雙歧桿菌與乳酸菌篩選培養(yǎng)基

1、BBL 培養(yǎng)基雙歧桿菌選擇性培養(yǎng)基成份蛋白胨 15.0g酵母粉 2.0g葡萄糖 20.0g可溶性淀粉 0.5g氯化鈉 5.0g5%半胱氨酸 10.0mL西紅柿浸出液 400.0mL吐溫 80 1.0mL肝提取液 80.0mL瓊脂 20.0g蒸餾水 520.0mLpH7.0MRS培養(yǎng)基乳酸細菌培養(yǎng)基（ MRS）蛋白胨10.0 g牛肉膏10.0 g酵母膏5.0 g檸檬酸氫二銨 （NH4）2HC6H5O72.0 g葡萄糖 (C6H12O6·H2O)20.0 g吐溫 801.0 mL乙酸鈉（ CH3COONa·3H2O）5.0 g磷酸氫二鉀（ K2HPO4·3H2O）2.

2、0 g硫酸鎂（ MgSO4·7H2O）0.58 g硫酸錳（ MnSO4·H2O）0.25 g瓊脂18.0 g蒸餾水1 000 mLpH6.26.6當乳酸菌生長代謝出乳酸后，會使pH 下降而使顏色由綠變?yōu)辄S綠，也由于 pH值降低再加上抗生素及厭氧培養(yǎng)的作用， 所以一般的微生物不容易在此培養(yǎng)基上生長，因此十分容易鑒別乳酸菌。2005-03-10 08:08消息 引用收藏分享奉上一篇實驗，以供參考！厭氧菌的分離和培養(yǎng)目前培養(yǎng)厭氧微生物的簡便而又有效的技術包括有：厭氧箱培養(yǎng)技術；厭氧罐培養(yǎng)技術； 厭氧袋培養(yǎng)技術；亨蓋特厭氧滾管技術。這里介紹的是亨蓋特厭氧滾管技術。亨蓋特厭氧滾管技術

3、是美國微生物學家亨蓋特（Hungate ）于 1950 年首次提出并應用于瘤胃厭氧微生物研究的一種厭氧培養(yǎng)技術。以后這項技術又經(jīng)歷了幾十年的不斷改進，從而使亨蓋特厭氧技術日趣完善，并逐漸發(fā)展成為研究厭氧微生物的一整套完整技術。而且多年來的實踐已經(jīng)證明它是研究嚴格、專性厭氧菌的一種極為有效的技術。亨蓋特厭樣滾管培養(yǎng)技術不僅可用于有益厭氧菌如雙歧桿菌等的分離、與活菌培養(yǎng)計數(shù)，還可以用于有害* 菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭狀芽孢桿菌）的分離與鑒定。1 材料1.1樣品雙歧酸奶（液體）、雙歧桿菌制劑（固體）。1.2培養(yǎng)基改良 MRS培養(yǎng)基， PTYG培養(yǎng)基。1.3儀器和器具亨蓋特厭氧滾管裝置一套，厭

4、氧管，厭氧瓶，滾管機，定量加樣器。2 流程銅柱除氧預還原培養(yǎng)基稀釋用液制備稀釋樣品滾管培養(yǎng)計數(shù)3 方法3.1 銅柱系統(tǒng)除氧銅柱是一個內(nèi)部裝有銅絲或銅屑的硬質(zhì)玻璃管。此管的大小為40 400mm，兩段被加工成漏斗裝，外壁繞有加熱帶，并與變壓器相連來控制電壓和穩(wěn)定銅柱的溫度。銅柱兩端連接膠管，一端連接氣鋼瓶，一端連接出氣管口。 由于從氣鋼瓶出來的氣體如N2、CO2和 H2 等通常都含有O2，故當這些氣體通過溫度約360的銅柱時， 銅和氣體中的微量O2化合生成CuO，銅柱則由明亮的黃色變?yōu)楹谏．斚蜓趸癄畹你~柱通入H2時， H2 與 CuO中的氧就結合形成H2O，而 CuO又被還原成了銅，銅柱則又呈

5、現(xiàn)明亮的黃色。此銅柱可以反復使用，并不斷起到除氧的目的。當然H2 源也可以由氫氣發(fā)生器產(chǎn)生。3.2預還原培養(yǎng)基及稀釋液的制備制作預還原培養(yǎng)基及稀釋液時，先將配制好的培養(yǎng)基和稀釋液煮沸驅(qū)氧，而后用半定量加樣器趁熱分裝到螺口厭氧試管中，一般瓊脂培養(yǎng)基裝4.5-5ml ，稀釋液裝9ml，并插入通N2 氣的長針頭以排除O2。此時可以清楚地看到培養(yǎng)基內(nèi)加入的氧化還原指示劑刃天青由藍到紅最后變成無色，說明試管內(nèi)已成為無氧狀態(tài)，然后蓋上螺口的丁烯膠塞及螺蓋，滅菌備用。3.3雙歧桿菌樣品不同稀釋度的制備在無菌條件下準確稱取 1g 固體或用無菌注射器吸取1ml 混合均勻的液體樣品， 而后加入裝有預還原生理鹽水的

6、厭氧試管中，用震蕩器將其震蕩均勻，制成10-1 稀釋液。用無菌注射器吸取1ml 10-1稀釋液至另一支裝有 9ml 生理鹽水的試管中，制成 10-2稀釋液。按此操作方法依次進行10 倍系列稀釋至10-7 ，制成不同濃度的樣品稀釋液。通常選10-5 、10-6 、 10-7三個稀釋度進行滾管培養(yǎng)計數(shù)。3.4 厭氧滾管培養(yǎng)法將盛有融化的無菌無氧瓊脂培養(yǎng)基試管放置于50左右的恒溫水浴中，用1ml 無菌注射器分別吸取10-5 、10-6 、10-7 三個稀釋度的稀釋液各 0.1ml于融化了的瓊脂培養(yǎng)基試管中，而后將其平放于盛有冰塊的盤中或特制的滾管機上迅速滾動，這樣帶菌的融化培養(yǎng)基在試管內(nèi)壁立即凝固成一薄層。每個稀釋度重復3 次，而后置于 37（酸奶樣品 42）恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。一般培養(yǎng)2448 小時后，即可在厭氧管的瓊脂層內(nèi)或表面長出肉眼可見的菌落。3.5雙歧桿菌活菌（分離）計數(shù)選擇分散均勻， 數(shù)量在幾十 幾