實驗二培養(yǎng)基的配制和滅菌-資料中心-生物在線

1、實驗五實驗五 顯微鏡的使用顯微鏡的使用和細菌的運動性觀察和細菌的運動性觀察一、目的要求一、目的要求了解普通光學顯微鏡的構造和原理，了解普通光學顯微鏡的構造和原理，熟悉其正確的使用方法。熟悉其正確的使用方法。 學習并掌握油鏡的使用方法，學會用學習并掌握油鏡的使用方法，學會用壓滴法或懸滴法觀察細菌運動性的基壓滴法或懸滴法觀察細菌運動性的基本技術。本技術。 二、實驗原理二、實驗原理 （一）普通光學顯微鏡的構造：（一）普通光學顯微鏡的構造： 1. 機械部分：機械部分：鏡座、鏡臂、載物臺、粗細調(diào)節(jié)器、物鏡鏡座、鏡臂、載物臺、粗細調(diào)節(jié)器、物鏡轉(zhuǎn)換器、鏡筒等。轉(zhuǎn)換器、鏡筒等。-支持、調(diào)節(jié)、固定等作用支持、調(diào)

2、節(jié)、固定等作用 2. 光學系統(tǒng)：光學系統(tǒng)：目鏡、目鏡、物鏡物鏡、聚光器、聚光器、照明裝置、照明裝置等。等。 2.顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率 : 表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點之間最小距離的能力點之間最小距離的能力，可用公式表示為：可用公式表示為： D=/2NA=/2nsin(/2 ) 式中式中D D：物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。 NA，即即numerical aperture，是物，是物鏡的參數(shù)之一鏡的參數(shù)之一 ：入射光的波長（可見光平均入射光的波長（可見光平均0.550.55 m) m) n:n: 物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率

3、。物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率。 ：鏡口角（即入射角）。鏡口角（即入射角）。顯微鏡的性能參數(shù)：顯微鏡的性能參數(shù)： 1.放大倍數(shù)放大倍數(shù)=接物鏡放大倍數(shù)接物鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù) （二）鞭毛是細菌的運動器官（二）鞭毛是細菌的運動器官三、實驗材料三、實驗材料顯微鏡、香柏油、醇醚溶液（或二甲苯）、擦顯微鏡、香柏油、醇醚溶液（或二甲苯）、擦鏡紙、吸水紙等。鏡紙、吸水紙等。細菌三種形態(tài)的染色標本。細菌三種形態(tài)的染色標本。培養(yǎng)培養(yǎng)1218h的大腸桿菌或枯草桿菌。的大腸桿菌或枯草桿菌。蓋玻片、凹玻片、接種環(huán)、酒精燈。蓋玻片、凹玻片、接種環(huán)、酒精燈。四、實驗步驟四、實驗步驟顯微鏡（油鏡）的使用

4、：顯微鏡（油鏡）的使用： 1 1、用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。 2 2、打開光源，調(diào)節(jié)光亮度打開光源，調(diào)節(jié)光亮度 3 3、低倍鏡觀察：粗調(diào)、細調(diào)低倍鏡觀察：粗調(diào)、細調(diào) 4 4、依次再進行中倍、高倍觀察依次再進行中倍、高倍觀察 5 5、油鏡觀察：油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，提升聚光鏡，在標本中央高倍鏡下找到清晰的物象后，提升聚光鏡，在標本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細調(diào)至看清物象為止。滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細調(diào)至看清物象為止。 6 6、換片：另換新片，必須從第換片：另換新片，必須從第3 3條開始操作。條開始操作

5、。 7 7、用后復原：用后復原：觀察完畢，上旋鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然觀察完畢，上旋鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體全部復原。二甲苯，后將鏡體全部復原。( (一一) ) 結(jié)合標本片的觀察，掌握油鏡的使用方法；觀結(jié)合標本片的觀察，掌握油鏡的使用方法；觀察各類微生物染色片，邊觀察邊繪圖。察各類微生物染色片，邊觀察邊繪圖。（二）細菌運動性的觀察（1 1）涂凡士林：）涂凡士林：取取潔凈無油潔凈無油的蓋玻片的蓋玻片1 1塊，在其四周涂少量的凡士林或塊，在

6、其四周涂少量的凡士林或香柏油。香柏油。（2 2） 滴加菌液：滴加菌液：加加1 1滴生理鹽水于蓋玻片的中央，用接種環(huán)從斜面中挑滴生理鹽水于蓋玻片的中央，用接種環(huán)從斜面中挑取適量菌取適量菌點加點加到水滴中（到水滴中（注意不要涂抹注意不要涂抹）。）。（3 3） 蓋凹玻片：蓋凹玻片：將凹玻片的凹槽對準蓋玻片中央的菌液，并輕輕地蓋將凹玻片的凹槽對準蓋玻片中央的菌液，并輕輕地蓋在蓋玻片上，使兩者粘在一起，然后翻轉(zhuǎn)凹玻片，使菌液正好懸在凹在蓋玻片上，使兩者粘在一起，然后翻轉(zhuǎn)凹玻片，使菌液正好懸在凹槽的中央，再輕壓蓋玻片，使玻片四周邊緣閉合，以防菌液干燥。槽的中央，再輕壓蓋玻片，使玻片四周邊緣閉合，以防菌液干

7、燥。（4 4） 鏡檢鏡檢 先用低倍鏡菌滴的邊緣，然后將菌液移到視野中央換高倍先用低倍鏡菌滴的邊緣，然后將菌液移到視野中央換高倍鏡、油鏡進行觀察。由于菌體是透明的，鏡檢時鏡、油鏡進行觀察。由于菌體是透明的，鏡檢時可適當縮小光圈或降可適當縮小光圈或降低聚光器以增大反差，便于觀察低聚光器以增大反差，便于觀察。鏡檢時要仔細辨別是細菌的運動還。鏡檢時要仔細辨別是細菌的運動還是分子運動（即布朗運動），前者在視野下可見細菌自一處游動至他是分子運動（即布朗運動），前者在視野下可見細菌自一處游動至他處，而后者僅在原處左右擺動。細菌的運動速度依菌種不同而異，應處，而后者僅在原處左右擺動。細菌的運動速度依菌種不同而異，應仔細觀察。仔細觀察。1 1 懸滴法：懸滴法：（1 1） 滴加菌液：滴加菌液：加加1 1滴生理鹽水于載玻片的中央，滴生理鹽水于載玻片的中央，用接種環(huán)從斜面中挑取適量菌用接種環(huán)從斜面中挑取適量菌點加點加到水滴中到水滴中（注意不要涂抹注意不要涂抹）。）。（2 2） 蓋蓋玻片：蓋蓋玻片：（3 3） 鏡檢鏡檢：2 2 壓滴法：壓滴法