食品中菌落總數(shù)的測定實(shí)驗

1、食品中菌落總數(shù)的測定實(shí)驗一、實(shí)驗?zāi)康模毫私庀♂屍桨逵嫈?shù)的原理，掌握涂抹平板培養(yǎng)法和混合平板培養(yǎng)法，認(rèn) 識細(xì)菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落計數(shù)法是將等測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后， 其中的微生物充分分散為 單個細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細(xì)胞生長 繁殖而形成的肉眼可見的菌落，即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個單細(xì) 胞。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。 但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個細(xì)胞，所以，長成的一個單菌 落也可能來自樣品中的多個細(xì)胞。因此平板菌落計數(shù)的結(jié)果往往偏低。為了 清楚地闡述平板菌落計數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形

2、成單位 （colony-forming units， cfu） 而不以絕對菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。該計數(shù)法的缺點(diǎn)是操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時間才能取得，而且測 定結(jié)果易受多種因素的影響， 但是這種計數(shù)方法最大的優(yōu)點(diǎn)是可以獲得活菌 的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗，以及食品、飲料和水等含菌指數(shù)或 污染度的檢測三、試劑和材料1. 儀器恒溫培養(yǎng)箱：（36 C 士 1 C, 30 C 士 1 C。）均質(zhì)器或振蕩器無菌吸管： 1 ml（ ml 刻度）、 1 0 ml（ ml 刻度）或微量移液器及吸 無菌錐形瓶：容量 250 ml 、500 ml 、無菌培養(yǎng)皿：直徑 90 mm菌落計數(shù)器2. 樣品

3、1 ）平板計數(shù)瓊脂（plate count agar , PCA培養(yǎng)基：蛋白胨g、酵 母浸膏 g 、葡萄糖 g 、瓊 脂 g 、蒸餾水 1 000 ml 、pH 。將所有成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH。分裝試管或錐形瓶，121 C 高壓滅菌 15 min 。注：用平板計數(shù)瓊脂，稱取 g 于 1 000 ml 蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解， 121 C高壓滅菌20min,冷卻至4547C左右備用。2 ）無菌生理鹽水：氯化鈉（NaCI）蒸餾水（純凈水）500ml稱取g NaCl溶于500ml蒸餾水中，121 C高壓滅菌20min。3. 器材100ml 無菌水、 9ml 無菌水、無菌平皿、天平

4、、稱樣瓶、記號筆、 酒精燈等。四、操作及實(shí)驗步驟1. 樣品的稀釋： 25 g（ml） 樣品+225 ml 稀釋液,均質(zhì)。10倍系列稀釋。每遞增稀釋一次,換用 1 次1 ml 無菌吸管或吸頭。（注意 吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面）選擇 2個3個適宜稀釋度的樣品勻液， 各取1 ml分別加入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)。吸取1 ml空白稀釋液作空白對照。每皿 中加入15 ml20 ml 平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基,并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。2. 培養(yǎng)：待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 士 1 C培養(yǎng)48 h士 2 h。水產(chǎn)品30 士 1 C培養(yǎng)72 h 士3 h。（如果有彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表 面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約 4 ml ），凝固后翻轉(zhuǎn)平板。）3. 菌落計數(shù)：記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位(colony-forming un its,CFU表示。五、計算公式：式中：N樣品中菌落數(shù)；刀C平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和;n1 第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；n2 第