第一章結(jié)締組織染色

1、組織設(shè)計(jì)第一章結(jié)締組織染色第一章結(jié)締組織染色結(jié)締組織廣泛分布于人體和動(dòng)物體內(nèi)， 其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是細(xì)胞分散， 有大量的細(xì)胞 間質(zhì)纖維 和基質(zhì)， 而化學(xué)成分是含有大量的蛋白質(zhì)和多糖。 結(jié)締組織一般分為固有 結(jié)締組織 (其中包 括疏松、致密和網(wǎng)狀結(jié)締組織等) 、軟骨組織和骨組織。 第一節(jié)結(jié)締組織多色染色法一、 Mallory 三色染色法1. 試劑配制( 1 )重鉻酸鉀液重鉻酸鉀 2.5g ，醋酸 5ml ，蒸餾水 95ml(2)苯胺藍(lán)桔黃G液苯胺藍(lán)0.5g，桔黃G2g，磷鎢酸1g，蒸餾水100ml( 3)酸性復(fù)紅液酸性復(fù)紅 0.5g ，蒸餾水 100ml2. 染色步驟( 1 )中性甲醛液固定組織，石蠟切

2、片，常規(guī)脫蠟至水。( 2)重鉻酸鉀液 10min 。( 3)蒸餾水沖洗 2min ，蒸餾水 2 次。( 4)酸性復(fù)紅液 2min ，蒸餾稍洗。( 5)苯胺藍(lán)液 20min ， 95% 乙醇快速分化。( 6)直接用無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。3. 結(jié)果膠原和網(wǎng)狀纖維呈藍(lán)色，軟骨、粘液、淀粉樣變物質(zhì)呈淡藍(lán)色，神經(jīng)膠質(zhì)纖維、 肌纖維 和酸性顆粒呈紅色，髓鞘和紅色呈桔紅色。4. 本卷須知1酸性復(fù)紅液易溶解于水，肉眼觀察切片上保存一定的紅色。2苯胺藍(lán)液染色后，用 95% 乙醇分化時(shí)，須用顯微鏡觀察掌握。3對(duì)陳舊的固定標(biāo)本，其染色效果較差，可增加染色時(shí)間。4另張切片，可同時(shí)作膠原纖維對(duì)照染色而

3、進(jìn)行鑒別組織成分。二、 Masson 三色染色法1. 試劑配制 1 Masson 復(fù)合染色液酸性復(fù)紅 1g ，麗春紅 2g ，桔黃 G2g ， 0.25% 醋酸 300ml 2亮綠染色液高綠 SF0.1g ， 0.2% 醋酸 100ml 。2. 染色步驟中性甲醛液固定組織，石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。 1 Masson 復(fù)合染色液 5min 。 2 0.2% 醋酸水溶液稍洗。3 5% 磷鎢酸 5-10min 。 4 0.2% 醋酸水溶液浸洗 2 次。5亮綠染色液 5min ，0.2%醋酸水洗 2 次。6無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。3. 結(jié)果膠原纖維呈綠色，肌纖維呈紅色，紅細(xì)胞呈桔紅色。

4、4. 本卷須知 1 Masson 復(fù)合染色液，經(jīng)磷鎢酸分化時(shí)須用顯微鏡控制肌纖維清晰為止。2)亮綠染料可用苯胺藍(lán)替換，可用來(lái)作為比照觀察染色的效果三、顯示膠原纖維、網(wǎng)狀纖維和彈力纖維的三聯(lián)染色法( 1993 年)1. 試劑配制1)高錳酸鉀硫酸液 0.5% 高錳酸鉀水溶液中參加 5ml 的硫酸。2)維多利亞藍(lán)染色液維多利亞藍(lán)2g ，糊精 0.5g ，間苯二酚 4g ，蒸餾水 200ml 。將上述物質(zhì)混合后加熱煮沸， 邊煮邊攪拌， 約 5min 。然后用另一容器取 30% 三氯化 鐵水溶液 25ml ，另行加熱煮沸后慢慢倒入上述混合液中繼續(xù)煮沸 3min ，不斷攪拌溶 液呈膠體狀。去 火冷卻過(guò)濾，

5、將濾紙上的殘?jiān)B同濾紙放在60 C恒溫箱中烤干。殘?jiān)噬钏{(lán)色細(xì)顆粒狀粉 末，再溶于 400ml 的 70% 乙醇液中。然后加濃鹽酸 4ml 和苯 酚 5g 放置至成熟后使用。(3)麗春紅染色S染色液0.5%麗春紅S水溶液15ml，苦味酸飽和水溶液85ml。( 4) Gomori 氨性銀改良液取 5% 硝酸銀水溶液 5ml ，滴加濃氨水由棕黑色變清 為止， 再參加 3% 氫氧化鈉水溶液 5ml ，此時(shí)該液突變紫黑色，這時(shí)再參加氨水使之 變清晰為止。 最后用蒸餾水補(bǔ)足至 50ml ，盛棕色試劑瓶中，置于冰箱中備用較長(zhǎng)時(shí) 間。2. 染色步驟( 1 )中性甲醛液固定組織，石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。( 2

6、)高錳酸鉀硫酸液氧化 3min 后，自來(lái)水浸洗后，用 2% 草酸漂白 2min 。(3)5%硫酸鐵銨 1min 。( 4) Gomori 氨性銀改良液染 1min 。6蒸餾水洗 2 次， 0.2%氯化金 30s ，蒸餾水洗 1 次 7 70% 乙醇浸一次，再浸入維多利亞藍(lán)液中染 30min-1h 。 8 95% 乙醇分化 1min 左右。 9 浸入蒸餾水中 1min 后，用麗春紅 S 染色液染色 2min 。 10直接用無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。3. 結(jié)果膠原纖維呈紅色，網(wǎng)狀纖維呈黑色，彈力纖維呈綠色，肌肉和紅細(xì)胞呈淡黃色。4. 本卷須知氨性銀液滴染時(shí)， 要用干凈吸管， 防止銀液

7、污染而發(fā)生沉淀。 氨性銀液作用后 的切片不 能傾倒， 應(yīng)將蒸餾水沖洗切片上的銀液， 這樣就不會(huì)使銀液外表?yè)]發(fā)的銀 顆粒而沉積在組織 上。第二節(jié)膠原纖維一、膠原纖維的分布和組成成分 膠原纖維是結(jié)締組織中的三種纖維之一，分布最為廣 泛，含量最多。主要分布于真皮、鍵、 韌帶、骨、透明軟骨、動(dòng)脈、腸壁、子宮和基 底膜等，膠麻纖維具有韌性大， 抗拉力強(qiáng)的特 點(diǎn)。在弱酸或沸水中可慢慢溶化成膠水， 稱白明膠。膠原纖維和網(wǎng)狀纖維的根本構(gòu)造相似， 都以膠原單位 蛋白質(zhì)為主的大分 子為根本單位。 膠原單位接連和融合形成網(wǎng)狀纖維 ；它是粗 約1 g左右的分支狀 纖維，形成全身組織的支架，在HE 染色中看不清楚。 但

8、其外面裹著的一層類蛋白，憑借鍍銀法可以清楚地顯示出來(lái)，故又稱為嗜銀纖維。 膠原纖維單位主要由纖維母細(xì)胞合成。 其他如平滑肌細(xì)胞等也能產(chǎn)生。 膠原單位的形成開(kāi)始于細(xì)胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，合成比構(gòu)成膠原單位的a肽鏈更長(zhǎng)的前a肽鏈，經(jīng)高爾基體分泌出細(xì) 胞，在細(xì)胞外液的內(nèi)切肽酶作用下，切去前a肽鏈的附加肽段而形成膠原單位；再經(jīng)細(xì)胞外 液的賴氨酰氧化酶作用使兩條肽鏈通過(guò)醛醇或醛胺縮合構(gòu)成共 價(jià)交聯(lián)。 這樣膠原單位分子之 間就形成了穩(wěn)定的聯(lián)系，形成膠原微纖維，然后再聚 合而成膠原纖維。二、膠原纖維染色的應(yīng)用 膠原纖維染色在病理診斷上主要用于鑒定梭形、 纖維形細(xì) 胞腫瘤的組織來(lái)源： 常常要在纖維、 平滑肌和神經(jīng)三

9、者之中作出選擇。還能使用于 其他的情況下，如觀察動(dòng)脈硬化的心臟，在 HE 切片中，心肌內(nèi)散在的小疤痕灶和心肌 均被染作紅色，而作膠原纖維染色可將膠原組織 和心肌組織明顯地區(qū)分開(kāi)來(lái)。 早期 肝硬化用膠原纖維染色， 也可使小葉之間少量增生的膠原纖維突出地顯示出來(lái)。 由干膠原纖維是由成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的一種纖維蛋白 常常被酸 成分， 染料染色。l.VanGieson 苦味酸酸性復(fù)紅法 (1889 年 ) 試劑配制 (1) VanGieson 液 l% 酸性品紅水溶液 10ml ，苦味酸飽和水溶液 (約 l.22%)90ml 。(2) Weigert 鐵蘇木素溶液甲液： 蘇木素 lg,95% 或無(wú)水乙醇

10、100ml ；乙液： 29% 三氯 化鐵水 溶液 4ml ，蒸餾水 95ml ，鹽酸 lml 。臨用時(shí)取甲液和乙液等量混合即可。 鐵蘇木素不能像明礬蘇木素一樣配制后放置， 因 鐵與染 色劑的色素可引起化合而形成不溶性沉淀。 所以，以鐵作為媒染液時(shí)， 必須 與染液分別配制、 分別應(yīng)用或臨時(shí)混合應(yīng)用。 染色方法 (1) 組織固定于 10% 甲醛液，常規(guī)脫水包埋。(2) 組織切片脫蠟至水。(4) 自來(lái)水沖洗數(shù)分鐘。(5) 根據(jù)染色的深淺可用 0.5% 鹽酸乙醇分化。(6) 自來(lái)水洗至變藍(lán)；用蒸餾水洗。(7) 用 VanGieson 液染 15min 。(8) 傾去染液，直接用 95% 乙醇分化和脫水

11、。(9) 無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果 膠原纖維呈紅色，肌纖維、胞質(zhì)及紅細(xì)胞黃色，胞核呈黑色 本卷須知 (1) 目前以苦味酸、復(fù)紅的 VanGieson 染液直接染此一種溶液即可。(2) Weigert 鐵蘇木素分甲、乙兩液，應(yīng)于臨用前將兩液等量混合使用，而不宜預(yù)先混合， 否那么易氧化沉淀而逐漸失其染色能力。(3) VanGieson 染色液分別在臨用時(shí)混合，防止放置時(shí)間長(zhǎng)，那么酸性品紅不易著色。2 .Siriured 染色法 這種方法可使膠原纖維長(zhǎng)期保存，是不易褪色的一種好方法 試劑配制 (l) Siriusred 飽和苦味酸液 0.5%Siriuredl0ml ，苦味酸飽和

12、液 90ml 。 天青石藍(lán)液天青石藍(lán) B1 25g，鐵明磯1.25g，蒸餾水250m1 。溶解煮沸，待冷過(guò)濾后，參加甘油 30m1 ，然后再參加濃鹽酸 5ml 。 染色方法 (1) 組織固定于 10% 甲醛液，常規(guī)脫水包埋(2) 切片脫蠟至水(3) 入天青石藍(lán)液染 510min ，(4) 蒸餾水洗屢次。(5) Siriured 飽和苦味酸液染 1530min 。(6) 無(wú)水乙醇直接分化與脫水。(7) 二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果 膠原纖維呈鮮紅色，細(xì)胞核綠色，其他為黃色。3 .Lillie 改良 VanGieson 法(1965 年 ) 試劑配制 A. 用 1% 醋酸配成 0.1% 快綠 F

13、CF 液，或?yàn)榈玫捷^藍(lán)的綠色用 3% 毛綠 S(WoolgreenS) 的 苦味酸水溶液。 染色方法 (1) 按常規(guī)將切片脫蠟至水。(2) 用 Harris 明礬蘇木素液染 3min 。(3) 自來(lái)水洗，鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘。(4) 自來(lái)水洗至顯藍(lán)，蒸餾水洗。(5) 在 A 溶液中染 4min 。(6) 在 1%醋酸中洗 2 次。(7) 在 B 溶液中染 l0l5min 。(9) 無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固結(jié)果 結(jié)締組織紅色，肌肉、胞質(zhì)灰綠色，紅細(xì)胞綠色，核藍(lán)黑色。4 .Clark 改良 VanGieson 臺(tái)盼藍(lán)法 (1971 年 ) 用于膠原纖維、包括非常細(xì)的纖維，以及 肌肉角化

14、上皮的染色。 固定 甲醛固定液。 試劑配制 (l) A 液 0.3g 萘酚黃 S ( naphtholyellowS ) 溶竄犯 100mI 蒸餾水。(2) B 液 0.2g 酸性復(fù)紅溶于 100ml 蒸餾水中。(3) C 液 0.2g 臺(tái)盼藍(lán)溶于 100ml 蒸餾水中。染色液由 40 份 A 溶液， 2.5 份 B 溶液和 2 份 C 溶液組成。每 40 分 A 溶液參加， 0.4ml 濃 鹽酸。 染色方法 (1) 石蠟切片，脫蠟至水(2) 在 Weigert 鐵蘇木素中 5ml 。(3) 自來(lái)水洗。(4) 在染色液中染 l0min 。(5) 在水中迅速洗一下即經(jīng)過(guò) 50% 、70% 與 9

15、5%乙醇，無(wú)水乙醇兩次。(6) 二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果 核- 藍(lán)黑色；胞質(zhì) -黃色，膠原纖維 -粗纖維紅色，細(xì)纖維 16h 藍(lán)色。說(shuō)明 本法中的 Weigert 鐵蘇素液染色，可改用棓花青 -鉻礬溶液中染5 .Biebric 猩紅染色法 Lillie ， 1965 年 顯示目的 膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、肌肉、胞質(zhì)。固定 甲醛液， Orth 液。 試劑配制 (l) A 液 Weigert 鐵蘇木精，見(jiàn)苦味酸酸性復(fù)紅法。(2) B 液 0.2gBiebrich 猩紅溶于 100ml1% 醋酸。(3) C 液 0.1g 苯胺藍(lán)溶示 100ml 飽和苦味酸水溶液。 染色方法 (1) 常規(guī)脫蠟至水。

16、(2) 在 A 溶液中染 5min 。(5) 自來(lái)水洗。(6) 在 C 染液中染 5min (7) 直接移入 1% 醋酸中 3min 。(8) 無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果 結(jié)締組織藍(lán)色， 腎小球基質(zhì)藍(lán)色， 網(wǎng)狀纖維藍(lán)色， 紅細(xì)胞橙紅至猩紅色， 肌 肉粉紅色， 胞質(zhì)粉紅色至灰色，核黑藍(lán)色，粘液淺藍(lán)色。6. 苦味酸氨基黑染色法 Li1lie ， 1965 年 顯示目的 膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、基膜、腎小球基質(zhì)。 固定 任何固定劑均可。 試劑配制 (l) A 液煌紫素 R(BrilliantpurpurinR)0.6g ；偶氮復(fù)紅 G(azo-fuchsinG)0.4g ；冰醋酸 1m

17、l ， 蒸 餾水加至100m1，上述兩種染料先各自用1%醋酸配成1%溶液，以6 : 4比例混合后 再 用。(2) B 液氨基黑 10B ， 5100mg ；苦味酸飽和水溶液 100m1 。同樣濃度的苯胺藍(lán)或甲基 藍(lán) 均可用來(lái)代替氨基黑 (又稱蔡酚藍(lán)黑 )，粘液可得到較好的顯示。 染色方法 (1) 切片常規(guī)脫蠟至水。(2) 在 Weigert 鐵蘇素中染 6min 。(3) 自來(lái)水洗。(4) 在 A 染液中染 5min 。(7) 在 1% 醋酸中分色2min 。(8) 無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果 膠原纖維、網(wǎng)狀纖維和基膜深綠色；粘液深綠色，上皮細(xì)胞胞質(zhì)棕色，肌肉淺綠 色， 紅細(xì)

18、胞紅色。7. Petersen 酸性茜藍(lán)改良法 顯示目的 膠原與網(wǎng)狀組織、骨鉻肌、心肌橫紋、心肌間板。固定 Zenker 液， Helly 液、 Bouin 液或甲醛液。 試劑配制 (1)A 液即緩沖的酸性茜藍(lán)溶液。 酸性茜藍(lán) 2B ，0.25g ；硫酸鋁 5g ；蒸餾水 50m1 。煮 沸 5min 。 冷卻，過(guò)濾，再補(bǔ)足到原來(lái)的體積。然后加 20ml 的 Sorensen 檸檬酸鹽溶液 ( 檸 檬酸晶體21g ， lNNaOH ， 200m1 。加蒸餾水至 1000ml) 和 30ml0.lN 鹽酸緩沖到 pH 為 2.25 。(2) B 液即苯胺藍(lán)橘黃 G 溶液。苯胺藍(lán) 0.5g; 橘黃

19、 G，2g ；蒸餾水 100ml ，冰醋酸 8ml ， 煮 沸，冷卻，過(guò)濾。 染色方法 (1) 常規(guī)石蠟切片，脫蠟至水。(2) 在 A 液中染 3min 。(3) 在蒸餾水中快速洗 2 次。(4) 在 5% 磷鎢酸液中分色并媒染 23min 。(5) 蒸餾水洗。水稀 釋(8) 先用 95% 乙醇后用無(wú)水乙醇脫水(9) 二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固結(jié)果膠原與網(wǎng)狀結(jié)締組織藍(lán)色，染色質(zhì)磚紅色，肌組織根據(jù)所用不同品種的固定劑 染色從 深品紅色至亮橙色，紅細(xì)胞橙紅色，粘液淡藍(lán)色，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞淡品紅色，腺細(xì) 飽根據(jù)其組成 從淺藍(lán)色至品紅色。8. 顯示膠原纖維、細(xì)胞和肌肉的新染法固定 中性甲醛液，石蠟切片。 試劑

20、配制 (1) Ponceau's染色液0.5%Pohceau's(麗春紅S,上海試劑三廠)水溶液IO15ml ,苦味 酸 飽和水溶液 8590ml 。(2) Victoriablue'B 染色液 Victoriablue'B( 維多利亞藍(lán)，B，上海試劑三廠 )0.5g , 70%乙醇100m1 。 染色方法 (1) 組織切片脫蠟至水。(2) 70% 乙醇稍洗后，入 Victoriablue'B 染色液中 l5min 。(3) 95% 乙醇中分化數(shù)秒鐘。(4) 用蒸餾水洗 2 次。(5) 用 Ponceau's 染色液滴染 2min 。(6) 直接

21、用無(wú)水乙醇分化與脫水。肌肉呈黃色。第三節(jié)網(wǎng)狀纖維網(wǎng)狀纖維是網(wǎng)狀結(jié)締組織內(nèi)的一種纖維。 它由網(wǎng)狀細(xì)胞所產(chǎn)生。 網(wǎng)狀細(xì)胞是一種 星狀多 突的細(xì)胞，核大，著色較淺，核仁明顯，胞質(zhì)較豐富，胞突彼此連接形成細(xì)胞 網(wǎng)架。網(wǎng)狀纖 維纖細(xì)而有分支，穿行于細(xì)胞體和突之間，共同構(gòu)成網(wǎng)狀支架。這種纖 維用 HE 染色一般不 易辨識(shí)。假設(shè)用銀氨溶液浸染能使纖維變成黑色，如又稱為嗜銀纖 維。網(wǎng)狀纖維纖細(xì)，直徑約 0.2-1um ，沒(méi)有彈性，而有韌性，能抵抗胃液的消化和弱酸 的 腐蝕。一、網(wǎng)狀纖維染色的應(yīng)用1. 用于顯示和鑒別腫瘤的性質(zhì)和來(lái)源1顯示和區(qū)分癌和肉瘤 2 顯示和區(qū)分血管內(nèi)皮瘤與血管外皮瘤3用以鑒別淋巴細(xì)胞肉瘤

22、與網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤 4 區(qū)分骨尤文氏肉瘤與骨網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤5顯示與鑒別骨異質(zhì)增生與骨化性纖維瘤 6 區(qū)分軟骨粘液纖維瘤與粘液肉瘤7鑒別腦膜瘤與星形細(xì)胞瘤2. 用于某些腫瘤的診斷1平滑肌肉瘤 2 纖維肉瘤3滑膜肉瘤 4 惡性神經(jīng)鞘瘤3. 用于觀察和研究癌組織的發(fā)生、開(kāi)展及其惡性程度4. 顯示與觀察基底膜的變化。5. 用于識(shí)別壞死組織的結(jié)構(gòu)及類型 1 凝固性壞死 2 肺結(jié)核干酪樣壞死6. 用于顯示和研究肝組織病變。二、網(wǎng)狀纖維染色的原理1. 氧化2.感應(yīng)3.浸銀4.復(fù)原三、網(wǎng)狀纖維染色方法1.Wider 染色法 1 固定甲醛液或其他固定液 2 試劑配制氧化銀溶液： 40% 氫氧化鈉 1 滴半10% 硝酸

23、銀 2.5ml取 40% 氫氧化鈉滴入 10% 硝酸銀溶液中立即產(chǎn)生棕褐色沉淀， 逐次滴入 28% 氨 水恰好 溶化沉淀一般 3 滴為宜，用蒸餾水補(bǔ)足 20ml 。3染色次序 1組織切片脫蠟至水3 蒸餾水沖洗， 5min 。4 1% 硝酸鈾， 5s。5蒸餾水沖洗， 10s 。6氧化銀溶液， 5-10min7 95% 酒精速洗， 1-2s 。8 復(fù)原液復(fù)原， 1-2s 。9蒸餾水沖洗， 2min 。10 0.2% 氯化金調(diào)色， 2-20s 。11 蒸餾水沖洗， 5min 。12 5% 次亞硫酸鈉， 2min 。13 蒸餾水沖洗， 2min 。14 核固紅染細(xì)胞核， 5-10min 。15 水稍洗

24、。16 常規(guī)無(wú)水乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹(shù)膠封固。 4 染色結(jié)果 網(wǎng)狀纖維呈黑色、細(xì)胞核呈紅色。第四節(jié)彈力纖維一、彈力纖維的形態(tài)特點(diǎn)和組成成分彈力纖維由糖蛋白構(gòu)成， 富含親水性的極性氨基酸。 彈性蛋白提供彈力纖維的彈性，它是一 種不溶性蛋白質(zhì)，當(dāng)用弱堿處理纖維結(jié)締組織時(shí)，其仍然存在。三分之一為甘氨酸， 11% 為脯氨酸。與膠原纖維不同處為其氨基酸組成中約 95% 屬于非極性疏水氨 它們起著共價(jià)交聯(lián)的 作用。近年來(lái)， 電鏡下看到組織培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞可以合成彈力纖維的兩種成分。 在沒(méi)有平 滑肌細(xì) 胞存在時(shí)，可能由纖維母細(xì)胞形成。彈力纖維廣泛分布于身體各處，特別是在 皮膚、血管、 壁、韌帶、氣管、

25、支氣管、肺泡、耳廓和腺體的導(dǎo)管處等最為豐富。彈 力纖維由兩種成分組 成，即集合束的彈力微纖維 (由糖蛋白形成 ) 和均質(zhì)狀的彈力蛋白。 彈力纖維在常規(guī)染色中難以區(qū)別于其他纖維，只有用特殊染色方法，才能清晰地顯示出 來(lái)。 近來(lái)學(xué)者研究認(rèn)為，彈力纖維系統(tǒng)是由彈力纖維、前彈力纖維和耐酸纖維等三種 纖維構(gòu)成， 這三種纖維的分布、 走行和組織化學(xué)均不相同。 耐酸纖維用一般的彈力 纖維染色法其著色很 淡，前彈力纖維著色也不夠深， 但如經(jīng)強(qiáng)氧化后醛品紅或間苯二 酚品紅法那么可把彈力纖維系 統(tǒng)中的三種纖維同時(shí)顯示出來(lái)。二、彈力纖維染色的應(yīng)用(一) 顯示皮膚組織中彈刀纖維的變化在皮膚組織病變中，特別是真皮內(nèi)的彈

26、力纖維，時(shí) 常發(fā) 生改變，出現(xiàn)增生、卷曲、變性、崩解等，做彈力纖維形成聚集成堆的束狀、團(tuán) 塊狀及不規(guī) 那么狀。見(jiàn)于以下病變彈力纖維?。粡椓w維增多癥；彈力過(guò)度性皮 膚；皮膚疏松； 皮膚環(huán)狀肉芽腫；肢端角化的彈力纖維變性；硬皮病。(二) 顯示與判定心血管疾病彈力纖維是心臟和血管的主要成公之一。(1) 顯示及鑒別心內(nèi)膜彈力纖維增生癥與心內(nèi)膜心肌纖維化。這兩種病變時(shí)心內(nèi)膜中的 彈力 纖維和膠原纖維會(huì)出現(xiàn)異常增多， 在 HE- 染色中兩者的病理變化甚為相似。 因 此，需要特殊 染色加以顯示與鑒別。(2) 顯示動(dòng)脈粥樣硬化時(shí)硬化斑塊底部的內(nèi)彈力板崩解，斷裂乃至消失情況(3) 顯示與觀察梅毒性主動(dòng)脈炎時(shí)動(dòng)

27、脈中層彈力纖維發(fā)生灶性破壞的程度。(4) 顯示高血壓時(shí)小動(dòng)脈彈力纖維顯著增生以及形成多層的病變特點(diǎn)。(5) 用于無(wú)脈癥，顯示在大動(dòng)脈血管申層彈力纖維密集排列，彈力層增厚。(6) 顯示老年人動(dòng)脈變性：動(dòng)脈的彈力板變性、增厚、斷裂、崩解等現(xiàn)象。(三) 視察某些病變中的彈刀纖維是否增生與破壞如慢性支氣管炎、 肺氣腫、 原 發(fā)性或繼發(fā) 性腎固縮等，均可導(dǎo)致彈力纖維縱行。散亂、斷裂、破壞和增生，形成碎 片或顆粒。(四 ) 顯示與鑒別腫瘤組織(1) 彈力纖維瘤在彈力纖維瘤體的纖維組織中， 有許多球狀或顆粒狀變化的彈力纖維。 在 HE 染色中容易忽略，但用彈力纖維染色，能清晰見(jiàn)到瘤體內(nèi)豐富的彈力纖維球。(2

28、) 乳腺癌見(jiàn)于導(dǎo)管和血管壁周圍，這種現(xiàn)象多合并在硬癌和浸潤(rùn)性小葉癌上。如彈力纖維 染色法證明在導(dǎo)管癌上，伴隨出現(xiàn)彈力纖維增生，可證明是早期浸潤(rùn)癌。三、各種染色方法l、 Verhoeff 鐵蘇木素染色法媒染劑三氯化鐵和碘配成的蘇木素染色液，即Verhoeff 鐵碘蘇木素對(duì)彈力纖維有染色力， 但沒(méi)有選擇性， 它既可染彈力纖維， 也可染細(xì)胞核和 膠原纖維 等。通過(guò)“染料的分散度和組織的結(jié)構(gòu)密度以到達(dá)分辨不同組織的目的。 如彈力纖維和細(xì) 胞核的結(jié)構(gòu)密度都是比較致密的， 鐵蘇木素染液的粒子比較容易地分 散到狹孔的彈力纖維或 細(xì)胞核的間隙中， 蘇木素粒子在狹孔的彈力纖維中比較密集， 所以染色也比較深； 而

29、分散到 寬孔的膠原纖維間隙中較稀疏，所似染色也比較淺固定 105 甲醛溶液或其他固定液試劑配制 鐵碘蘇木素液： 先將蘇本素 1g ，無(wú)水乙醇 20ml ，進(jìn)行加溫溶解后參加 10% 三 氯化鐵水溶液 8m1 ，最后再參加 Lugol 碘液 8ml 即可 ( Lugol 液：碘化鉀 2g ，碘結(jié) 晶 lg ， 蒸餾水 100ml ) 。染色方法 (1) 石蠟切片，脫蠟至水。(2) 鐵碘蘇木素液染 1530min ，至顏色呈深黑色。自來(lái)水洗。(3) 2% 三氯化鐵水溶液分化 1020s ，至彈力纖維清晰為止。如果分化過(guò)度，可再返回第 2 步重染鐵碘蘇木素液。(5)用 95% 乙醇去碘 2Smin

30、，使黑色纖維更為清晰。(6) 水洗， VG 復(fù)染 5min 。(7) 95% 乙醇急速分化。(8) 無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，申性樹(shù)膠封固。結(jié)果彈力纖維黑色或黑藍(lán)色，胞核黑色，校原纖維呈紅色。2 、 Weigert 間苯二酚復(fù)紅染色法三苯甲烷系堿性染料與雷鎖辛和三氯化鐵組成一種帶有 弱 正電荷的染料， 與結(jié)構(gòu)致密的、 富于內(nèi)外表的彈性纖維通過(guò)非極性吸著而完成染 色。 非極性 吸著，是染料不具有強(qiáng)電荷時(shí)和組織成分間的結(jié)合。 就是說(shuō)雷鎖辛復(fù)紅 液對(duì)彈力纖維的染色。 間苯二酚復(fù)紅液實(shí)際上是由堿性品紅的鐵間苯二酚色淀 ( Lake) 形 成的一種復(fù)合物，這種復(fù) 合物與彈力纖維結(jié)合， 并使彈力纖維著色。

31、 其結(jié)合的原理 不清楚， 可能是彈力纖維某些局部 與間苯二酚的基團(tuán)形成氫鍵。固定 10% 甲醛液及其他固定液。 試劑配制 間苯二酚復(fù)紅液：堿佳品紅 1g ，間苯二酚 2g ，蒸餾水 200m1 ，30% 三氯化鐵1.25ml ，濃鹽酸 2ml 。取一個(gè) 300ml 燒杯，放入堿性品紅、間苯二酚和蒸餾水，用玻璃棒攪拌，加熱煮沸。再慢慢參加 30% 三氯化鐵液，在攪拌下繼續(xù)煮沸 35min 。冷卻后過(guò)濾，傾去濾液。將濾紙 和 沉淀物一同放入燒杯內(nèi)， 置于枯燥箱內(nèi)烘干。 取出后參加 95% 乙醇 100ml ，在水 鍋內(nèi)加熱， 并不斷攪拌至沉淀物完全溶解，取出濾紙，冷卻后過(guò)濾。補(bǔ)足因蒸發(fā)失去 的乙醇

32、至 100ml 。 最后加濃鹽酸 2ml ，混合后即可使用。 染色方法 (3) 間苯二酚復(fù)紅液染 12h 。(4) 用 95% 乙醇液洗去多余染液。如果染色較深可用 0.2% 鹽酸乙醇分化。(5) 自來(lái)水沖洗 2min 。(6) 用 VanGieson 液復(fù)染 lmin 。(7) 95% 乙醇急速分化。(8) 無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果彈力纖維深藍(lán)黑色，膠原纖維紅色，背景黃色。3、 Hart 改良間苯二酚復(fù)紅染色法此法由 Weigert 法經(jīng)過(guò)改良后開(kāi)展而來(lái)。特點(diǎn)是將Weigert 染液用 1% 鹽酸乙醇溶液配制成稀釋溶液，進(jìn)行過(guò)夜染色，可顯示出較細(xì)的彈力纖 維。 固定 甲醛

33、固定液和其他固定液。 試劑配制 (1) 酸性高錳酸鉀水溶液 0.5% 高錳鉀水溶液 50m1 ，3%硫酸水溶液 2.5m1 。此液分別配制， 臨用時(shí)按比例混合使用(2) Weigert 稀釋液 Weigert 原液 l0ml ，1% 鹽酸乙醇溶液 90ml 。此液可保存一定時(shí)間。 染色方法 (1) 石蠟切片，脫蠟至水。(2) 酸性高錳酸鉀水溶液氧化 5min 。(3) 自來(lái)水洗 23min 。(4) 用 1% 草酸水溶液漂白至無(wú)色。(7) 直接用 Weigert 稀釋液浸染過(guò)夜。(8) 用 1% 鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘或直接入 95% 乙醇液中稍分化。(9) 充分水洗 5l0min 。(l0) 用

34、 VanGieson 液、 1% 中性紅或 HE 進(jìn)行比照染色。(11) 95 財(cái)乙醇及無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。 結(jié)果彈力纖維呈藍(lán)黑色，其他組織呈復(fù)染的顏色。4 、 Gomori 醛復(fù)紅染色法醛復(fù)紅染色液是 Gomori 在 Schiff 試劑的使用和實(shí)驗(yàn)期間偶然發(fā) 現(xiàn)的。 醛復(fù)紅是堿性品紅參加三聚乙醛和鹽酸配制而成， 作為一種酸性催化劑， 可 使三聚乙 醛逐漸解聚產(chǎn)生乙醛。 乙醛有較高的活性， 釋出后與堿性品紅染料外露的 氨基起反響而產(chǎn)生 偶氮甲堿，這時(shí)顏色轉(zhuǎn)變?yōu)樯钭仙?，是謂成熟，稱為醛復(fù)紅染液。 這秧成熟的醛復(fù)紅對(duì)特殊 的蛋白質(zhì)及含硫酸根的粘多糖具有很強(qiáng)的親合力， 和彈力纖

35、 維結(jié)合很緊。 另外， 對(duì)肥大細(xì)胞 顆粒、脂褐素、乙型肝炎外表抗原 (HBsAg) 、胃主 細(xì)胞、 胰島的 ?細(xì)胞和腦垂體的嗜堿細(xì)胞， 也能很好著色。固定 各種固定液，但以甲醛生理鹽水液固定的染色效果最正確。 試劑配制 (1) 醛復(fù)紅染液堿性復(fù)紅 0.5g ，濃鹽酸 1m1 ，70% 乙醇 100ml ，三聚乙醛 1m1 。將堿 性復(fù) 紅溶于 70% 乙醇，然后參加濃鹽酸和三聚乙醛，輕輕搖動(dòng)使混合均勻，于室溫下靜置 12 日，待變?yōu)樽仙礊槌墒?。過(guò)濾于小口砂塞瓶，置冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?2) 橘黃 G 染色液橘黃 G2g ，蒸餾水 100m1 ，磷鎢酸 5g 。 染色方法 (3) 稍水洗。(4)

36、5% 硫代硫酸鈉液處理 5min 。(5) 流水沖洗 5min 。(6) 70% 乙醇稍洗。(7) 入醛復(fù)紅液 l0min 。(8) 70% 乙醇浸洗 2 次，每次約 30s ，至切片不再脫色為止。(9) 稍水洗。(10) 橘黃 G 液滴染約 1s 。(11) 蒸餾水洗 12min 。(12) 95% 乙醇無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果彈力纖維呈深紫色，其他為復(fù)染色。 說(shuō)明 還可用淡綠橘黃 G 液、 Masson 三色液、 VanGieson 液等復(fù)染，但不宜過(guò)深5 、 Pinkus 酸性地衣紅 - 姬姆薩染色法 固定 10% 甲醛液、 Helly 液或 Zenker 液均可。

37、試劑配制 (1) 地衣紅染色液地衣紅 1g ，70% 乙醇 100m1 ，濃鹽酸 0.6m1 。地衣紅溶于乙醇內(nèi)然 后再 參加濃鹽酸。(2) 姬姆薩液取姬姆薩原液 5 滴，加蒸餾水 100ml 。(3) 伊紅乙醇液伊紅 Y59 ， 95% 乙醇 100m1 ，混合后不停攪拌。溶解后即可使用 染色方法 (3) 地衣紅液染 3060min (4) 95% 乙醇分化，洗去多余染液。(5) 用 1% 鹽酸乙醇處理 25min ，直至背景無(wú)色為止。需鏡下控制。(6) 流水沖洗 5l0min 。(7) 姬姆薩稀釋液浸染 2h 過(guò)夜。(8) 用 95% 乙醇分化，伊紅乙醇液 (95% 乙醇中滴數(shù)滴 )中染色

38、，直到大量的藍(lán)色從 結(jié)締組織 中脫掉為止?？稍阽R下控制。(9) 無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果 )細(xì)胞核深藍(lán)色， 彈力纖維深棕到黑色， 膠原纖維粉紅到淺藍(lán)色， 黑色素呈 綠色到棕色， 嗜伊紅顆粒呈紅色至紫色，細(xì)胞核呈深藍(lán)色。6 、 Uana 地衣紅染色法 固定 甲醛液或其他固定液。 試劑配制 Uana 地衣紅染色液：地衣紅 lg,70% 乙醇 99ml ，濃鹽酸 1m1 。將地衣紅 溶于乙 醇內(nèi)，然后參加濃鹽酸。放置冰箱中保存?zhèn)溆谩?染色方法 (1) 組織切片，脫蠟至水。(2) 在 70% 乙醇中 2min 。(3) 置 Uana 地衣染色液中 1530min( 系溫箱內(nèi)所需時(shí)間

39、，室溫中浸染過(guò)夜 )。(4) 70% 乙醇液分化至無(wú)多余染液脫下為止。(5) 可用 VanGieson 液復(fù)染。結(jié)果彈力纖維呈棕紅(6) 95% 乙醇、無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固色至暗棕色，其他組織呈復(fù)染的顏色。7 、 Gomori 改良醛復(fù)紅 - 阿爾辛籃染色法 固定 各種固定液，但以乙醇或 Bouin 固定液固定效果最正確。試劑配制 醛復(fù)紅 -阿爾辛藍(lán)染液：鹽基性復(fù)紅 0.5g ，阿爾辛藍(lán) 0.6g ，70%乙醇 98m1 ， 濃 鹽酸 1ml ，三聚乙醛 1m1 。將復(fù)紅和阿爾辛藍(lán)依次溶于乙醇內(nèi)，然后參加鹽酸和三 聚乙醛， 充分混合搖勻， 放置室溫中 24h ，使其自然成熟后

40、即可使用。 該液用后須 貯存于冰箱中可保 存 23 個(gè)月。 染色方法 (1) 石蠟切片，脫蠟至水。(2) 用醛復(fù)紅 -阿爾辛藍(lán)液染 12h 。(3) 70% 乙醇液漂洗 2 次，約 35min 。(4) 蒸餾水稍洗。(5) 用焰紅 B 液染色 10l5min 。(6) 直接用無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果彈力纖維呈深紫色，背景呈藍(lán)綠色或其他復(fù)染的顏色。8 、 Darrow 合成地衣紅改良法 (1952 年) 固定 Zenker 液、 Bouin 液、 10% 甲醛均可。 試劑配制 (1) A 液 0.4g 合成地衣紅溶于 100m1 含有 1% 濃鹽酸的 70% 乙醇中。(2)

41、B 液即 Mallory 硼砂亞甲藍(lán)液，其貯存原液為 1g 亞甲藍(lán)與 1g 硼砂溶于 100m1 蒸餾水 中。用時(shí)將此原液 lml 加蒸餾水至 9ml 即可。 染色方法 (2) 在 A 液中染 30min(3) 在 70% 乙醇中稍洗 2 次。(4) 蒸餾水中洗 2 次。(5) 在稀釋的 B 液中染 5min 。(6) 蒸餾水洗。(7) 在含有 0.5% 透明松香 (Colophony ， rosin) 的 95% 乙醇中分色并脫水 2min 。切片要 經(jīng)常 搖動(dòng)，在鏡檢下掌握染色結(jié)果。(8) 在無(wú)水乙醇中快速完成脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果 彈力纖維呈深紫色或紅紫色，核藍(lán)色。9 、

42、Fraenkel 多色染色法 (Lillie ，1965 年) 顯示目的 彈性硬蛋白、膠原纖維、肌肉和核。 固定 任何固定劑。 試劑配制 A 溶液： 地衣紅 1.5g ， 95% 乙醇 120ml ，蒸餾水 60ml ，硝酸 6mI 。向含有 3%HCl 的 70% 乙醇參加足量的上述貯存液，使溶液呈棕色。B 溶液，在飽和的苦味酸水溶液中溶以 0.25% 的靛姻脂紅 (Indigocarmine) 。C 溶液，即 Orth 鋰煙脂紅染色液。 將 2.55g 煙脂紅溶于飽和碳酸鋰水溶液中 ( 約 1.25%) ， 煮沸 1015min ，冷卻過(guò)濾并加 lg 百里蠶粉。 染色方法 (1) 按常規(guī)切

43、片脫蠟至水。(2) 用 C 液染 25min ，使核雖紅色。(4) 在 A 液中染 24h 。(5) 在 80% 乙醇中分色。(7) 在 3.5% 醋酸中洗。(8) 在 95% 與 100% 乙醇中快速脫水。(9) 二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果核紅色，彈性硬蛋白深棕色，膠原纖維藍(lán)綠色，肌肉黃色。10 、堿性藍(lán) B 染色法固定 10% 甲醛液、乙醇液或 Zenker 液均可。 試劑配制 (1) 堿性藍(lán) B 乙醇溶液堿性藍(lán) B0.60.8g ，70% 乙醇 100ml 。(2) 氫氧化鉀乙醇液氫氧化鉀 0.05g ，70% 乙醇 100ml 。 染色方法 (1) 石蠟切片，脫蠟至水。(2) 在

44、70% 乙醇中 lmin ，入堿性藍(lán) B 乙醇液 510min 。(3) 蒸餾水速洗。(4) 用 4% 鐵明礬溶液處理 23min 。(5) 蒸餾水速洗。(6) 入 50% 乙醇內(nèi) 12min 。(7) 用 0.05% 氫氧化鉀乙醇液分化 35s 。(10) 蒸餾水略洗。(11) 用 95% 乙醇及無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果彈力纖維呈藍(lán)色，膠原纖維及背景呈紅色，紅細(xì)胞呈紫紅色11 、顯示彈力纖維的 VBM 染色法固定中性甲醛固定，石蠟包埋切片 試劑配制 (l)Martiusyellow 染色液馬休黃 0.5g ， 95% 乙醇 98m1 ，磷鎢酸 0.5g 。(2)Victo

45、riablue 染色液詳見(jiàn)顯示彈力、膠原纖維的雙重組合染色法。 染色方法 (1) 組織切片脫蠟至水。(2) 切片入 70% 乙醇中洗 2min 。(3) 將切片浸入 Victoriablue 染色中 2h 。(4) 用 95% 乙醇分化 lmin 。(5) 浸入蒸餾水中洗 2 次。(6) 用馬休黃染色液染 lmin 。(7) 快速用無(wú)水乙醇沖洗 2 次。(8) 二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。 結(jié)果 彈力纖維呈藍(lán)色，背景黃色。12. 顯示彈力、膠原纖維的雙重組合染色法 (1992 年 ) 固定 中性甲醛液，石蠟包埋切片。 試劑配制 200m1 。將上述物質(zhì)混合后加熱煮沸，邊煮邊攪拌，約 5min 。

46、然后用另一容器取 30% 三 氯化鐵水溶液 25ml ，另行加熱煮沸后慢慢倒入上述混合液中，繼續(xù)煮沸 3min ，不斷攪 拌 溶液呈膠體狀。去火冷卻過(guò)濾，將濾紙上的殘?jiān)B同濾紙一起放在60 C恒溫箱中烤干。殘?jiān)噬钏{(lán)色細(xì)顆粒狀粉末，再將其溶于 400m1 的 70% 乙醇液中。然后加濃鹽酸 4ml 和 苯 酚 5g ，放置至成熟后使用。(2)麗春紅 S 染色液 0.5%麗春紅 (ponceau's- 上海試劑三廠出品 )l5ml ，加苦味酸飽和水溶 液 (1.22%)85m1 。 染色方法 (1) 組織切片脫蠟至水。(2) 切片入 70% 乙醇中洗 2min 。(3) 將切片浸入盛有維

47、多利亞藍(lán)液中染 0.52h 。(4) 直接入 95% 乙醇中分色數(shù)秒鐘。(5) 用蒸餾水洗 2min 。(6) 用麗春紅 S 液滴染切片 2min 。(7) 直接用無(wú)水乙醇沖洗多余染色液 2 次。(8) 將切片在空氣申或冷風(fēng)枯燥。(9) 二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。結(jié)果 彈力纖維呈藍(lán)綠色，膠原纖維呈紅色，背景呈淡黃色。第二章肌肉組織 肌組織主要由肌細(xì)胞構(gòu)成，根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能，又分為骨骼肌、 心肌和平滑肌，而骨骼肌 和心肌的肌纖維含有橫紋， 所以又稱為橫紋肌。 其根本病 變主要是指肌纖維的變性、 壞死和 的病理變化特點(diǎn)是腫瘤細(xì)胞可出現(xiàn)橫紋肌纖維，可 用磷鎢酸蘇木素( PTAH )來(lái)顯示肌纖維 成分。

48、第一節(jié)橫紋肌組織Mallory 磷鎢酸蘇木素染色法( PTAH )1. 試劑配制 1 Mallory 磷鎢酸蘇木素液 PTAH 蘇木素 0.1g ，磷鎢酸 2g ，蒸餾水 100ml 。 將蘇木素置 20ml 蒸餾水中加熱溶解，再將磷鎢酸溶于 80ml 蒸餾水中。蘇木素冷卻 后 參加磷鎢酸溶液，混合后置放，經(jīng)陽(yáng)光處理數(shù)周至數(shù)月才成熟。2高錳酸鉀氧化液 0.5% 高錳酸鉀水溶液 50ml ，0.5% 硫酸水溶液 50ml 。2. 染色步驟1中性甲醛液固定組織，石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。 2 在高錳酸鉀液中氧化 5-10min 。 3 自來(lái)水洗 2 次后，用 1% 草酸漂白 2min 。 4 自來(lái)水

49、洗，蒸餾水洗 2 次。 5 浸入 MalloryPTAH 液中 12-48h 。 6 直接用 95% 乙醇分化。7無(wú)水乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹(shù)膠封固。3. 染色結(jié)果 胞核、纖維、肌肉、神經(jīng)膠質(zhì)纖維、纖維素、橫紋肌等均呈藍(lán)色； 膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、軟 骨基質(zhì)及骨呈黃色或玫瑰紅色； 粗彈力纖維有時(shí)被染色成微 紫色； 有缺血缺氧早期病變的心 肌呈紫藍(lán)色或棕黃色。4. 本卷須知1此液在室溫下自然成熟后，置冰箱內(nèi)保存可使用多年時(shí)間，其效果不減。 2 如果實(shí)驗(yàn)時(shí)急需用試劑，可在 PTAH 染色液中參加 0.15g 的高錳酸鉀，以加 快促 使成熟。 395% 乙醇分化時(shí)應(yīng)注意在切片上保存一定的紅色， 然

50、后用無(wú)水乙醇快速脫水， 冷 風(fēng)稍枯燥后封固。第二節(jié)早期心肌病變組織染色早期心肌梗死是近年來(lái)被稱為早期心肌病變，從 60 年代開(kāi)始，有許多作者都對(duì)心 肌病 變進(jìn)行方法學(xué)研究，其共同特點(diǎn)是選用酸堿性復(fù)紅對(duì)缺氧心肌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié) 果證明了心 肌病變的可靠性， 這種缺氧心肌對(duì)酸性復(fù)紅的親和力稱嗜復(fù)紅性， 對(duì)堿 性復(fù)紅的親和力稱為 親復(fù)紅性。在實(shí)驗(yàn)中還可用 PAS 法來(lái)顯示早期心肌病變中的糖原 減少或消失。以便作為對(duì) 照的鑒別診斷。一、 Nagar-Olsen 染色法 1974 年此法顯示缺氧心肌的蘇木素堿性復(fù)紅苦味酸染色法，簡(jiǎn)稱 HBFP 。1. 試劑配制 1 Harris 蘇木素液 2 堿性復(fù)紅染色液

51、堿性復(fù)紅 0.1g ，蒸餾水 100ml 。2. 染色步驟1中性甲醛液固定組織，石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。 2 入明礬蘇木素液 10-30s 。3自來(lái)水沖洗 5min ，用蒸餾水洗 2 次。 4 堿性復(fù)紅染色液 3min 。5蒸餾水洗 5-10s 6 純丙酮洗 5s 。 7 0.1% 苦味酸純丙酮液迅速分化 5-15s 。 8 純丙酮脫水、二甲苯透明、中性樹(shù)膠封固。3. 染色結(jié)果 缺氧心肌、紅細(xì)胞呈紅色，正常心肌呈黃色或黃棕色，細(xì)胞核呈黃色。4. 本卷須知本法屬于退行性染色， 關(guān)鍵是在苦味酸丙酮液中分化， 復(fù)紅液對(duì)缺氧心肌染色力較 強(qiáng)， 而分化時(shí)也相對(duì)的抵抗力較大， 其脫色慢些； 但正常心肌對(duì)分

52、化液的抵抗力差， 即脫色快些， 因此需要將切片浸入分化液中而不停的快速上下移動(dòng)屢次后， 即用丙酮 進(jìn)行脫水， 在鏡下觀 察脫色情況，如果分化缺乏可再進(jìn)行分色。 第三章神經(jīng)組織第一節(jié)神經(jīng)元及神經(jīng)纖維一、神經(jīng)元及神經(jīng)纖維的結(jié)構(gòu) 神經(jīng)組織主要是由具有長(zhǎng)突起、 能傳導(dǎo)沖動(dòng)的神經(jīng) 細(xì)胞組成。 神經(jīng)細(xì)胞是神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié) 構(gòu)和功能單位，所以又稱神經(jīng)元。神經(jīng)元集中于大腦、小腦皮質(zhì)、腦干、脊髓的灰質(zhì)以及神經(jīng)節(jié)內(nèi)。神經(jīng)元的胞體聚 集成 核團(tuán)，而神經(jīng)元的軸突組成纖維束；在周圍神經(jīng)中，神經(jīng)元的胞體組成神經(jīng)節(jié)， 軸突組成神 經(jīng)束。神經(jīng)元由細(xì)胞體、樹(shù)突和軸突構(gòu)成。神經(jīng)元的細(xì)胞體具有和其他細(xì) 胞一樣的結(jié)構(gòu)，即 外表有細(xì)胞膜、

53、 中有細(xì)胞質(zhì)、 內(nèi)有細(xì)胞核。 胞體的形態(tài)、 大小 各異， 有圓形、 錐形、 星形等。 一般細(xì)胞核位于胞體的中央，為泡狀，核仁極明顯； 胞質(zhì)結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，含有神經(jīng)原纖維、尼 氏小體、高爾基體、線粒體、內(nèi)含物、色素等， 其中神經(jīng)原纖維和尼氏小體是神經(jīng)元特有的 至多個(gè)樹(shù)突，軸突只有一個(gè)神經(jīng)纖維由從神經(jīng)元發(fā)出的軸突和較長(zhǎng)的樹(shù)突以及包裹在外的構(gòu)造一起組成， 在 腦與脊 髓內(nèi)走行于白質(zhì)中， 并為外周神經(jīng)系統(tǒng)的一局部。 軸突中主要為神經(jīng)原纖維 和少量胞漿及線 粒體，沒(méi)有尼氏小體。軸突外周的構(gòu)造，有些較為復(fù)雜，外層被鞘膜 包裹，稱為有髓纖維； 有些比較簡(jiǎn)單，無(wú)鞘膜被覆。稱為無(wú)髓纖維。二、神經(jīng)元和神經(jīng)纖維的染色在

54、常規(guī) HE 染色中雖然可觀察到神經(jīng)元及神經(jīng)纖維的全貌， 但是細(xì)微的結(jié)構(gòu)和某 些特殊 成分還需用特殊的染色方法來(lái)顯示。用鍍銀法可以在神經(jīng)元胞漿中看到許多交錯(cuò)成網(wǎng)的細(xì)絲， 并伸入樹(shù)突之中， 這在 HE 染 色中是看不到的。電鏡下可見(jiàn)它們是粗約 120 ? 的微絲或直徑約 250 ? 的微管集 合成的束。 神經(jīng)原纖維可能與維持細(xì)胞的外形和細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的傳遞有關(guān)。 某些疾病時(shí)， 神經(jīng)原纖維集結(jié)， 可用鍍銀染色清晰地顯示。在神經(jīng)組織的疾病診斷和科研中， 均需要應(yīng)用顯示神經(jīng)元及神經(jīng)纖維的染色方法 進(jìn)行觀 察。如一些中毒性外圍神經(jīng)疾病、維生素 B1 缺歹癥、麻風(fēng)病及其他外周神經(jīng) 病變時(shí)，可用 特殊染色法來(lái)進(jìn)行

55、觀察損害程度。 當(dāng)神經(jīng)纖維遭受橫斷外傷時(shí)， 神經(jīng) 纖維可發(fā)生變性、 崩解、 自斷端向兩側(cè)開(kāi)展，嚴(yán)重者導(dǎo)致潰變，神經(jīng)原纖維腫脹、碎 裂，繼而成為顆粒狀。神經(jīng)元及 神經(jīng)纖維染色在診斷和鑒別某些神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤方面也 經(jīng)常應(yīng)用。神經(jīng)元和神經(jīng)纖維的染色法較多， 但主要為鍍銀法。 鍍銀法的根本原理是把固定 后的組 織或切片浸于銀溶液中， 再用復(fù)原劑處理， 使銀顆粒沉著于軸索的軸漿中， 使 之呈現(xiàn)深棕色 或黑色。鍍銀后可在神經(jīng)元胞漿內(nèi)看到許多交錯(cuò)成網(wǎng)的細(xì)絲，并伸入樹(shù) 突及軸突之中。1 Bielschowsky 冰凍切片法引自 Davenport ， Windle 與 Beech ( 1934 年 ) 和 Beech 與 Davenport (1933 年 )，原 由 Bielschowky(1904 年， 1909 年 )所作?！撅@示目的】神經(jīng)細(xì)胞及其突起，神經(jīng)原纖維?！竟潭ā?10% 甲醛液?！驹噭┡渲啤?氨銀液： 于 20% 硝酸銀溶液 5ml 中參加 6 滴 4