植物生物技術(shù)復(fù)習(xí)題

1、園藝植物生物技術(shù)復(fù)習(xí)題類(lèi)型一、 名詞解釋?zhuān)啃☆}2分，10小題，共20分）1 轉(zhuǎn)基因技術(shù)：通過(guò)基因工程技術(shù)對(duì)生物進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移，使生物體獲得新的優(yōu)良品性，稱(chēng)之為轉(zhuǎn)基因技術(shù)。2 愈傷組織：愈傷組織是一團(tuán)不定形的疏松排列的薄壁組織。3 細(xì)胞懸浮培養(yǎng)：對(duì)于要保持良好的分散狀態(tài)的植物細(xì)胞或小的細(xì)胞聚集體，可按照一定的細(xì)胞密度，懸浮在液體中進(jìn)行培養(yǎng)，這種方法稱(chēng)為細(xì)胞懸浮培養(yǎng)。4 雙極分化：愈傷組織中隨著細(xì)胞分裂出現(xiàn)兩個(gè)或兩個(gè)以上分生中心，其中有的分化芽，有的分化根，根芽之間并無(wú)輸導(dǎo)等組織溝通，在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)靠愈傷組織提供養(yǎng)料，這種以愈傷組織隔離著的芽和根的苗，常常不能移栽成活。5 分批培養(yǎng)：是指細(xì)胞在一定容積

2、的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，目的是建立單細(xì)胞培養(yǎng)物。在培養(yǎng)過(guò)程中，除了氣體和揮發(fā)性代謝產(chǎn)物可以同外界空氣交換外，一切都是密閉的。當(dāng)培養(yǎng)基中的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)耗盡時(shí)，細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)即行停止。6 細(xì)胞的全能性：植物體細(xì)胞或性細(xì)胞，在人為控制的培養(yǎng)條件下都具有再生成新個(gè)體的潛能，因而在適宜的條件下可以被誘導(dǎo)生長(zhǎng)分化形成完整植株。7 胚性愈傷組織：愈傷組織在長(zhǎng)期的培養(yǎng)中能夠形成分生組織區(qū)、管胞和色素細(xì)胞，或者形成體細(xì)胞胚。這種能夠形成體細(xì)胞胚的愈傷組織叫做胚性愈傷組織。8 條件培養(yǎng)基：是把單個(gè)細(xì)胞置于一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織(也稱(chēng)看護(hù)愈傷組織)上培養(yǎng)，在愈傷組織和培養(yǎng)的細(xì)胞之間，用一片濾紙相隔。9 植板效率=（每

3、個(gè)平板上形成的細(xì)胞團(tuán)數(shù)/每個(gè)平板上接種的細(xì)胞總數(shù)）×100。10. 花粉培養(yǎng)：是指把花粉從花藥中分離出來(lái)，以單個(gè)花粉粒作為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。11. 基因工程：通過(guò)體外DNA重組創(chuàng)造新生物并給予特殊功能的技術(shù)稱(chēng)為基因工程，也稱(chēng)DNA重組技術(shù)。12. 脫分化：使已分化的體細(xì)胞回復(fù)到未分化的原始狀態(tài)并具有細(xì)胞全能性表達(dá)潛力的過(guò)程，叫做脫分化。13. 胚性愈傷組織：愈傷組織在長(zhǎng)期的培養(yǎng)中能夠形成分生組織區(qū)、管胞和色素細(xì)胞，或者形成體細(xì)胞胚。這種能夠形成體細(xì)胞胚的愈傷組織叫做胚性愈傷組織。14. 植物生物技術(shù)：是指對(duì)植物品質(zhì)和性狀進(jìn)行改造的生物技術(shù)，包括植物組織培養(yǎng)技術(shù)、人工種子、細(xì)胞

4、工程、基因工程等多種生物技術(shù)，主要是指植物基因工程和與之相關(guān)的植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、分子標(biāo)記育種技術(shù)等。15. 單極分化：愈傷組織中的分生中心在刺激物質(zhì)的影響下向著一極分化，形成有根無(wú)芽或者有芽無(wú)根的現(xiàn)象。16. 無(wú)性系變異：愈傷組織長(zhǎng)期繼代培養(yǎng)會(huì)引起其細(xì)胞內(nèi)的染色體發(fā)生變化，也可發(fā)生基因突變。這種體外培養(yǎng)的組織或細(xì)胞發(fā)生的遺傳改變稱(chēng)為無(wú)性系變異。17. 分子雜交：當(dāng)復(fù)性的DNA分子由不同的兩單鏈分子形成時(shí)，稱(chēng)為分子雜交。18. 連接酶：用于將兩段乃至數(shù)段DNA片段拼接起來(lái)的酶稱(chēng)為連接酶。19. 穿梭質(zhì)粒：含有兩個(gè)不同的復(fù)制子，能在兩種不同的受體細(xì)胞中復(fù)制。20. 連續(xù)培養(yǎng)：是利用特別的培養(yǎng)容

5、器進(jìn)行大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)的一種培養(yǎng)方式。連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中，不斷注入新鮮培養(yǎng)液，排掉等體積的用過(guò)的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得到不斷補(bǔ)充，由于注入的新鮮培養(yǎng)液的容積與流出的原有培養(yǎng)液相等，可調(diào)節(jié)流入與流出的速度。21. 再分化：離體培養(yǎng)的植物組織和細(xì)胞形成的處于脫分化狀態(tài)的愈傷組織，仍可以再度分化成另一種或幾種類(lèi)型的細(xì)胞、組織、器官，甚至最終再生成完整的植株。這一過(guò)程稱(chēng)為再分化。22. 單極分化：愈傷組織中的分生中心在刺激物質(zhì)的影響下向著一極分化，形成有根無(wú)芽或者有芽無(wú)根的現(xiàn)象。23. 無(wú)性系變異：愈傷組織長(zhǎng)期繼代培養(yǎng)會(huì)引起其細(xì)胞內(nèi)的染色體發(fā)生變化，也可發(fā)生基因突變。這種體外培養(yǎng)的組織或細(xì)胞發(fā)生的遺傳

6、改變稱(chēng)為無(wú)性系變異。24. 細(xì)胞工程：是指以細(xì)胞為基本單位，在體外條件下進(jìn)行培養(yǎng)、繁殖；或人為地使細(xì)胞某些生物學(xué)特性按人們的意愿發(fā)生改變，從而達(dá)到改良生物品種和創(chuàng)造新品種；或加速繁育動(dòng)、植物個(gè)體；或獲得某種有用的物質(zhì)的過(guò)程。25. 愈傷組織誘導(dǎo)：愈傷組織的形成，是已經(jīng)停止分裂活動(dòng)的組織細(xì)胞發(fā)生的一種“返老還童”現(xiàn)象，并再次呈現(xiàn)分裂功能的過(guò)程。26. 繼代培養(yǎng)：愈傷組織培養(yǎng)一段時(shí)間后必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上，以保持培養(yǎng)物的繼續(xù)正常生長(zhǎng)，更換一次培養(yǎng)基稱(chēng)一代繼代培養(yǎng)27. 無(wú)性系變異：愈傷組織長(zhǎng)期繼代培養(yǎng)會(huì)引起其細(xì)胞內(nèi)的染色體發(fā)生變化，如出現(xiàn)多倍體、非整倍體、染色體丟失、染色體斷裂或重組，致使材料變

7、為混倍組織，也可發(fā)生基因突變。這種體外培養(yǎng)的組織或細(xì)胞發(fā)生的遺傳改變稱(chēng)為無(wú)性系變異。28. 單極分化：愈傷組織中的分生中心在刺激物質(zhì)的影響下向著一極分化，形成有根無(wú)芽或者有芽無(wú)根的現(xiàn)象。29. 雙極分化：愈傷組織中隨著細(xì)胞分裂出現(xiàn)兩個(gè)或兩個(gè)以上分生中心，其中有的分化芽，有的分化根，根芽之間并無(wú)輸導(dǎo)等組織溝通，在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)靠愈傷組織提供養(yǎng)料，這種以愈傷組織隔離著的芽和根的苗，常常不能移栽成活。30. 體細(xì)胞胚：由于培養(yǎng)的植物組織細(xì)胞一般是體細(xì)胞，因而將由離體培養(yǎng)的組織細(xì)胞分化出的胚稱(chēng)體細(xì)胞胚31. 胚狀體：由于離體培養(yǎng)的植物組織細(xì)胞是在未經(jīng)過(guò)有性過(guò)程的情況下直接產(chǎn)生胚這一結(jié)構(gòu)，并且形成的胚與性細(xì)胞

8、形成的胚相似，因此也將此類(lèi)胚稱(chēng)為胚狀體二、 判斷正誤（每小題1分，10小題，共10分）1. 在植物組織細(xì)胞離體培養(yǎng)中，光照的作用并不是僅僅提供光合作用的能源。（）2. 人工種子不屬于植物生物技術(shù)。（×）3. 單倍體在植物育種中可以使后代迅速純合。（）4. 植物組織培養(yǎng)中常用的碳源是葡萄糖。（×）5. 培養(yǎng)個(gè)體的遺傳基礎(chǔ)，決定了離體培養(yǎng)的反應(yīng)能力。（）6. 第類(lèi)限制性酶能識(shí)別一段特異的DNA序列，準(zhǔn)確地酶切雙鏈DNA的特異7. 序列。（）8. 生長(zhǎng)素類(lèi)用于誘導(dǎo)細(xì)胞分裂和根的分化。（）9. 狹義的遺傳工程即是通常講的基因工程。（）10. 在愈傷組織分化培養(yǎng)中，提高生長(zhǎng)素與細(xì)胞激

9、動(dòng)素的配比，有利于芽的分化。（×）11. 人工種子不屬于植物生物技術(shù)。（×）三、 填空（每空1分，共10個(gè)空，10分）1. 植物組織培養(yǎng)至少需要三間實(shí)驗(yàn)室，分別是 準(zhǔn)備室 、 接種室 和培養(yǎng)室。2. 酶解法分離細(xì)胞是用 果膠酶 、 纖維素酶 處理，分離出具有代謝活性的細(xì)胞。3. PCR的含義是 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 。4. 植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)可分為兩大類(lèi): 載體介導(dǎo) 的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)和 直接 的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)。5. 形成愈傷組織時(shí)的變化，不僅是DNA含量增加，而且 RNA 和 蛋白質(zhì) 含量均表現(xiàn)明顯增加。6. 植物離體培養(yǎng)的關(guān)鍵是 無(wú)菌操作 。四、 簡(jiǎn)答題（每小題5分，4小題，共20分

10、）1.植物組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基主要有哪幾個(gè)組成部分？（5分） 答：無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分、碳源、激素、瓊脂、水。（1分）其中無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)包括大量元素、微量元素。（1分）有機(jī)營(yíng)養(yǎng)包括氨基酸和維生素。（1分）碳源有蔗糖、葡萄糖、果糖，以蔗糖為主。（1分）激素包括生長(zhǎng)素和細(xì)胞激動(dòng)素。（1分）2.生命科學(xué)在理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明是什么？（5分）答：理論上的三大發(fā)現(xiàn)生物的遺傳物質(zhì)是DNA （1分）DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)和半保留復(fù)制機(jī)制（1分）確定了遺傳信息的傳遞方式：遺傳信息是以密碼子方式傳遞的，三個(gè)核苷酸組成一個(gè)密碼子，編碼一個(gè)氨基酸。（1分）技術(shù)上的三大發(fā)明限制性?xún)?nèi)切酶和DNA連接酶的發(fā)

11、明（1分）基因工程載體的發(fā)明 （0.5分）逆轉(zhuǎn)錄酶的發(fā)明 （0.5分）3.原生質(zhì)體純化的兩種方法是什么？（5分）答：上浮法：是將酶解的原生質(zhì)體與蔗糖溶液(23左右)混合。（1分）下沉法：是先將原生質(zhì)體與13的甘露醇混合，（1分）然后加到23的蔗糖溶液頂部，形成一個(gè)界面。（1分）兩種方法中，均在1000g下離心5-10分鐘，會(huì)在蔗糖溶液頂部形成一條原生質(zhì)體帶。（1分）用吸管將帶輕輕地吸出來(lái)，用培養(yǎng)基懸浮離心，然后稀釋到104-l05個(gè)ml，用于培養(yǎng)。（1分）4. DNA作為遺傳物質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)是什么？（5分） 答： 信息量大，可以微縮。（1分） 表面互補(bǔ)，電荷互補(bǔ)。（1分） 雙螺旋結(jié)構(gòu)說(shuō)明了精確復(fù)制的

12、機(jī)理。（1分） 核糖的2位脫氧，在水溶液中穩(wěn)定性好。（1分） 可以突變，以求進(jìn)化。（1分）5、什么是生物技術(shù)，它包括哪些基本的內(nèi)容? 生物技術(shù)也稱(chēng)生物工程，是指人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合其他基礎(chǔ)學(xué)科的科學(xué)原理，采用先進(jìn)的工程技術(shù)手段，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)改造生物體或加工生物原料，為人類(lèi)生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達(dá)到某種目的。它包括分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、微生物學(xué)、免疫生物學(xué)、人體生理學(xué)、動(dòng)物生理學(xué)、植物生理學(xué)、微生物生理學(xué)、生物化學(xué)、生物物理學(xué)、遺傳學(xué)等幾乎所有生物科學(xué)的次級(jí)學(xué)科。6、 現(xiàn)代生物技術(shù)的“六高”特征是什么? 高效益，可帶來(lái)高額利潤(rùn)； 高智力，具有創(chuàng)造性和突破性； 高投入，前期研究及開(kāi)發(fā)需要大

13、量的資金投入； 高競(jìng)爭(zhēng)，時(shí)效性的競(jìng)爭(zhēng)非常激烈； 高風(fēng)險(xiǎn)，由于競(jìng)爭(zhēng)的激烈，必然帶來(lái)高風(fēng)險(xiǎn)； 高勢(shì)能，對(duì)國(guó)家的政治、經(jīng)濟(jì)、文化和社會(huì)發(fā)展 有很大的影響，具有很強(qiáng)的滲透性和擴(kuò) 散性，有著很高的態(tài)勢(shì)和潛在的能量。7、生物技術(shù)的種類(lèi)及其相互關(guān)系。 基因工程、細(xì)胞工程、酶工程、發(fā)酵工程、蛋白質(zhì)工程 基因工程：通過(guò)體外DNA重組創(chuàng)造新生物并給予特殊功能的技術(shù)就稱(chēng)為基因工程，也稱(chēng)DNA重組技術(shù)。 細(xì)胞工程：是指以細(xì)胞為基本單位，在體外條件下進(jìn)行培養(yǎng)、繁殖；或人為地使細(xì)胞某些生物學(xué)特性按人們的意愿發(fā)生改變，從而達(dá)到改良生物品種和創(chuàng)造新品種；或加速繁育動(dòng)、植物個(gè)體；或獲得某種有用的物質(zhì)的過(guò)程。 酶工程：是利用酶具

14、有的特異催化功能，對(duì)酶進(jìn)行修飾改造，并借助生物反應(yīng)器和工藝過(guò)程來(lái)生產(chǎn)人類(lèi)所需產(chǎn)品的一項(xiàng)技術(shù)。 發(fā)酵工程：也稱(chēng)微生物工程。利用微生物生長(zhǎng)速度快、生長(zhǎng)條件簡(jiǎn)單以及代謝過(guò)程特殊等特點(diǎn)，在合適條件下，通過(guò)現(xiàn)代化工程技術(shù)手段，由微生物的某種特定功能生產(chǎn)出人類(lèi)所需的產(chǎn)品。 蛋白質(zhì)工程：是指在基因工程的基礎(chǔ)上，結(jié)合蛋白質(zhì)結(jié)晶學(xué)、計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)和蛋白質(zhì)化學(xué)等多學(xué)科的基礎(chǔ)知識(shí)，通過(guò)對(duì)基因的人工定向改造等手段，從而達(dá)到對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行修飾、改造、拼接以產(chǎn)生能滿足人類(lèi)需要的新型蛋白質(zhì)的技術(shù)。8、什么是植物生物技術(shù)？ 植物生物技術(shù)是指對(duì)植物品質(zhì)和性狀進(jìn)行改造的生物技術(shù)，包括植物組織培養(yǎng)技術(shù)、人工種子、細(xì)胞工程、基因工程等

15、多種生物技術(shù)，主要是指植物基因工程和與之相關(guān)的植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、分子標(biāo)記育種技術(shù)等。9、植物生物技術(shù)有哪些應(yīng)用？創(chuàng)造新品種：主要運(yùn)用生物技術(shù)、核技術(shù)、光電技術(shù)和農(nóng)業(yè)常規(guī)育種技術(shù)結(jié)合，綜合不同的優(yōu)良性狀，跨越天然物種間的屏障，按人類(lèi)需要有選擇地定向創(chuàng)造新的物種和類(lèi)型，豐富生物多樣性，提高生物抗逆性，并充分利用固氮微生物和藻類(lèi)，豐富和充實(shí)作物營(yíng)養(yǎng)綜合體系內(nèi)涵?？焖俜庇夹g(shù)應(yīng)用：利用植物細(xì)胞的全能性，通過(guò)無(wú)性繁殖途徑，發(fā)展人工種子制造產(chǎn)業(yè)，實(shí)現(xiàn)試管苗的工廠化生產(chǎn)。改變食品原料性質(zhì)，開(kāi)發(fā)新型功能性食品：利用轉(zhuǎn)基因植物作為反應(yīng)器來(lái)生產(chǎn)具有一定商業(yè)價(jià)值的碳水化合物、脂類(lèi)和蛋白質(zhì)以及具有特殊化學(xué)性質(zhì)的物

16、質(zhì)，賦予生物新的性狀和功能。如開(kāi)發(fā)富含胡蘿卜素的金色大米，能生產(chǎn)降低膽固醇、高蛋白含量的食品等。10、植物組織培養(yǎng)室通常怎樣設(shè)置？各室的主要功能是什么？ 植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置 一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室必須具備下列必需的設(shè)施或條件： 清洗和儲(chǔ)存玻璃器皿、塑料器皿和其他實(shí)驗(yàn)器皿； 培養(yǎng)基的配制、滅菌和儲(chǔ)存； 植物材料的無(wú)菌操作； 可控溫度、光照、濕度的條件，以便對(duì)材料進(jìn)行體外培養(yǎng)； 培養(yǎng)物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程的顯微觀察。 功能：植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室至少需要有三間相連但相互隔開(kāi)的房間： 第一間用于玻璃器皿的清洗和儲(chǔ)存，以及培養(yǎng) 基的制備(稱(chēng)為培養(yǎng)基室或準(zhǔn)備室)， 第二間用于無(wú)菌操作(稱(chēng)為接種室)； 第

17、三間用于放置培養(yǎng)物(稱(chēng)為培養(yǎng)室)11、植物離體操作的關(guān)鍵是什么？ （1）玻璃器皿和用具的清洗 1培養(yǎng)用品的清洗 2包裝 （2）滅菌和消毒 1培養(yǎng)基滅菌 2器皿和用具滅菌 3外植體滅菌 4接種區(qū)滅菌 （3）無(wú)菌操作技術(shù) （4）植物組織培養(yǎng)無(wú)菌培養(yǎng)的一般步驟12、愈傷組織形成的三個(gè)階段及其特征是什么？ 起動(dòng)期、分裂期、形成期 起動(dòng)期：是愈傷組織形成的起點(diǎn)。外植體已分化的活細(xì)胞在外源激素的作用下，通過(guò)脫分化起動(dòng)而進(jìn)入分裂狀態(tài)，并開(kāi)始形成愈傷組織。這時(shí)在外觀上未見(jiàn)明顯變化，但實(shí)際上細(xì)胞內(nèi)一些大分子代謝動(dòng)態(tài)已發(fā)生明顯的改變，細(xì)胞正積極為下一步分裂進(jìn)行準(zhǔn)備。細(xì)胞內(nèi)合成代謝活動(dòng)加強(qiáng)，迅速進(jìn)行蛋白質(zhì)和核酸等物

18、質(zhì)的合成。形成愈傷組織時(shí)的變化，不僅是DNA，而且RNA以及蛋白質(zhì)均表現(xiàn)明顯。 分裂期：分裂期是外植體切口邊緣開(kāi)始膨大，外層細(xì)胞通過(guò)一分為二的方式進(jìn)行分裂，從而形成一團(tuán)具有分生組織狀態(tài)細(xì)胞的過(guò)程。在這個(gè)過(guò)程中，培養(yǎng)組織的細(xì)胞中RNA及其一些成分隨著細(xì)胞的不斷分裂而開(kāi)始減少，DNA含量始終保持不變。由于細(xì)胞分裂的速率大大超過(guò)了細(xì)胞的生長(zhǎng)速率，結(jié)果使每個(gè)細(xì)胞體積顯著減小，鮮重下降，但細(xì)胞的數(shù)目迅速增加。最后細(xì)胞內(nèi)這些成分的積累又和分裂達(dá)到一種協(xié)調(diào)狀態(tài)，細(xì)胞的體積不再減小，內(nèi)無(wú)大液泡，細(xì)胞核大，核仁明顯。 形成期：形成期是指外植體的細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)、分裂形成了具有無(wú)序結(jié)構(gòu)的愈傷組織時(shí)期。這個(gè)時(shí)期特征是細(xì)

19、胞大小不再發(fā)生變化，愈傷組織表層的分裂逐漸減慢和停止，接著內(nèi)部組織細(xì)胞開(kāi)始分裂，細(xì)胞數(shù)目進(jìn)一步增加。13、影響器官和胚狀體發(fā)生的主要因素有哪些？ 根據(jù)起源不同可將器官分化分為兩種發(fā)生方式，一種情況是：器官是由切下的外植體中已存在的器官原基發(fā)育而成的；另一種情況是從外植體脫分化中形成愈傷組織，再在新形成的愈傷組織或經(jīng)繼代培養(yǎng)的愈傷組織上產(chǎn)生一些分生細(xì)胞團(tuán)，隨后由這些分生細(xì)胞團(tuán)分化成不同的器官原基。14、單細(xì)胞分離的兩種方法是什么？機(jī)械法和酶解法有什么不同？機(jī)械法和酶解法機(jī)械法：先把葉片輕輕研碎，然后通過(guò)過(guò)濾和離 心凈化細(xì)胞。優(yōu) 點(diǎn)：細(xì)胞不會(huì)受到酶?jìng)Α?不需質(zhì)壁分離，有利于進(jìn)行生理、生 化研究。

20、 但是，容易傷害細(xì)胞結(jié)構(gòu)，獲得完整細(xì)胞團(tuán)或細(xì)胞數(shù)量極低，不具有普遍性。只有在薄壁組織排列疏松，胞間接觸點(diǎn)很少時(shí)，分離葉肉細(xì)胞才能取得成功。酶解法：用兩種酶：果膠酶、纖維素酶處 理，分離出具有代謝活性的細(xì)胞。作 用：降解中膠層、軟化細(xì)胞壁。所以在 用酶解法分離細(xì)胞的時(shí)候，必須對(duì) 細(xì)胞給于滲透壓保護(hù)。15、懸浮培養(yǎng)體系的必備條件是什么？ 一個(gè)成功的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系必須滿足三個(gè)基本條件： 懸浮培養(yǎng)物分散性良好，細(xì)胞團(tuán)較??； 懸浮培養(yǎng)物均一性好，細(xì)胞形狀和細(xì)胞 團(tuán)大小大致相同； 懸浮培養(yǎng)物生長(zhǎng)迅速。16、單細(xì)胞培養(yǎng)的幾種方法是什么？請(qǐng)敘述?？醋o(hù)培養(yǎng)法、平板培養(yǎng)法、微室培養(yǎng)法看護(hù)培養(yǎng)法：是把單個(gè)細(xì)胞置于

21、一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織(也稱(chēng)看護(hù)愈傷組織)上培養(yǎng)，在愈傷組織和培養(yǎng)的細(xì)胞之間，用一片濾紙隔開(kāi)。平板培養(yǎng)法：將含有游離細(xì)胞和細(xì)胞團(tuán)的懸浮培養(yǎng)物過(guò)濾，除去組織塊和大的細(xì)胞團(tuán)，保留游離細(xì)胞和小細(xì)胞團(tuán)。將液體培養(yǎng)基加入6-10g/L的瓊脂，使其融化，冷卻到35時(shí)，將培養(yǎng)基與上述細(xì)胞懸浮培養(yǎng)液等量混合，迅速使之鋪展在培養(yǎng)皿。微室培養(yǎng)法：由懸浮培養(yǎng)物中取出一滴含單細(xì)胞的培養(yǎng)液，置于一張無(wú)菌載玻片上，在培養(yǎng)基的四周與之隔一定距離涂上一圈石蠟油，然后在左右兩側(cè)各加一滴石蠟油并分別置一張蓋玻片，第三張蓋玻片架在前兩個(gè)蓋玻片之間，這樣一滴含有單細(xì)胞的培養(yǎng)液就被覆蓋于微室之中，最后把筑有微室的整張載玻片置于培養(yǎng)皿中

22、進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞團(tuán)長(zhǎng)到一定大小時(shí)，將其轉(zhuǎn)移到新鮮的液體或半固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。17、 原生質(zhì)體定義原生質(zhì)體為去掉細(xì)胞壁的裸露細(xì)胞。18、原生質(zhì)體培養(yǎng)概念意義指將植物細(xì)胞游離成原生質(zhì)體，在適宜的培養(yǎng)條件下，依據(jù)細(xì)胞的全能性使其再生細(xì)胞壁，進(jìn)行細(xì)胞的分裂分化，并發(fā)育成完整植株的過(guò)程。意義：?jiǎn)渭?xì)胞無(wú)性系的建立 遺傳轉(zhuǎn)化的良好受體 多種基礎(chǔ)研究的實(shí)驗(yàn)體系 體細(xì)胞雜種的形成19、原生質(zhì)體分離方法 外植體來(lái)源：生長(zhǎng)旺盛、生命力強(qiáng)的組織和細(xì)胞是獲得高活力原生質(zhì)體的關(guān)鍵取材：葉片可以取自：田間植株；溫室或光照培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)的植株；試管苗（好，省去滅菌）除菌：除菌要因材而異，沖洗1-3h，然后浸入70酒精消毒后，再

23、放進(jìn)3次氯酸鈉處理。最后用無(wú)菌水漂洗數(shù)次，并用無(wú)菌濾紙吸干。酶解：把滅菌的葉片或子葉等材料下表皮撕掉，將去表皮的一面朝下放入酶液中。分離：為了取得高純度的原生質(zhì)體就必需進(jìn)行原生質(zhì)體的分離。洗滌：剛分離得到的原生質(zhì)體往往還含有酶及其他不利于原生質(zhì)體培養(yǎng)、再生的試劑，應(yīng)以新的滲透壓穩(wěn)定劑或原生質(zhì)體培養(yǎng)液離心洗滌2-4次。 鑒定：只有經(jīng)過(guò)鑒定確認(rèn)已獲得原生質(zhì)體后才能進(jìn)行下階段的原生質(zhì)體培養(yǎng)或細(xì)胞融合工作20、 原生質(zhì)體融合方法及原理 化學(xué)法誘導(dǎo)融合：在無(wú)菌條件下按比例混合雙親原生質(zhì)體滴加PEG溶液，搖勻，靜置滴加高鈣高pH溶液，搖勻，靜置滴加原生質(zhì)體培養(yǎng)液洗滌數(shù)次離心獲得原生質(zhì)體細(xì)胞團(tuán)篩選、再生雜合

24、細(xì)胞。 物理法誘導(dǎo)融合：將雙親本原生質(zhì)體以適當(dāng)?shù)娜芤簯腋』旌虾?，插入微電極，接通一定的交變電場(chǎng)。原生質(zhì)體極化后順著電場(chǎng)排列成緊密接觸的珍珠串狀。此時(shí)瞬間施以適當(dāng)強(qiáng)度的電脈沖，則使原生質(zhì)體質(zhì)膜被擊穿而發(fā)生融合。21、 原生質(zhì)體融合的意義 微生物原生質(zhì)體融合技術(shù)在水質(zhì)凈化中的應(yīng)用 在微生物雨中方面顯示出了巨大潛力 單克隆體的制備 克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙、培育新品質(zhì) 22、植物體細(xì)胞雜交的概念和類(lèi)型概念：植物體細(xì)胞雜交，又稱(chēng)原生質(zhì)體融合，是指將植物不同種、屬，甚至科間的原生質(zhì)體通過(guò)人工方法誘導(dǎo)融合，然后進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其再生雜種植株的技術(shù)類(lèi)型：親本雙方的細(xì)胞和細(xì)胞質(zhì)能融洽地合為一體，發(fā)育成為完全的

25、雜合植株。這種例子不多。融合細(xì)胞由一方細(xì)胞核與另一方細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成，可能發(fā)育為核質(zhì)異源的植株。親緣關(guān)系越遠(yuǎn)的物種，某個(gè)親本的染色體被丟失的現(xiàn)象就越嚴(yán)重。融合細(xì)胞由雙方胞質(zhì)及一方核或再附加少量它方染色體或DNA'片段構(gòu)成。原生質(zhì)體融合后兩個(gè)細(xì)胞核尚未融合時(shí)就過(guò)早地被新出現(xiàn)的細(xì)胞壁分開(kāi)。以后它們各自分裂生長(zhǎng)成嵌合植株。23、體細(xì)胞雜種鑒定方法 雜合細(xì)胞的顯微鏡鑒別 若一方細(xì)胞大，另一方細(xì)胞小，則大、小細(xì)胞融合的就是雜合細(xì)胞；若一方細(xì)胞基本無(wú)色，另一方為綠色，則白綠色結(jié)合的細(xì)胞是雜合細(xì)胞；如果雙方原生質(zhì)體在特殊顯微鏡下或雙方經(jīng)不同染料著色后可見(jiàn)不同的特征，則可作為識(shí)別雜合細(xì)胞的標(biāo)志。24、 體細(xì)

26、胞雜種應(yīng)用25、植物原生質(zhì)體培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)流程1.原生質(zhì)體的分離和純化分離：取材、除菌、酶解、分離、洗滌、鑒定、純化：上浮法、下沉法原生質(zhì)體活力測(cè)定2. 原生質(zhì)體培養(yǎng)及植株再生3. 植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合26、 了解花粉和花藥培養(yǎng)的意義 花粉培養(yǎng)是指把花粉從花藥中分離出來(lái)，以單個(gè)花粉粒作為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。比花藥培養(yǎng)有一定優(yōu)勢(shì)：花藥培養(yǎng)有時(shí)會(huì)由于花藥中的有害物質(zhì)而不能誘導(dǎo)小孢子啟動(dòng)第一次分裂，小孢子培養(yǎng)則不存在這一問(wèn)題；花粉已是單倍體細(xì)胞，誘發(fā)后經(jīng)愈傷組織或胚狀體發(fā)育成的小植株都是單倍體植株或雙單倍體，不含有因藥壁、花絲、藥隔等體細(xì)胞組織的干擾而形成的體細(xì)胞植株；由于起始材料是小孢子，獲得的

27、材料總是純合的，不管它是二倍體還是三倍體；小孢子培養(yǎng)可觀察到由單個(gè)細(xì)胞開(kāi)始雄核發(fā)育的全過(guò)程，是一個(gè)很好的遺傳與發(fā)育研究的材料體系；由于花粉能均勻地接觸化學(xué)的和物理的誘變因素，花粉是研究吸收、轉(zhuǎn)化和誘變的理想材料。27、 掌握花粉分離常用的三種方法1）自然釋放法：有些物種的花蕾消毒后，在無(wú)菌條件下取出花藥，放在液體或固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，花藥會(huì)自然開(kāi)裂，將花粉散落在培養(yǎng)基上，然后將花藥壁去除，進(jìn)行花粉培養(yǎng)。2） 研磨過(guò)濾收集法：這種方法只在茄科（Solanaceae）和油菜里有成功地應(yīng)用。將花蕾消毒后，放入含培養(yǎng)基或分離液的無(wú)菌研磨器中研磨，使花粉(小孢子)釋放出來(lái)，然后通過(guò)一定孔徑的網(wǎng)篩過(guò)濾，離心

28、收集花粉并用培養(yǎng)基或分離液洗滌，然后用培養(yǎng)基將花粉調(diào)整到理想的培養(yǎng)密度，移入培養(yǎng)皿培養(yǎng)。3） 剖裂釋放法：這一技術(shù)需要借助一定工具剖裂藥壁，使花粉釋放出來(lái)，而不是自然釋放。顯然，這種方法比自然釋放法費(fèi)時(shí)。28、 花粉培養(yǎng)常用的幾種方法1 液體淺層培養(yǎng)：這一方法類(lèi)似于原生質(zhì)體培養(yǎng)，分離的小孢子經(jīng)洗滌純化后，調(diào)整到需要的濃度，根據(jù)培養(yǎng)皿的大小，適量到入培養(yǎng)皿培養(yǎng)。待愈傷組織或胚狀體形成后轉(zhuǎn)移到分化或胚發(fā)育的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。2 平板培養(yǎng)法：分離的花粉在平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，也可誘導(dǎo)產(chǎn)生胚狀體，進(jìn)而分化成小植株。3 看護(hù)培養(yǎng)法：花藥放在固體培養(yǎng)基上，將濾紙片放置在完整花藥上面，花粉放置在濾紙片上。對(duì)照是把花

29、粉粒直接放在固體培養(yǎng)基表面上，其他操作完全相同。4 微室懸滴培養(yǎng)法：把F1花序取下，表面消毒后用塑料薄膜包好，靜置一夜，待花藥裂開(kāi)、花粉散出，制成每滴含有50-80粒的花粉懸浮培養(yǎng)基，然后進(jìn)行懸滴培養(yǎng)，培養(yǎng)方法類(lèi)似于原生質(zhì)體培養(yǎng)。5 條件培養(yǎng)法：在合成培養(yǎng)基中加入失活的花藥提取物，然后接入花粉進(jìn)行培養(yǎng)。29、影響花粉和花藥培養(yǎng)的因素1 供體植株的生長(zhǎng)條件：供體植株的生長(zhǎng)條件對(duì)培養(yǎng)效果有重要影響，有時(shí)只有在控溫、一定光周期和光強(qiáng)的環(huán)境條件下，花藥才有反應(yīng)。2 供體植株的年齡：有些物種供體植株的年齡影響小孢子胚胎發(fā)生，多數(shù)情況下幼年植株優(yōu)于老年植株3 花粉發(fā)育時(shí)期：用于培養(yǎng)的花蕾，其花藥內(nèi)小孢子發(fā)

30、育時(shí)期對(duì)培養(yǎng)效果有較大影響，但因物種而異。4 花蕾和花藥的預(yù)處理：對(duì)于有些物種，培養(yǎng)前對(duì)花藥和花蕾進(jìn)行預(yù)處理，能顯著提高培養(yǎng)效果。5 供體植株的基因型：供體植株的基因型是影響花藥培養(yǎng)和花粉培養(yǎng)的關(guān)鍵因素，不同基因型的植株對(duì)培養(yǎng)的反應(yīng)不同，表現(xiàn)為是否可誘導(dǎo)胚狀體的生成、生成胚狀體的多少、以及由胚再生成植株的能力大小。6 培養(yǎng)基：究竟使用固體還是液體培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)材料的要求確定。7 培養(yǎng)條件：多數(shù)植物在25下培養(yǎng)能誘導(dǎo)愈傷組織8 活性碳的作用：培養(yǎng)基中加入活性碳可以使煙草雄核發(fā)育的花藥數(shù)由15增加到45。30、 掌握熱處理脫毒的原理、方法、無(wú)病毒植物的鑒定和利用； 熱處理脫毒原理：當(dāng)植物組織處于

31、高于正常溫度的環(huán)境（35-40）時(shí)，組織內(nèi)部的病毒部分或全部鈍化，但寄主植物的組織很少或不會(huì)受到傷害。 方法：高溫短時(shí)處理法：是利用病毒與植物耐熱能力的不同，將苗木、接穗或種子等繁殖材料在一定的高溫下處理一段時(shí)間，將其體內(nèi)的病毒殺死或鈍化，使其失去侵染能力，而保持其本身的生活力，從而達(dá)到脫毒的目的。 低熱長(zhǎng)時(shí)處理法：低熱長(zhǎng)時(shí)處理一般不能使整株植物脫毒，而只能使個(gè)別器官脫毒，大多是使在熱處理過(guò)程中長(zhǎng)出的莖尖無(wú)病毒。 鑒定： 利用：31、 掌握微莖尖脫毒的原理、無(wú)毒苗培養(yǎng)的重要意義； 原理：(1) 植物莖尖分生組織中胞間連絲發(fā)育不完全或太細(xì)，使病毒在細(xì)胞之間的擴(kuò)散作用受到抑制。(2)莖尖不含維管束

32、，病毒只能通過(guò)胞間連絲運(yùn)輸。 (3)病毒復(fù)制、運(yùn)輸速度與莖尖細(xì)胞生長(zhǎng)速度不同， 病毒向上運(yùn)輸速度慢，而分生組織細(xì)胞繁殖快，結(jié)果使莖尖區(qū)域部分的細(xì)胞沒(méi)有病毒。(4)植物生長(zhǎng)點(diǎn)細(xì)胞中缺少病毒增殖的感受點(diǎn)，因而復(fù)制過(guò)程不能進(jìn)行。(5)莖尖等分生組織中存在抑制、鈍化病毒的物質(zhì)。 無(wú)毒苗培養(yǎng)的重要意義：32、 脫毒苗的鑒定 指示植物法： 利用病毒在其他植物上產(chǎn)生枯斑作為鑒別病毒種類(lèi)的方法。 專(zhuān)門(mén)用以產(chǎn)生局部病斑的寄主植物即為指示植物，又稱(chēng)寄主植物。它只能鑒定靠汁液傳染的病毒。 應(yīng)根據(jù)不同的病毒選擇適合的指示植物。并且一年四季都可栽培。 抗血清鑒定法： 植物病毒作為抗原，給動(dòng)物注射后會(huì)在血清之中產(chǎn)生抗體稱(chēng)抗血清。不同的病毒產(chǎn)生的抗血清有各自的特異性。用已知抗血清可以鑒定未知病毒的種類(lèi),是目前最有用的方法之一。 電子顯微鏡檢查法 酶聯(lián)免疫鑒定法：采用酶標(biāo)記抗原或抗體的定量測(cè)定法。五、論述題（每題10分，4小題，共40分，）1.莖尖培養(yǎng)脫毒的原理是什么？培養(yǎng)無(wú)毒苗有何意義？ （10分）答：植物莖尖分生組織中胞間連絲發(fā)