細(xì)胞工程細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室組成及無菌操作技術(shù)精選文檔PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1第1頁/共67頁基本實(shí)驗(yàn)室輔助實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室組成準(zhǔn)備室（通用實(shí)驗(yàn)室）緩沖室無菌操作室培養(yǎng)室細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室溫 室生化分析實(shí)驗(yàn)室第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室組成細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室組成第2頁/共67頁第3頁/共67頁第4頁/共67頁第5頁/共67頁第6頁/共67頁第7頁/共67頁第8頁/共67頁1 1、接種設(shè)備：、接種設(shè)備：無菌超凈工作臺(tái) 用于培養(yǎng)材料的消毒及接種。使用前，將超凈工作臺(tái)上面的排風(fēng)和殺菌按鈕開啟，滅菌15min后，關(guān)閉殺菌按鈕，打開照明按鈕，即可在上面進(jìn)行操作。第9頁/共67頁第10頁/共67頁第11頁/共67頁2 2、高壓蒸氣滅菌鍋、高壓蒸氣滅菌鍋 用于培養(yǎng)基、蒸餾水和接種器械的

2、滅菌消毒。第12頁/共67頁(1)(1)高壓蒸氣滅菌鍋工作原理：高壓蒸氣滅菌鍋工作原理： 在密閉的蒸鍋內(nèi)，0.1MPa的壓力下， 鍋內(nèi)溫度達(dá)121。在此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。第13頁/共67頁(2)(2)使用方法：使用方法：首先檢查滅菌鍋內(nèi)是否有水，而且水剛好淹住加熱器，然后放入滅菌材料，對(duì)稱擰緊滅菌鍋上的螺絲，關(guān)閉放氣閥通電。待壓力上升到0.05MPa時(shí)，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。三次放氣后，關(guān)閥再通電，壓力表上升達(dá)0.1-0.15Mpa時(shí)，維持20min后，斷電，待壓力降至零時(shí)，打開入氣閥，取出滅菌材料。第14頁/共67頁(3)(

3、3)注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：對(duì)高壓滅菌后不變質(zhì)的物品，如無菌水、栽培介質(zhì)、接種用具，可以延長(zhǎng)滅菌時(shí)間或提高壓力。而培養(yǎng)基要嚴(yán)格遵守保壓時(shí)間，既要保壓徹底，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低，不能隨意延長(zhǎng)時(shí)間；對(duì)于一些布制品，如實(shí)驗(yàn)服、口罩等也可用高壓滅菌。洗凈晾干后用耐高壓塑料袋裝好，高壓滅菌20-30min；第15頁/共67頁高壓滅菌前后的培養(yǎng)基，其pH值下降0.2-0.3單位。因此，調(diào)PH值時(shí)，可適當(dāng)調(diào)高0.10.3個(gè)單位。接通電源前一定要加入足量的水。接通電源前一定要加入足量的水。第16頁/共67頁電爐電爐推車推車酒精燈酒精燈封口膜封口膜接種器具接種器具滅菌器滅菌器培養(yǎng)瓶培養(yǎng)瓶3 3、相關(guān)

4、儀器、相關(guān)儀器 第17頁/共67頁4、接種工具、接種工具鑷子解剖刀接種針酒精燈第18頁/共67頁5 5、培養(yǎng)設(shè)備、培養(yǎng)設(shè)備帶日光燈的培養(yǎng)架培養(yǎng)架，主要用于接種后材料的培養(yǎng)。第19頁/共67頁恒溫箱：恒溫箱：又稱培養(yǎng)箱，可用于原生質(zhì)體和酶制劑的保溫，也可用于組織培養(yǎng)材料的保存及暗培養(yǎng)。第20頁/共67頁搖床與轉(zhuǎn)床：搖床與轉(zhuǎn)床：在液體培養(yǎng)基中，可改善培養(yǎng)基中的培養(yǎng)材料的通氣狀況。如從疏松的愈傷組織中獲得單個(gè)細(xì)胞。但注意要設(shè)定適合的溫度及轉(zhuǎn)速。第21頁/共67頁恒溫振蕩培養(yǎng)箱 光照培養(yǎng)箱 第22頁/共67頁6、細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備、細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備 搖搖 床床第23頁/共67頁光學(xué)研究顯微鏡、實(shí)體顯微鏡、倒置顯

5、微鏡倒置顯微鏡倒置顯微鏡光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡7 7、細(xì)胞學(xué)鑒定設(shè)備、細(xì)胞學(xué)鑒定設(shè)備第24頁/共67頁分注器分注器血球計(jì)數(shù)器血球計(jì)數(shù)器移液器移液器磁力攪拌器磁力攪拌器低速臺(tái)式離心機(jī)低速臺(tái)式離心機(jī)第25頁/共67頁8、其它輔助設(shè)備、其它輔助設(shè)備培養(yǎng)基灌裝機(jī)及洗瓶機(jī)培養(yǎng)基灌裝機(jī)及洗瓶機(jī)第26頁/共67頁 除濕機(jī)除濕機(jī)：使培養(yǎng)室的濕度保持在定的范圍內(nèi)?？照{(diào)機(jī)：空調(diào)機(jī)：用于接種室和培養(yǎng)室溫度的控制。第27頁/共67頁烘箱烘箱：用于干燥洗凈后的玻璃器皿，還可用80的溫度烘干組織培養(yǎng)植物材料以測(cè)定干物質(zhì)。冰箱：冰箱：用于在常溫下易變性或失效的試劑和母液的儲(chǔ)藏，細(xì)胞組織和試驗(yàn)材料的冷凍保藏，以及某些材料的預(yù)處

6、理。第28頁/共67頁純水機(jī)與蒸餾水發(fā)生器純水機(jī)與蒸餾水發(fā)生器第29頁/共67頁天平：天平：天平包括分析天平，電子天平，藥物天平等，用于制備母液時(shí)培養(yǎng)基組成成分的稱取。如一些需要量少的激素和微生素類物質(zhì)，天平的精確度要到0.0001g，這就要求精確度更高的分析天平。第30頁/共67頁酸度計(jì)：酸度計(jì)： 用于校正培養(yǎng)基和酶制劑的PH。第31頁/共67頁第32頁/共67頁第二節(jié)第二節(jié) 無菌操作技術(shù)無菌操作技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)儀器及洗滌一、實(shí)驗(yàn)儀器及洗滌二、常用滅菌和消毒方法二、常用滅菌和消毒方法第33頁/共67頁1、 玻璃器皿的選擇與清洗培養(yǎng)皿三角瓶培養(yǎng)瓶試管一、實(shí)驗(yàn)儀器及洗滌一、實(shí)驗(yàn)儀器及洗滌第34頁/共

7、67頁不銹鋼鍋磨口瓶燒杯滴瓶第35頁/共67頁量筒滴定管容量瓶第36頁/共67頁2 2、玻璃器皿洗滌（、玻璃器皿洗滌（* *注意污染的玻璃器皿注意污染的玻璃器皿 P14 P14）新購(gòu)置玻新購(gòu)置玻璃器皿璃器皿1%稀HCl浸漬浸漬12h12h洗衣粉洗衣粉洗滌洗滌清水清水沖洗沖洗晾干晾干備用備用已用過的已用過的玻璃器皿玻璃器皿第37頁/共67頁3、塑料用品洗滌、塑料用品洗滌新的塑料器皿打開即用新的塑料器皿打開即用已用過的已用過的塑料器皿塑料器皿2%NaOH浸泡浸泡12h清水清水沖洗沖洗2%5%鹽鹽酸浸泡酸浸泡30min清水清水沖洗沖洗蒸餾水蒸餾水沖洗沖洗晾干備用晾干備用第38頁/共67頁4 4、金屬

8、用品洗滌、金屬用品洗滌熱洗衣粉水熱洗衣粉水洗凈洗凈沖洗沖洗擦干擦干第39頁/共67頁二、滅菌和消毒方法二、滅菌和消毒方法1、滅菌設(shè)備 蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過濾滅菌裝置、噴霧消毒器、紫外燈。2、滅菌方法、滅菌方法 物理方法：物理方法： 物理滅菌干熱、濕熱、射線處理、物理除菌、 過濾、離心、沉淀等 化學(xué)方法：化學(xué)方法： 消毒劑、抗菌素滅菌第40頁/共67頁3、滅菌、滅菌（1 1）培養(yǎng)基滅菌：）培養(yǎng)基滅菌：高溫高壓濕熱滅菌法 壓力在9.810410.8104Pa溫度在 121滅菌1530min（2 2）玻璃器皿滅菌：）玻璃器皿滅菌：蒸汽高壓消毒滅菌 干熱消毒滅菌第41頁/共67頁（3）接種室滅菌）接種室滅菌空氣消毒空氣消毒滅菌滅菌接種室接種室超凈工超凈工作臺(tái)作臺(tái)紫外燈紫外燈照射照射70%75%的酒精擦洗的酒精擦洗培養(yǎng)材料培養(yǎng)材料的接種的接種紫外燈紫外燈照射照射第42頁/共67頁第43頁/共67頁第44頁/共67頁第45頁/共67頁第46頁/共67頁第47頁/共67頁第48頁/共67頁第49頁/共67頁第50頁/共67頁第51頁/共67頁第52頁/共67頁2 2、化學(xué)方法、化學(xué)方法常用滅菌劑使用濃度及效果比較表第53頁/共67頁第54頁/共67頁第55頁/共67頁一、植物細(xì)胞培養(yǎng)基的組成成分植物細(xì)胞培養(yǎng)基的組成成分第56頁/共67頁第57頁/共67頁第