測(cè)器、記錄器、 顯示器及數(shù)據(jù)處理機(jī) （或 兼有組分收集系統(tǒng)）等組成。使用時(shí)應(yīng)按儀器的說(shuō)明書進(jìn)行操作。四、對(duì)儀器的壹般要求1. 除另有規(guī)定外， 載氣為氮?dú)猓?色譜柱為填充柱或毛細(xì)管柱， 填充柱的材質(zhì)為不銹鋼或玻璃，載體用直徑為 0.25 0.18mm 、0.18 0.15mm 或 0.15 0.125mm 經(jīng)酸洗且硅烷化處理的 硅藻土或高分子多孔小球；常用玻璃或彈性石英毛細(xì)管柱的內(nèi)徑為0.20mm 或 0.32mm進(jìn)樣口溫度應(yīng)高于柱溫 30 50 ；進(jìn)樣量壹般不超過(guò)數(shù)微升；柱徑越細(xì)進(jìn)樣量應(yīng)越少。檢 測(cè)器為氫火焰離子

26、化檢測(cè)器，檢測(cè)溫度壹般高于柱溫，且不得低于100 ，以免水氣凝結(jié)，通常為 250 350 。2. 藥典正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件，除檢測(cè)器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料 不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、載體牌號(hào)、粒度、固定液涂布濃度、載氣流速、 柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種且符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 的要求。壹般色譜圖約于 30 分鐘內(nèi)記錄完畢。五、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)同高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定。六、測(cè)定法1. 同高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定。用氣相色譜法進(jìn)行定量分析時(shí)，應(yīng)盡量采用內(nèi)標(biāo)法為宜。同 時(shí)也要注意進(jìn)樣技術(shù)的熟練，因內(nèi)標(biāo)物質(zhì)和供試品成分的蒸氣壓不同，則蒸氣壓

27、高的進(jìn)樣量 也會(huì)較多。故選擇測(cè)定用內(nèi)標(biāo)物質(zhì)時(shí)，除應(yīng)考慮內(nèi)標(biāo)峰的保留時(shí)間應(yīng)和被測(cè)成分相近，無(wú)雜 質(zhì)峰重疊，尚要考慮其蒸氣壓是否近似。2. 氣相色譜法手工進(jìn)樣量不易精確控制，特別應(yīng)注意留針時(shí)間和室溫的影響。七、允許差 含量測(cè)定的精度，除另有規(guī)定外，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 2.0% 。第五章旋光度測(cè)定法壹、定義 偏振光透過(guò)長(zhǎng) 1dm 且每 1ml 中含有旋光性物質(zhì) 1g 的溶液，于壹定波長(zhǎng)和溫度下測(cè)得的旋 光度稱為比旋度。測(cè)定比旋度（或旋光度）能夠區(qū)別或檢查某些藥品的純雜程度，亦可用以 測(cè)定含量。二、原理當(dāng)壹單色光（鈉光譜的 D 線即 589.3nm ）通過(guò)起偏鏡產(chǎn)生直線偏振光向前進(jìn)行，當(dāng)通過(guò)裝 有

28、含有某些光學(xué)活性（即旋光性）的化合物液體的測(cè)定管時(shí)，偏振光的平面（偏振面）就會(huì) 向左或向右旋轉(zhuǎn)壹定的角度， 即該旋光性物質(zhì)的旋光度。 其值能夠從自動(dòng)示數(shù)盤上直接讀出。 偏振光透過(guò)長(zhǎng) 1dm 且每 1ml 中含有旋光性物質(zhì) 1g 的溶液，于壹定波長(zhǎng)和溫度下測(cè)得的旋 光度稱為比旋度。對(duì)液體供試品 = -ld100 對(duì)固體供試品 = lc式中 為比旋度；D 為鈉光譜的 D 線；t 為測(cè)定時(shí)的溫度；l 為測(cè)定管長(zhǎng)度， dm ；為測(cè)得的旋光度；d 為液體的相對(duì)密度；c 為每 100ml 溶液中含有被測(cè)物質(zhì)的重量， g （按干燥品或無(wú)水物計(jì)算） 三、測(cè)定方法1. 打開(kāi)穩(wěn)壓電源開(kāi)關(guān)，稍等片刻，俟電壓表指針?lè)€(wěn)

29、定地指示于 220V 處。2. 打開(kāi)旋光儀電源開(kāi)關(guān)，經(jīng) 5 分鐘鈉光燈發(fā)光穩(wěn)定后再工作。3. 扳上直流開(kāi)關(guān)，若直流開(kāi)關(guān)扳上后，燈熄滅，則再將直流開(kāi)關(guān)上下重復(fù)扳動(dòng) 1 到 2 次，使 鈉燈于直流下點(diǎn)亮為正常。4. 將測(cè)定管用供試品所用的溶劑沖洗 34 遍，緩緩注入適量溶劑。5. 測(cè)定管中若有氣泡，應(yīng)先將氣泡浮于凸頸處，通光面?zhèn)z端的霧狀液滴，應(yīng)用擦鏡紙揩干。6. 測(cè)定管螺帽不宜旋得過(guò)緊，以免產(chǎn)生應(yīng)力，影響讀數(shù)。7. 將測(cè)定管放入樣品室，測(cè)定管安放時(shí)，應(yīng)注意標(biāo)記的位置和方向，蓋上箱蓋。8. 打開(kāi)示數(shù)，調(diào)節(jié)零位手輪，使旋光示值為零。9. 取出測(cè)定管，將空白溶液倒出，用供試品溶液沖洗3 4 遍，將供試品

30、溶液緩緩注入測(cè)定管，用擦鏡紙擦凈測(cè)定管，特別要擦凈倆端的通光面，按相同的位置和方向正確地放入樣品 室內(nèi)，蓋好箱蓋。10. 示數(shù)盤將轉(zhuǎn)出該樣品的旋光度。示數(shù)盤上紅色示值為左旋（），黑色示值為右旋（） 。11. 逐次按下復(fù)測(cè)按鈕，重復(fù)讀取旋光度3 次，取 3 次的平均值作為測(cè)定結(jié)果。12. 如果樣品超過(guò)測(cè)量范圍，儀器于± 45 處自動(dòng)停止，此時(shí)取出測(cè)定管，按壹下復(fù)測(cè)按鈕開(kāi) 關(guān)，儀器即轉(zhuǎn)回零位。13. 鈉燈于直流供電系統(tǒng)出現(xiàn)故障不能使用時(shí)，儀器也可于鈉燈交流供電的情況下測(cè)試。 但儀器的性能可能略有降低。14. 測(cè)定完畢后，取出測(cè)定管，將測(cè)定管用純化水洗凈。應(yīng)晾干，防塵保存。15. 關(guān)閉“示

31、數(shù)”開(kāi)關(guān)，示數(shù)盤復(fù)原。16. 關(guān)閉“直流”及“電源”開(kāi)關(guān)。17. 關(guān)閉穩(wěn)壓電源開(kāi)關(guān)，關(guān)閉總電源開(kāi)關(guān)。18. 罩好防塵罩，填寫操作記錄。四、注意事項(xiàng)1.中國(guó)藥典 2000 年版二部規(guī)定， 用鈉光譜的 D 線（ 589.3nm ）測(cè)定旋光度， 除另有規(guī)定外， 測(cè)定管長(zhǎng)度為 1dm （如使用其他管長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行換算） ，測(cè)定溫度為 20 。2.配制溶液及測(cè)定時(shí) ,均應(yīng)調(diào)節(jié)溫度至 20 ±0.5 （或各藥品項(xiàng)下規(guī)定的溫度） 。3. 供試的液體或固體物質(zhì)的溶液應(yīng)不顯渾濁或含有混懸的小粒。如有上述情況時(shí)，應(yīng)預(yù)先濾 過(guò)，且棄去初濾液。4. 每次測(cè)定前應(yīng)以溶劑作空白校正，測(cè)定后，再校正 1 次，以確定于

32、測(cè)定時(shí)零點(diǎn)有無(wú)變動(dòng)， 如第 2 次校正時(shí)發(fā)現(xiàn)零點(diǎn)有變動(dòng)，則應(yīng)重新測(cè)定旋光度。5. 測(cè)定供試品和空白校正，應(yīng)按相同的位置和方向放置測(cè)定管于儀器樣品室，且注意測(cè)定管 內(nèi)不應(yīng)有氣泡，否則影響測(cè)定的準(zhǔn)確度。6. 測(cè)定管使用后，尤其于盛放有機(jī)溶劑后 ,必須立即洗凈，以免橡皮圈受損發(fā)粘。測(cè)定管每次 洗滌后，切不可置烘箱中干燥，以免發(fā)生變形，橡皮圈發(fā)粘。7. 測(cè)定管倆端的通光面，使用時(shí)須特別小心，避免碰撞和觸摸，只能以擦鏡紙揩試，以防磨 損。應(yīng)保護(hù)其光亮、清潔，否則影響測(cè)定結(jié)果。8. 測(cè)定管螺帽不宜旋得過(guò)緊，以免產(chǎn)生應(yīng)力，影響讀數(shù)。9. 鈉燈使用時(shí)間壹般勿連續(xù)使用超過(guò) 2 小時(shí)，且不宜經(jīng)常開(kāi)關(guān)。當(dāng)關(guān)熄鈉燈后

33、，如果要繼續(xù) 使用，應(yīng)等鈉燈冷后再開(kāi)。10 儀器應(yīng)放置干燥通風(fēng)處，防止潮氣侵蝕， 鎮(zhèn)流器應(yīng)注意散熱。 搬動(dòng)儀器應(yīng)小心輕放，避免 震動(dòng)。11. 光源積灰或損壞，可打開(kāi)機(jī)殼擦凈或更換。12. 機(jī)械部分摩擦阻力增大，能夠打開(kāi)后門板，于傘形齒輪、蝸輪蝸桿處加稍許鐘油。13. 如果儀器發(fā)現(xiàn)停轉(zhuǎn)或其它元件損壞的故障，應(yīng)按電原理圖詳細(xì)檢查。第六章 pH 值的測(cè)定法壹、原理PHS-2 型酸度計(jì)是用玻璃電極作為測(cè)量電極， 甘汞電極作為參考電極， 當(dāng)氫離子濃度發(fā)生變化時(shí)，玻璃電極和甘汞電極之間的電動(dòng)勢(shì)也隨著引起變化，而電勢(shì)變化符合能斯特方程式：RTE=E o -2.3026 ×- ×pHF式中

34、 E產(chǎn)生的電極電位 T絕對(duì)溫度Eo 零電位 F法拉第常數(shù)R- 氣體常數(shù) pH 表示被測(cè)溶液 pH 值和內(nèi)溶液 pH 值的差值PHS-2 型酸度計(jì)是利用玻璃電極和甘汞電極對(duì)被測(cè)溶液中不同酸度產(chǎn)生的直流電勢(shì)， 輸入到壹臺(tái)用參量振蕩深度負(fù)反饋的直流放大器，以達(dá)到 pH 值指示的目的。二、注意事項(xiàng)1.應(yīng)注意玻璃電極裝到電極夾中時(shí)應(yīng)略高于甘汞電極，以免球膜和試杯相碰。2. 新使用或久放未用的玻璃電極于使用前應(yīng)放于純化水內(nèi)浸泡活化48 小時(shí)，平時(shí)也最好浸泡于水中，以便下次使用時(shí)能迅速地工作。3. 將甘汞電極的頸端橡皮塞取下，檢查飽和氯化鉀溶液情況，溶液中應(yīng)有氯化鉀結(jié)晶析出， 以確保溶液飽和，太少應(yīng)予以添加。使用前應(yīng)把電極彎管下端橡皮套除去。4. 按下電源按鍵，接通電源，按下 pH 按鍵，指示燈亮后，壹般短時(shí)間測(cè)量，只需預(yù)熱數(shù)分 鐘即可，但要保持儀表零點(diǎn)穩(wěn)定，必須預(yù)熱半小時(shí)或壹小時(shí)之上。5. 本儀器應(yīng)置于干燥環(huán)境