VP-A-010-00紅霉素中二氯甲烷殘留檢驗方法驗證方案(0112)

1、編號：VP-A-012-00 版本號：00 紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報告0紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報告紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報告Validation Report of Methylene Chloride and Chloroform Residue Test Method in Erythromycin驗證方案編號：VP-A-012-00版 本 號：00編號：VP-A-012-00 版本號：00 紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報告1目目 錄錄1.概述概述 .21.1 產(chǎn)品概述.21.1.1產(chǎn)品名稱.21.1.2產(chǎn)品化學結(jié)構(gòu)

2、式.21.2 方法建立概述.22.檢測方法檢測方法 .32.1 溶劑殘留接受標準.32.2 方法描述.32.2.1 儀器.32.2.2 試劑.32.2.3 溶液配制.32.2.4 色譜條件.32.2.5 系統(tǒng)適應性.42.2.6 計算.43 驗證內(nèi)容驗證內(nèi)容 .53.1 試劑及儀器.5A檢測用試劑.5B樣品 .5C儀器和設備 .53.2 驗證溶液配制.53.3 操作.63.4 驗證項目.63.4.1精密度.63.4.2線性.83.4.3 回收率.83.4.4 定量限、檢測限.93.4.5耐用性.104.驗證結(jié)果評定與結(jié)論驗證結(jié)果評定與結(jié)論 .11編號：VP-A-012-00 版本號：00 紅霉

3、素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報告21.1.概述概述1.11.1 產(chǎn)品概述產(chǎn)品概述1.1.1 產(chǎn)品名稱中文名：紅霉素英文名：ERYTHROMYCIN1.1.2 產(chǎn)品化學結(jié)構(gòu)式分子式：C37H67NO13 結(jié)構(gòu)式：1.21.2 方法建立概述方法建立概述我公司生產(chǎn)的紅霉素在生產(chǎn)過程中使用了二氯甲烷，該溶劑的測定方法按照 VP-A-004-00 進行了驗證，但是由于使用了 FID 檢測器，對二氯甲烷的靈敏度不高，因此驗證結(jié)并不是很理想，特別是當二氯甲烷的濃 度較低時，準確度難以保證，該方法使用電子捕獲檢測器（ECD）對二氯甲烷的檢測重新驗證。試劑二氯甲烷中含有少量三氯甲烷，因此同時對三氯甲烷

4、也需要檢測監(jiān)控。色譜系統(tǒng)和條件參照美國藥典（USP）467 專論和歐洲藥典（Ph.Eur）2.4.24 專論。編號：VP-A-012-00 版本號：00 紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報告32.2.檢測方法檢測方法2.12.1 溶劑殘留接受標準溶劑殘留接受標準溶劑二氯甲烷三氯甲烷限度600ppm60ppm2.22.2 方法描述方法描述2.2.1 儀器萬分之一分析天平 Agilent6890N GC with 7694E Headspace2.2.2 試劑DMSO(HPLC)；二氯甲烷(AR)；三氯甲烷（AR） 2.2.3 溶液配制樣品溶液：取樣品約 0.50g，精密稱定，用 DMS

5、O 溶解，并稀釋至 50ml；溶劑溶液：取二氯甲烷約 3.0g，三氯甲烷約 0.3g，精密稱定，用 DMSO 溶解，并稀釋至 100ml，精密量取 1.0ml，用水稀釋至 100ml,精密量取 1.0ml，用水稀釋至 10ml。 空白溶液：按照溶劑溶液的配制方法配制空白溶液，但是沒有二氯甲烷和三氯甲烷。 供試液：精密量取 5.0ml 樣品溶液+1.0ml 空白溶液于 20ml 頂空瓶中；（三樣） 對照液 A：精密量取 5.0ml 樣品溶液+1.0ml 溶劑溶液于 20ml 頂空瓶中；（三樣） 對照液 B：精密量取 5.0ml DMSO +1.0ml 空白溶液于 20ml 頂空瓶中.2.2.4

6、色譜條件色譜柱：DB624， 30m0.32mm1.8um載氣：氮氣；流速：35cm/s ；頂空溫度：樣品瓶溫 105；定量環(huán)溫 110；傳輸線溫 110；進樣條件：加熱平衡 45min，樣品瓶加壓 0.5min，定量環(huán)充樣 0.03min，定量環(huán)平衡0.2min，進樣 1.0min；爐溫：40保持 15min，以 20/min 的速度升溫至 240，保持 2min；檢測器：ECD，溫度 250，進樣口溫度 140。操作編號：VP-A-012-00 版本號：00 紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報告4進樣對照液 B；進樣對照液 A；進樣供試液。2.2.5 系統(tǒng)適應性對照液 A 三針的

7、 RSD 不大于 10%2.2.6 計算 22100TRRTTAMCH CLppmAAM（）3100TRRTTAMCHCLppmAAM（）其中：AT為供試液平均峰面積；AR 為對照液平均峰面積； MR為對照液二氯甲烷或三氯甲烷的稱樣量；MT為樣品的稱樣量。編號：VP-A-012-00 版本號：00 紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報告53 3 驗證內(nèi)容驗證內(nèi)容3.13.1 試劑及儀器試劑及儀器A檢測用試劑檢測用試劑試劑名稱批號廠家等級DMSO408168美國天地公司HPLC二氯甲烷20040325國藥集團化學試劑有限公司AR三氯甲烷0603092廣東汕頭市西隴化工廠ARB樣品樣品樣品

8、名稱紅霉素/批號ERY2-200707001/C儀器和設備儀器和設備儀器名稱型號數(shù)量校正有效期至氣相色譜儀6890N12009 年 5 月 17 日自動頂空進樣器7694E12009 年 5 月 17 日3.23.2 驗證溶液配制驗證溶液配制 樣品溶液配制：取樣品約 2.5g，精密稱定,用 DMSO 溶解并稀釋至 250ml。 對照儲備液：取二氯甲烷約 3.0g，三氯甲烷約 0.3g，精密稱定，用 DMSO 溶解并稀釋至 100ml，精密量取 1.0ml， 用水稀釋至 100ml。 各濃度對照液：分別取對照儲備液 1.0ml，2.0ml，4.0ml，5.0ml 和 7.5ml 于 5 個50m

9、l 容量瓶中，用水稀釋至刻度。配制成 20%，40%，80%，100%和 150%的對照液。 空白溶液：按照對照液的配制方法配制空白溶液，但是沒有二氯甲烷和三氯甲烷。 0%溶液：精密量取 5.0ml 樣品溶液+1.0ml 空白溶液于 20ml 頂空瓶中(平行三樣)； 20%-150%樣品溶液：精密量取 5.0ml 樣品溶液+1.0ml 對應濃度對照液于 20ml 頂空瓶中(平行三樣)；100% 對照溶液：精密量取 5.0ml DMSO +1.0ml 對應濃度對照液 (100%)于 20ml 頂空瓶中（平行六樣） 。編號：VP-A-012-00 版本號：00 紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方

10、法驗證報告63.33.3 操作操作按照 0%、20%、40%、80%、100%、150%樣品溶液、100%對照的順序進樣，記錄各樣的峰面積，結(jié)果見表 1。 （以下記錄峰面積均為扣除空白后面積）表 1溶液0%20%40%80%100%150%100%對照55.4373.6719.41221.21516.12159.51615.01536.651.5383.6713.11233.91480.52099.61535.51546.5二氯甲烷56.0390.6736.01178.41450.02011.61516.21545.8平均值54.3382.6722.81211.21482.22090.2154

11、9.3RSD4.5%2.2%1.6%2.4%2.2%3.6%2.2%372.01329.42634.44841.56295.39615.56536.66326.9332.51357.72603.44905.56144.99277.76271.76359.5三氯甲烷363.81415.52707.44724.56039.58909.26184.36296.2平均值256.11367.62648.44823.86159.99267.56329.2RSD5.8%3.2%2.0%1.9%2.1%3.8%1.9%操作人/日期： 3.43.4 驗證項目驗證項目3.4.1精密度精密度1系統(tǒng)精密度計算 40%

12、、80%、150%樣品溶液各自三針的 RSD，查看系統(tǒng)精密度（具體數(shù)據(jù)參見表 1） ，結(jié)果見表 2。表 2溶液濃度40%80%150%二氯甲烷 RSD1.6%2.4%3.6%三氯甲烷 RSD2.0%1.9%3.8%編號：VP-A-012-00 版本號：00 紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報告72方法精密度計算 100%對照液 6 針的 RSD， 查看方法精密度，結(jié)果見表 3。表 3測定次數(shù)123456RSD二氯甲烷面積1615.01536.61535.51546.51516.21545.82.2%三氯甲烷面積6536.66326.96271.76359.56184.36296.21

13、.9%結(jié)論： 該方法精密度良好，RSD 均小于 3.0%，能滿足分析要求。操作者/日期： 3中間精密度按照 3.3.2 配制溶液 40%（三份） 、80%（三份） 、和 150%（三份） ，100%對照溶液（六份） ，在另一天由另一 QC 員進行實驗。計算中間精密度，結(jié)果見表 4、表 5。表 4溶液濃度40%RSD80%RSD150%RSD482.5998.61621.7477.41028.91583.3二氯甲烷444.14.5%1011.61.5%1647.22.0%1951.54298.57371.91981.94464.97197.7三氯甲烷1850.13.6%4366.41.9%752

14、3.32.2%結(jié)論：中間精密度良好，RSD 均小于 5.0%，表明方法重現(xiàn)性較好操作者/日期：編號：VP-A-012-00 版本號：00 紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報告8表 5測定次數(shù)123456RSD二氯甲烷面積1290.01264.41216.01211.71226.21201.92.8%三氯甲烷面積6046.95560.45353.25309.25384.35366.85.1%結(jié)論：結(jié)果表明儀器精密度良好，RSD 小于 10.0%。操作者/日期： 3.4.2線性線性把 20%、40%、80%、100%，150%樣品溶液的峰面積平均值分別減去溶液 0%的平均值，以溶液中二氯

15、甲烷和三氯甲烷的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，進行二元線性回歸，計算方法的線性和相關系數(shù)，結(jié)果見表 6。表 6溶液濃度0%20%40%80%100%150%峰面積54.3382.6722.81211.21482.22090.2二氯甲烷調(diào)整面積/328.3668.51156.81427.92035.9峰面積256.11367.62648.44823.86159.99267.5三氯甲烷調(diào)整面積/1059.52351.34368.45683.48553.1二氯甲烷線性公式： y=43.215x112.26 r2=0.9976三氯甲烷線性公式： y=1957.5x52.095 r2=0.9996要求

16、：r20.98結(jié)論：線性關系良好,線性范圍分別為: 二氯甲烷 119891ppm，三氯甲烷 1287ppm。操作者/日期： 3.4.3 回收率回收率把樣品溶液 20%、40%、80%、100% 150%的峰面積平均值分別減去溶液 0%的平均值，再除以對照 100%的平均值，分別乘以 5、2.5、1.25、1.0、0.667。以考察各個濃度下方法的回收率?；厥章蕬?80%-120%之間，結(jié)果見表 7。編號：VP-A-012-00 版本號：00 紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報告9表 7溶液濃度0%20%40%80%100%150%峰面積54.3382.6722.81211.2148

17、2.22090.2調(diào)整峰面積/328.3668.51156.81427.92035.9二氯甲烷回收率/106%108%93%92%88%峰面積256.11367.62648.44823.86159.99267.5調(diào)整峰面積/1059.52351.34368.45683.48553.1三氯甲烷回收率/84%93%86%90%90%結(jié)論：二氯甲烷及三氯甲烷回收率均在 80%120%之間，符合回收率要求。二氯甲烷平均回收率為 97%，說明用該方法進行測定，準確度高；三氯甲烷平均回收率為 89%，略偏低，但仍能滿足分析要求。操作者/日期： 3.4.4 定量限、檢測限定量限、檢測限把對照 100%用 D

18、MSO 不斷稀釋，計算待測信號的信噪比，以確定 待測溶劑的檢測限和定量限，以及他們在樣品中的含量限度，結(jié)果見表 8。 表 8檢測限定量限S/N濃度(ug/ml) 樣品中殘留量S/N濃度(ug/ml) 樣品中殘留量二氯甲烷2.90.36ppm11.9120ppm三氯甲烷3.80.010.3ppm11.70.031ppm結(jié)論：由上述實驗可以看出，使用 ECD 檢測器進行檢測，靈敏度高，響應值大。二氯甲烷檢測限為 6ppm，定量限為 20ppm；三氯甲烷檢測限為 0.3ppm，定量限為 1ppm。操作者/日期： 編號：VP-A-012-00 版本號：00 紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗方法驗證報

19、告103.4.5耐用性耐用性 用對照 100%溶液來考察方法的耐用性，僅進行單因素條件試驗，不進行正交試驗（即只改變某一個條件，其它條件不變） ，以二氯甲烷及三氯甲烷的峰面積為考查對象，計算 RSD，結(jié)果見表 9。方面包括如下： 1）頂空瓶平衡時間考查 40min、45min、50min； 2）色譜柱初始溫度考查 42、40、38 3）載氣流速 35cm/s、38cm/s、32cm/s 表 9二氯甲烷三氯甲烷123RTAreaRSDRTAreaRSD4540354.6811104.48.5763997.34538354.8721082.69.0923902.34542354.4601097.61.0%8.0213942.41.2%4040354.6571285.58.5354542.24540354.6561266.48.5324494.65040354.6581214.12.9%8.5374295.32.9%4540384.3131207.17.8884421.1454