痰液細(xì)菌學(xué)檢查概要

1、痰液細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)痰涂片鏡檢：選擇痰標(biāo)本中膿細(xì)胞成團(tuán)塊狀分布，集中而不稠密，且周圍無鱗狀上皮細(xì)胞或無 大量成團(tuán)狀分布的細(xì)菌球的區(qū)域?yàn)樽x片區(qū)，認(rèn)真收尋視野中膿細(xì)胞聚集處的膿細(xì)胞 胞漿中有無吞噬的細(xì)菌及細(xì)菌的染色排列特征.接種培養(yǎng):血平板、巧克力平板、麥康凱/沙氏平板培養(yǎng)觀察：一、G+菌:BA生長、Choc不生長、MecK不生長1、G+c 菌：葡萄球菌：淡黃色/白色，中等大小，較凸，規(guī)則圓形,B皚血,較濕潤，除金黃色葡 萄球菌外，一般不具有臨床意義；微球菌：黃色/白色/橙色，中等大小，較凸，規(guī)則圓形，不溶血,較干燥，不易乳化較 葡萄球菌生長緩慢，該菌一般無臨床意義；鏈球菌：白色/灰白色、凸起小菌落，B

2、溶血為溶血型鏈球菌；灰白隆起中心扁平或凹陷，1.0-1.5mm大小的寬大a溶血為肺炎鏈球菌，該菌是最 常見的肺部感染病原菌，在社區(qū)獲得性感染中有重要的地位；細(xì)如針尖，白色凸起a溶血的為草名色鏈球菌，自然咯痰標(biāo)本中的草綠色鏈球菌 一般不具有臨床意義；腸球菌：灰白，低凸,2.0mm左右之a(chǎn)溶血菌落，較濕潤，但一般不具有臨床意義；口腔球菌：白色凸起較大菌落，不溶血,黏著,接種針挑之則整個(gè)菌落挑起，瓊脂 上不留痕跡。該菌偶爾可引起肺部的嚴(yán)重感染，一般好發(fā)生于COPD病人和肺氣月中 病人；學(xué)生球菌：白色、凸起細(xì)小菌落,自容血,生長慢48h僅0.20.4mm,在含羊血的 MH瓊脂上不生長。該菌是上呼吸道的

3、正常菌群組成之一，一般不導(dǎo)致肺部感染；2、G+ b一依靠溶血特征，菌落形態(tài)、菌落大小、菌體形態(tài)區(qū)分：棒狀桿菌：白色1.0-1.5mm左右大小，較干燥,不溶血/狹窄B溶血的為白喉或一 般棒狀桿菌；小而濕潤，灰白/無色，半透明的為J-K棒狀桿菌;灰白細(xì)小,自容血的可能 為假結(jié)核、化膿放線菌、溶血分泌桿菌；除白喉?xiàng)U菌外，假結(jié)核、化膿放線菌、溶血 分泌桿菌是罕見的咽喉部病源菌，棒狀桿菌一般不導(dǎo)致肺部感染；乳桿菌：細(xì)小，白色凸起a溶血菌落，有特殊的酸臭味，口腔正常菌群，無臨床意 義；芽抱桿菌：灰白大菌落，表面粗糙如毛玻璃狀、蠟狀、邊緣不規(guī)則，不同種類菌 落形態(tài)差異巨大，寬大B溶血。延長培養(yǎng)時(shí)間，菌落從濕

4、潤變得干燥，邊緣呈放射狀擴(kuò) 散，形成葉狀、掌狀、雪花狀、齒輪狀等，常常為痰培養(yǎng)的污染菌；根據(jù)形態(tài)分為G- b（革蘭陰性桿菌、G-co（革蘭陰性球菌、以及根據(jù)對(duì)特殊營養(yǎng) 的需求對(duì)苛養(yǎng)性G- b進(jìn)一步分類，常見的如嗜血桿菌，軍團(tuán)菌等：BA生長、Choc生長、MecK生長,一一Gram染色:G- b一氧化酶、分科瓊脂顏 色腸桿菌:氧化酶（-,分科瓊脂上黃色濕潤大菌落；弧菌:氧化酶（+,分科瓊脂上淡黃色扁平大菌落；非發(fā)酵菌：氧化酶（+/-,分科瓊脂上藍(lán)色/無色透明小菌落一鮑曼不動(dòng)桿菌為中等 大小，菌落聚集處產(chǎn)不擴(kuò)散黃色色素，分離菌落為蘭色；BA生長、Choc生長、MecK不生長,Gram染色:G-co

5、氧化酶（+、觸酶（十奈瑟菌：白色/黃色中等大小菌落，該類細(xì)菌為口腔常見正常菌群，該菌在痰培養(yǎng) 中含量的高低反應(yīng)了標(biāo)本采集狀態(tài)的合格程度，大量出現(xiàn)提示培養(yǎng)結(jié)果將是不可信 的；卡他莫拉菌：白色小菌落（24h內(nèi)，菌落有脆性，用接種環(huán)推之可移，是兒科和老年 病人常見的下呼吸道病原菌；BA不生長/細(xì)小、Choc生長、MecK不生長, Gram染色:G-b、菌體細(xì)小或 呈扭曲之長絲狀嗜血桿菌：灰色/無色，半透明，1.5-2.0mm的多為流感嗜血桿菌，該菌為最常見的肺 部感染病原菌，可發(fā)生于各個(gè)年齡層次，其高攜帶與COPD發(fā)病有較強(qiáng)的相關(guān)性；灰色 略黃,不透明，1.0-1.5mm的多為副流感嗜血桿菌。一般副

6、流感嗜血桿菌不導(dǎo)致肺部 感染，大量出現(xiàn)提示培養(yǎng)結(jié)果將是不可信的；BA不生長、Choc不生長、MecK不生長、BCYE- a生長/或在含有L-半胱氨 酸、鐵離子、復(fù)合抗生素選擇劑的強(qiáng)化血瓊脂上生長 一Gram染色:G-b、菌體細(xì)、 長絲狀，提示可能為軍團(tuán)菌：該菌在BCYE- a± 4872 h為中等大小扁平菌落，灰白色， 較粘著;該菌具有較強(qiáng)的生物危險(xiǎn)性，其中嗜肺軍團(tuán)菌可傳染；感染性腹瀉一送檢指征1具感染性腹瀉癥狀：包括細(xì)菌性腹瀉或病毒性，如志賀菌、沙門菌、弧菌科、 致病性大腸埃希菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌和輪狀病毒等；2患者長期使用抗生素后的腹瀉：要考慮抗生素相關(guān)性腹瀉，可能引起的致病菌

7、有念珠菌、金黃色葡萄球菌、艱難梭菌二標(biāo)本采集和注意事項(xiàng)1.標(biāo)本采集：(1糞便標(biāo)本：采集糞便中的粘液、膿血、水樣部位。(2直腸拭子：如不能立即培養(yǎng)，應(yīng)將標(biāo)本放入運(yùn)送培養(yǎng)基或pH7.0的磷酸鹽甘油 中保存運(yùn)送。(3嘔吐物：(4可疑食品。2.注意事項(xiàng)：(1采集新鮮糞便；(2在急性期采集標(biāo)本；(3用藥前采集標(biāo)本；(4厭氧菌培養(yǎng)應(yīng)在床 邊接種。三常見腸道病原微生物的分離與鑒定1.志賀菌:志賀菌屬是引起人類細(xì)菌性腹瀉的最常見病原菌之一。以其。抗原將志賀菌屬分為4個(gè)血清型,痢疾志賀菌、福氏志賀菌、鮑氏志賀菌、宋內(nèi)志賀 菌。我國大部分地區(qū)以福氏志賀菌為主。(1分離培養(yǎng):取糞便的粘液或膿血部分，接種于SS瓊脂和

8、麥康凱瓊脂平板 上,35C過夜培養(yǎng)；(2初步鑒定:挑選無色透明、中等大小、圓形、光滑的菌落接種于KIA和MIU培養(yǎng)基.上，35C過夜培養(yǎng)；(3最后鑒定:取乳糖(斜面陰性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，硫化氫、動(dòng)力、月尿素酶陰性叫深陰性的菌落作生化反應(yīng)和血清凝集試驗(yàn)(4非典型株的處理：對(duì)生化反應(yīng)和血清凝集試驗(yàn)結(jié)果不符合者，可用瓊脂和肉湯 交替?zhèn)鞔?一般經(jīng)5-10代后可恢復(fù)典型性狀；(5臨床意義:志賀菌屬的致病作用主要是侵襲力和內(nèi)毒素，個(gè)別菌的某些型能產(chǎn) 生外毒素。2 .沙門菌:沙門菌屬廣泛存在于自然界中，已發(fā)現(xiàn)有2000多個(gè)血清型，但只有少數(shù)幾個(gè)血清 型對(duì)人類致病。鼠傷寒沙門菌是常見腸道致病菌，由其引起

9、的腹瀉病和院內(nèi)交叉感 染居各沙門菌感染之首，尤其以免疫功能未健全的嬰幼兒易感(1分離培養(yǎng):取患者的糞便(腸熱癥患者2周以后，胃腸炎病人早期、尿液、血液 或骨髓液、其他體液、分泌物、嘔吐物或食物等標(biāo)本，接種增菌培養(yǎng)基或直接接種于SS瓊脂和麥康凱瓊脂平板上，35C過夜培養(yǎng)；(2初步鑒定:挑選無色透明中心呈黑色、中等大小、圓形、光滑的菌落接種于KIA和MIU培養(yǎng)基上，35C過夜培養(yǎng)；(3最后鑒定:取乳糖(斜面陰性,發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣(傷寒沙門菌不產(chǎn)氣，硫化氫 不定，動(dòng)力陽性，月尿素酶、呷咪陰性的菌落作生化反應(yīng)和血清凝集試驗(yàn) ；(4臨床意義:沙門菌屬對(duì)人類致病臨床上表現(xiàn)為腸熱癥(傷寒和副傷寒、敗血癥

10、和食物中毒(腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌和鴨沙門菌等。3 .致病性弧菌：致病性弧菌已成為夏秋季急性流行性腹瀉和食物中毒的重要、常見病原菌 ，包 括弧菌屬、氣單胞菌屬和鄰單胞菌屬。溶血素和腸毒素是弧菌屬重要的致病因子 ； 氣單胞菌能產(chǎn)生腸毒素、溶血素和細(xì)胞毒素等。（1分離培養(yǎng):取患者的糞便、嘔吐物或食物等標(biāo)本，接種增菌培養(yǎng)基（堿性陳水或 直接接種于SS瓊脂、慶大瓊脂或TCBS瓊脂平板上，35C過夜培養(yǎng)；（2初步鑒定:懸滴標(biāo)本運(yùn)動(dòng)活潑（可作制動(dòng)試驗(yàn)，革蘭染色陰性，具有多型性；在選 擇平板上菌落形態(tài)典型；在KIA培養(yǎng)基上不分解乳糖，分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（個(gè)別 產(chǎn)氣，不產(chǎn)硫化氫；氧化酶陽性（

11、麥?zhǔn)匣【鸀殛幮?；?最后鑒定:進(jìn)行生化反應(yīng)和血清凝集試驗(yàn)。4.致腹瀉大腸埃希菌（DCEC:DCEC是引起小兒腹瀉的一組重要病原微生物。1945年Bray首次報(bào)告了大腸 埃希菌引起的嬰幼兒腹瀉，生化反應(yīng)和血清凝集試驗(yàn)作為 DCEC的最后鑒定。（1產(chǎn) 腸毒素型大腸埃希菌（ETEC:ETEC有30個(gè)血清型，可產(chǎn)生兩種腸毒素，即耐熱腸毒素 （ST和不耐熱腸毒素（LT;（2腸致病性大腸埃希菌（EPEC:EPEC有18個(gè)血清型，是流行性嬰幼兒腹瀉的病 原菌，具有高度傳染性。多發(fā)生在夏秋季，臨床表現(xiàn):發(fā)熱、嘔吐、腹瀉、便中多粘液 無血，病程較長；尿液細(xì)菌學(xué)檢查如何看待尿培養(yǎng)結(jié)果？對(duì)尿培養(yǎng)結(jié)果白處理原則是：（1菌落計(jì)數(shù)，G+球菌10轉(zhuǎn)/ml,G一桿菌10階/ml 時(shí)，則報(bào)告細(xì)菌培養(yǎng)鑒定結(jié)果和藥敏結(jié)果，不再報(bào)告細(xì)菌數(shù)量；（2培養(yǎng)結(jié)果小于以上規(guī)定時(shí)，則報(bào)告細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)，通常不報(bào)告藥敏，以免造成誤 導(dǎo)用藥;（3如果細(xì)菌小于規(guī)定細(xì)菌數(shù)，但培養(yǎng)出的細(xì)菌較純，病人又多為慢性泌尿系統(tǒng) 感染時(shí)，則既報(bào)告細(xì)菌鑒定結(jié)果及菌落計(jì)數(shù)結(jié)果又報(bào)告藥敏結(jié)果。（4如果病人在近期多次培養(yǎng)的結(jié)果不一樣，菌落計(jì)數(shù)均小于規(guī)定指標(biāo)時(shí)，這些不穩(wěn)定的細(xì)菌多為正常 菌群,臨床意義