試驗三細菌生理生化鑒定-LOPAT試驗

1、菌落圓形，污白色，全緣，微凹，光滑實驗三細菌生理生化鑒定-LOPAT試驗一、實驗目的：1 了解細菌生理生化反應原理，掌握細菌鑒定lopat實驗方法二、實驗材料：彳彌猴桃潰瘍病病原菌（分類地位薄壁菌門Gracilicutes , Proteobacterial岡假單胞 菌科Pseudomonadacea鍛單胞桿菌屬 Pseudomonas SPA培養(yǎng)基:蔗糖20g，蛋白 陳5g，磷酸氫二鉀0.5g，硫酸鎂0.25g瓊脂15g，蒸儲水1000ml對照SPA培養(yǎng)基:葡萄糖20g，蛋白陳5g，磷酸氫二鉀0.5g，硫酸鎂0.25g ,瓊 脂15g，蒸儲水1000mlThornley培養(yǎng)基配方：蛋白陳1g

2、，精氨酸10g，氯化鈉5g，磷酸氫二鉀0.3g ,酚 紅0.01g ,瓊脂6g，蒸儲水1000ml1%二甲基對苯二胺鹽酸鹽，3 108 /ml的菌液（病原菌，煙草,馬鈴薯；滅菌培養(yǎng)皿及培養(yǎng)基（平板110套、未滅菌培養(yǎng)皿110套,接種針15個，試管110 支，接種針55把，濾紙55張,試劑瓶55個，膠頭滴管55支，噴壺55個三、試驗方法：果聚糖試驗（Levan formation :用細菌懸浮液，在SPA培養(yǎng)基上，再用葡萄糖代替蔗糖培養(yǎng)基平板上分別劃線。 在25c條件下培養(yǎng)3- 7 d,形成白色、粘稠、圓頂、隆起而有閃光的菌落為陽性反 應。在此條件下，在SPA培養(yǎng)基上可形成前述菌落，果聚糖試驗為

3、陽性；而在用葡 萄糖代替蔗糖培養(yǎng)基上，不形成前述菌落。氧化酶試驗（oxidase reaction :在培養(yǎng)皿內放一張濾紙，濾紙上加3-4滴1%二甲基對苯二胺鹽酸鹽，使其濕 潤。用玻棒挑 取生長24 h的菌苔涂在濾紙上 若菌苔在10 s內變成紫色，為陽性反 應;在60 s以后變色 或一直不變色，為陰性反應。在此條件下，菌苔的氧化酶試驗為陰性反應氧化酶（細胞色素氧化酶是細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最終呼吸酶馬鈴薯軟腐試驗 （potato erroring capacity :在馬鈴薯上彳刺傷傷口，將細菌接到傷口上，幾天后觀察，是否出現(xiàn)軟腐。精氨酸雙水解酶檢驗（argine reaction :配制Tho

4、rnley培養(yǎng)基。每試管裝3- 4 ml培養(yǎng)基滅菌，冷卻，針刺接種細菌至培 養(yǎng)基底部，立即用凡士林封管，在27c條件下培養(yǎng)7 do在此條件下，精氨酸雙水解酶為陰性，顏色不變。細菌的精氨酸雙水解作用是將精氨酸經過兩步水解，生成有機胺和無機氨。鑒定細菌的精氨 酸試驗，無論發(fā)酵菌還是非發(fā)酵菌，革蘭陽性菌還是革蘭陰性菌，測的 都是精氨酸雙水解酶，使用脫竣酶試驗培養(yǎng)基。所以，賴氨酸脫竣酶，鳥氨酸脫竣酶和精氨酸雙水解酶用同一種基 礎培養(yǎng)基，為Moeller配方或Falkow配方，均須加蓋石 蠟油。對于發(fā)酵菌，細菌生長后，培養(yǎng)基變黃為陰性，變紫為陽性；對非發(fā)酵菌，培養(yǎng)基 顏色不變?yōu)殛幮?，變黃為陽性。另有一 種精氨酸雙水解酶專用培養(yǎng)基，其中使用的是 酚紅指示劑。這種配方目前已不使用。 細菌生化反應表中的精氨酸雙水解酶的陽 性百分率也不是在這種培養(yǎng)基上做的，所以,該配方實際已淘汰。煙草過敏性反應（tobacoo hypersensitivity :將在26c條件下，培養(yǎng)72 d的菌株，用無菌水配成3 X0