高效液相色譜法測定苯甲酸的不確定度分析報(bào)告

1、食品（金標(biāo)特級(jí)生抽）中苯甲酸含量測量不確定度評(píng)定報(bào)告報(bào)告編號(hào)：NT-BQ-2010-02編制：日期：年 月日批準(zhǔn)：日期：年 月日濟(jì)寧耐特食品有限公司品管部實(shí)驗(yàn)室食品（金標(biāo)特級(jí)生抽）中苯甲酸含量測定測量不確定度評(píng)定報(bào)告一、概述1 樣品編號(hào)：100771 ;環(huán)境條件：溫度20C ;相對(duì)濕度40%2. 檢測儀器設(shè)備：2.1高效液相色譜儀 Waters e2695設(shè)備編號(hào)SB-05-082,定量重復(fù)性0.7%;2.2分析天平XS105,設(shè)備編號(hào)SB-05-087,精細(xì)量程041g,最小分度值0.00001g, 050g 示值誤差為±）.00001g；2.3 A級(jí)刻度吸管，1mL，允差為

2、77;0.007mL;2.4 A級(jí)容量瓶，100 mL，允差為±0.1mL;2.5 A級(jí)容量瓶，50mL ,允差為±）.05mL3. 檢測試劑：3.1苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品：購自中國藥品生物制品檢定所；3.2乙酸銨（分析純）、色譜級(jí)甲醇、超純水。4. 檢測依據(jù)：GB/T5009.29-2003食品中山梨酸、苯甲酸的測定5. 檢測人員：相麗新6. 檢測時(shí)間：2010年12月02日二、檢測原理依據(jù)GB/T5009.29-2003,樣品經(jīng)前處理后，進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根據(jù)保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性和定量。三、測量步驟3.1苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制標(biāo)準(zhǔn)貯備液將苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品從冰箱中

3、取出放置到室溫，準(zhǔn)確稱取50.0mg,置于100mL容量瓶中，用色譜甲醇溶解并定容，搖勻，冷藏于冰箱，作為標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液將苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液從冰箱中取出放置至室溫，準(zhǔn)確吸取1.00mL,至50mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液定容，混勻后備用。3.2樣品前處理移取1mL金標(biāo)特級(jí)生抽醬油于去皮燒杯中準(zhǔn)確稱量，先后加入超純水，2%氫氧化鈉 溶液、10%硫酸銅溶液5mL,絮凝沉淀去除蛋白等雜質(zhì)后，用超純水定容至 50mL，搖勻, 取適量樣品于10000r/min的條件下高速離心3min，上清液經(jīng)0.45um濾膜過濾后，作為待 檢測樣品，同時(shí)做空白對(duì)照。3.3試樣測定按Waters高效液相

4、色譜操作規(guī)程規(guī)定的程序開機(jī)平衡系統(tǒng)，待基線穩(wěn)定后，取制備好的待測樣品液進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，用面積百分比法計(jì)算檢測結(jié)果。4數(shù)學(xué)模型試樣中苯甲酸含量計(jì)算公式如下：、一 AxCsxVX1 =mx As 匯 1000式中：Xl-樣品中苯甲酸含量，單位為克每千克（g/kg）；A-樣品液中苯甲酸峰面積；A s-標(biāo)準(zhǔn)使用液中苯甲酸峰面積；Cs-標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度，單位微克每毫升（卩g/nL）V-樣品最終定容體積，單位為毫升（mL）m-樣品質(zhì)量，單位為克（g）5測量不定度來源5.1稱取樣品質(zhì)量產(chǎn)生的不確定度Um ；5.2試樣前處理定容時(shí)引起的不確定度Uv；5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制引起的不確定度 ucs；容量瓶定容引起

5、的不確定度分度吸管移液引起的不確定度5.4平行試驗(yàn)重復(fù)性產(chǎn)生的不確定度 U0 ；5.5測量時(shí)由Waters高效液相色譜儀產(chǎn)生的不確定度U1 ；6不確定度傳播律采用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成公式計(jì)算：NUyi2（y）二' Uyi2（Xi）=17測量結(jié)果及標(biāo)準(zhǔn)差對(duì)配制好的10ug/mL的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了六次重復(fù)測量，其測量結(jié)果及標(biāo)準(zhǔn)偏差如表 7-1：表7-1苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品峰面積六次重復(fù)測量結(jié)果序號(hào)樣品濃度(ug/mL)保留時(shí)間(min)峰面積(伏.秒)1103.94724385223.94126884133.93527060443.93826875653.93527067563.93426833

6、0平均值3.938265176標(biāo)準(zhǔn)偏差0.00510493.91在重復(fù)性條件下，對(duì)金標(biāo)特級(jí)生抽樣品進(jìn)行八次測量，八次測量數(shù)據(jù)如表7-2:表7-2八次平行測量結(jié)果序號(hào)樣品質(zhì)量(g)定容體積(mL)樣品峰面積(伏.秒)標(biāo)準(zhǔn)品峰面 積(伏秒)標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ug/mL)計(jì)算結(jié)果(g/kg)11.1917250.0031667026517610.00.50121.1957950.0032364426517610.00.51031.1932750.0032276626517610.00.51041.1917050.0031855526517610.00.50451.1917250.0032477826517

7、610.00.51461.1957350.0032131226517610.00.50771.1934250.0032364426517610.00.51181.1953250.0032548326517610.00.513平均值0.51標(biāo)準(zhǔn)偏差0.0048不確定度分量的量化8.1稱取樣品質(zhì)量產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Umr用十萬分之一天平稱量樣品，校準(zhǔn)證書給出天平的重復(fù)性誤差為 0.0000 g,在50g量程范圍內(nèi)，天平的示值誤差為±).00001g,兩次稱量獲得結(jié)果，按均勻分布(矩形分布)考慮,Um=0.00001-6=5.7 X0 g5.710-7Umr=1.2 X0508.2樣品

8、定容引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度 Uvr體積的標(biāo)準(zhǔn)測量不確定度分量主要有三部分構(gòu)成；其一，容器體積的不確定度；其二，充滿液體至容器刻度的估讀誤差；其三是容器和溶液溫度與校正溫度不同引起的不確定 度。本次試驗(yàn)樣品定量總體積為50mL,采用50mLA級(jí)容量瓶定容，允許差為±).05mL,按 照均勻分布換算成標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05/-、3 =0.029 ml;液體充滿至容量瓶刻度的不確定度估讀 誤差為0.005X 50=0.25mL,按照均勻分布計(jì)算0.25人3 =0.14mL;容量瓶和溶液溫度與校正 時(shí)的溫度不同引起的體積不確定度，本次試驗(yàn)中的環(huán)境溫度與校準(zhǔn)時(shí)基本相同，此因素引 起的不確定度可忽略

9、不計(jì)。以上兩項(xiàng)合成得出：Uv= J0.0292 +0.142 =0.14mL0.14Uvr=0.0028508.3標(biāo)準(zhǔn)使用液Cs的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量UCsr10ug/mL苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液是由標(biāo)準(zhǔn)品稱量制得標(biāo)準(zhǔn)貯備液后經(jīng)過一步稀釋50倍得到的。不確定度來源包括由稱量引起的不確定度，定容 100mL引起的不確定度，1mL移 液管移液引起的不確定度，定容 50mL引起的不確定度。由稱量標(biāo)品引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度 U1mr由稱量標(biāo)品引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算方法同6.1，則 U1mr= Umr=1.2 X0由定容引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度 U1vr此相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量主要有三部分構(gòu)成；其一，容器體積的

10、不確定度；其二，充 滿液體至容器刻度的估讀誤差；其三是容器和溶液溫度與校正溫度不同引起的不確定度。本次試驗(yàn)標(biāo)品定量總體積為100mL，采用100mLA級(jí)容量瓶定容，允許差為 ±).1mL, 按照均勻分布換算成標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.1/-、3 =0.058 m1 ;液體充滿至容量瓶刻度的不確定度估 讀誤差為0.005X 100=0.5,按照均勻分布計(jì)算0.5/.3=0.29mL;容量瓶和溶液溫度與校正 時(shí)的溫度不同引起的體積不確定度，本次試驗(yàn)中的環(huán)境溫度與校準(zhǔn)時(shí)相同，此因素引起的 不確定度可忽略不計(jì)。以上兩項(xiàng)合成得出：U1v=0.30mL0.30u 1vr=0.003由定容引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確

11、定度U2vr此相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的計(jì)算同6.2,則U2v= Uv=0.14mL0.14 門 ccccU2vr=0.002850分度吸管相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u3vr的分析用1m1有分度吸管量取溶液，其不確定度主要包括三個(gè)部分：第一，吸管體積的不確 定度，給定容器容量允差為±).007mL ；按照均勻分布換算成標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.007八3=0.004mL;第二，充滿液體至吸管刻度的估讀誤差，估計(jì)為±.005X V1，轉(zhuǎn)化成標(biāo)準(zhǔn)偏差，按均勻分布計(jì)算為0.005 X V1/ .3=0.005 3=0.003mL;第三，分度吸管和溶液溫度與校正時(shí)的溫度不同引起的體積膨脹不確定度，本次試驗(yàn)中的

12、環(huán)境溫度與校準(zhǔn)時(shí)相 同，此因素引起的不確定度可忽略不計(jì)以上兩項(xiàng)合成得出：U3v=0.005mLU3vr=0.005將以上4項(xiàng)不確定度分量代入公式，得到列表如下：標(biāo)淮溶液配制引起的標(biāo)準(zhǔn)不確定度項(xiàng)目描述量值標(biāo)準(zhǔn)不確定度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度U1mr標(biāo)準(zhǔn)品稱量質(zhì)量50g5.7 X0-6-71.2 X0U 1vr100mL容量瓶體積100mL0.30mL0.003U2vr50mL容量瓶體積50mL0.14mL0.0028U3vr1mL分度吸管體積1mL0.005mL0.005相對(duì)合成Ucsr0.0064合成u(Cs)0.064ug/mL8.4平行試驗(yàn)重復(fù)性引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度U0r的計(jì)算由表7-2可知，金

13、標(biāo)特級(jí)生抽樣品中，樣品八次重復(fù)測量的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.004g/kg，樣品苯甲酸含量測量平均值為0.51 g/kg，則其測量標(biāo)準(zhǔn)不確定度為U0= 0004 =0.0014 g/kg，0 0014相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為U0r1= 0=0.0028。0.51&5由Waters高效液相色譜儀產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度uir由校準(zhǔn)證書上可知，Waters高效液相色譜儀的定量重復(fù)性為 0.7%，則其相對(duì)擴(kuò)展不確定度為0.7%,按均勻分布計(jì)算，則液相色譜儀的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為 uir=0.7%/、. 3 =0.0040。9相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量一覽表相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度不確定度來源相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確 定度量值Umr樣品稱量1.2 >10-7Uvr樣品定容0.0028UCsr標(biāo)準(zhǔn)溶液配制0.0064U0r平行實(shí)驗(yàn)測量重復(fù)性0.0028U1r液相色譜儀0.0040相對(duì)合成Ur0.0085N由U（y）=為UreiS）可得:i 土U r = Umr ' Uvr ' Ucsr ' U°r ' Uir=（1.2 10）2 0.00282 0.00642 0.00282 0.00402=0.008510合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度由上計(jì)算可知，金標(biāo)特級(jí)生抽樣品的苯甲酸