阿奇霉素片方法驗證

1、一. 概述1有關(guān)物質(zhì)1.1 照高效液相色譜法（通則0512）測定1.2 色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相 A為磷酸鹽 緩沖液（取0.05mol/L磷酸氫二鉀溶液，用20%勺磷酸溶液調(diào)節(jié)pH 值至8.2）-乙睛（45： 55）,流動相B為甲醇，柱溫為30c （必要時 適當(dāng)調(diào)整）；按下表進(jìn)行線性梯度洗脫；流速為每分鐘 1.0ml,檢測 波長為210nm取雜質(zhì)S和雜質(zhì)A對照品各適量，加上述稀釋液溶解并稀釋制成 每1ml中各約含0.05mg的溶液，作為雜質(zhì)S和雜質(zhì)A對照品溶液； 另取阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品（含雜質(zhì)R雜質(zhì)Q雜質(zhì)J、雜質(zhì)I、 雜質(zhì)H阿奇霉素和雜質(zhì)B）適量，加上述對照品溶液溶解

2、并稀釋制 成每1ml中約含10mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液；精密量取對照 溶液10ml,置50ml量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，搖勻，作為靈敏 度溶液，取系統(tǒng)適用性溶液和靈敏度溶液各 50口,分別注入液相色 譜儀，靈敏度溶液主成分峰峰高的信噪比應(yīng)大于10,系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中各峰之間的分離度均應(yīng)大于 1.2,阿奇霉素峰的保留時間 應(yīng)在30 40分鐘之間。時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）0752535955649556575257175251.3測定法取本品細(xì)粉適量，加稀釋液磷酸二氫鏤溶液（稱取磷酸二氫鏤 1.73g,加水溶解并稀釋至1000ml,用氨試液調(diào)節(jié)pH值至10.0 

3、7;0.05） -甲醇-乙睛（7: 7: 6）使阿奇霉素溶解并稀釋制成每1ml中含阿奇 霉素10mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取1 ml, 置200 ml量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。 精密量取供試品溶液和對照溶液各 50區(qū)l ,分別注入液相色譜圖儀， 記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰， 雜質(zhì)B峰面積不得大 于對照溶液主峰面積的4倍（2.0%）,雜質(zhì)H與雜質(zhì)Q按校正后的峰 面積計算（分別乘以校正因子 0.1、0.4）不得大于對照溶液主峰面積的2倍（1.0%）,其他單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積 的2倍（1.0%）,各雜質(zhì)峰面積的和按校正后的峰

4、面積計算不得大于 對照溶液主峰面積的8倍（4.0%）。2溶出度2.1 照溶出度與釋放度測定法（通則 0931第二法）測定。2.2 取本品，以磷酸鹽緩沖液（pH6.0） （0.1mol/L 磷酸氫二鈉溶液 6000m1,加鹽酸約40ml,調(diào)節(jié)PH®至6.0 ± 0.05）900ml為溶出介質(zhì)， 轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)45分鐘時，取溶液適量，濾過， 精密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質(zhì)定量稀釋制成每1ml中約含阿奇霉 素0.2mg的溶液，作為供試品溶液；另取阿奇霉素對照品適量，精密 稱定，加適量乙醇（每2mg約加乙醇1ml）使溶解，用溶出介質(zhì)定量 稀釋制成每1ml中約含0

5、.2mg的溶液，作為對照品溶液。照含量測定 項下的方法測定，按外標(biāo)法以峰面積計算每片的溶出量。 限度為標(biāo)示 量的75%,應(yīng)符合規(guī)定。3含量3.1 照高效液相色譜法（通則0512）測定。3.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（取0.05mol/L磷酸氫二鉀溶液，用20%勺磷酸 溶液調(diào)節(jié)pH值至8.2）-乙睛（45： 55）為流動相；檢測波長為210nm 取阿奇霉素系統(tǒng)適用性試驗對照品適量，加乙睛溶解并稀釋制成每 1ml中含10mg的溶液，取50/注入液相色譜儀，記錄的色譜圖應(yīng) 與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致。3.3 測定法 取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約

6、相當(dāng)于阿奇霉素0.1g）,加乙睛溶解并定量稀釋制成每1ml中約含阿 奇霉素1mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，精密量取 50 “注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿奇霉素對照品適量，同法 測定。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。4.工藝處方組成規(guī)格：0.25g物料名稱基準(zhǔn)處方1000片阿奇霉素250g糊精20g低取代羥丙纖維素25g微晶纖維素69.5g竣甲淀粉鈉20g硬脂酸鎂8g聚維酮K308g合計（干物質(zhì)）400.5g5、儀器基本情況:設(shè)備名稱XXXXX設(shè)備編號XXXXX型 號XXXXX出廠編號XXXXX出廠日期XXXX安裝位置XXXXXX生產(chǎn)廠家XXXX供貨廠家XXXXXX6.相關(guān)術(shù)語：6

7、.1 準(zhǔn)確度系指采用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度。一般用回收率（%表示?；厥章氏薅葢?yīng)在98%- 102炕間。6.2 精密度系指在規(guī)定的條件下同一份均勻的供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo) 準(zhǔn)偏差表示。6.3 線性系指在設(shè)計的測定范圍內(nèi)，測定結(jié)果與試樣中被測物的濃度 直接呈比例關(guān)系的程度。6.4 范圍系指分析方法能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時的高低限濃度或量的區(qū)間。6.5 檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。6.6 耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受 程度。二.驗證目的通過驗證以確認(rèn)所采用的方法適合于阿

8、奇霉素片的測定。 根據(jù) 樣品特性制訂檢驗方法和檢驗條件，按制定的方法進(jìn)行試驗，根據(jù) 驗證結(jié)果判斷是否符合驗證標(biāo)準(zhǔn)。若符合，按驗證的方法和條件進(jìn)行阿奇霉素片檢查；若不符合，重新建立制訂檢驗方法和檢驗條件，再進(jìn)行驗證，直至驗證結(jié)果符合設(shè)立的驗證標(biāo)準(zhǔn)。三.驗證依據(jù)中國藥典2015年版二部中國藥典2015年版四部9101藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則四.參考文件1、驗證管理規(guī)程2、驗證總計劃3、SIL-20A高效液相色譜儀操作維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程5、變更控制規(guī)程6、偏差控制規(guī)程5 .驗證職責(zé)6 .驗證步驟1 .阿奇霉素片含量分析方法驗證1.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗1.1.1 色譜條件固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠色

9、譜柱（C8）； 檢測器：紫外檢測器，檢測波長 210nm 流動相：磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L磷酸氫二鉀溶液，用20% 磷酸溶液調(diào)節(jié)PH值至8.2）-乙睛=（45: 55）流速：1.0mL/min。柱溫：30c進(jìn)樣量：50 w L。照高效液相色譜法（通則0512）測定。1.1.2 系統(tǒng)適用性試驗溶液：取阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品約20mg加乙睛2ml溶解，制成每1ml中含10mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性試 驗溶液。1.1.3 取系統(tǒng)適用性試驗溶液50 pL注入液相色譜儀。1.1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)：記錄的色譜圖應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致。1.2 阿奇霉素片含量分析方法線性驗證1.2.1 溶液配制1.2.2 流

10、動相配制以磷酸鹽緩沖液（取0.05mol/L 磷酸氫二鉀溶液，用20%的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至8.2 ）-乙睛（45 ： 55）為流動相1.2.3 處方量輔料配制精密稱定糊精約200mg低取代羥丙纖維素約250mg微晶纖維 素約695mg竣甲淀粉鈉200mg硬脂酸鎂80mg聚名t酮K30 80mg 混合。 此混合輔料約為10 片阿奇霉素片（ 2.5g） 所需的輔料共約1505mg。1.2.4 樣品溶液配制精密稱取阿奇霉素對照品約8mg 、 9mg 、 10mg 、 11mg,12 mg，置 10ml 量瓶中，乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。 按 80%、 90%、 100%、 110

11、%、 120%的倍數(shù)稀釋，加乙腈配置成濃度為0.8mg /ml 、 0.9mg /ml 、 1mg/ml、 1.1mg /ml 、 1.2mg /ml的溶液。1.2.5 測定精密量取經(jīng)微孔濾膜過濾后各不同濃度稀釋液50屋，注入液相色譜儀，每個樣品進(jìn)樣2 次，記錄色譜圖。1.2.6 判定標(biāo)準(zhǔn)：阿奇霉素在0.8 mg /ml 至 1.2mg /ml 的濃度范圍內(nèi)，阿奇霉素峰面積成線性且相關(guān)系數(shù)RA 99.8%。1.3 阿奇霉素片含量分析方法精密度驗證1.3.1 流動相配制見阿奇霉素片含量分析方法線性驗證項下。1.3.2 樣品溶液配制取阿奇霉素片（XXXXfe產(chǎn)）10片，研細(xì)，精密稱取樣品適量（約

12、相當(dāng)于阿奇霉素0.1g ）置100ml量瓶中，加乙睛溶解并定量稀釋制 成每1ml中約含阿奇霉素1mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶 液； 1.3.3 測定精密量取50屋注入液相色譜儀，記錄色譜圖，連續(xù)6次，得到拉 呋替丁峰面積。1.3.4 判定標(biāo)準(zhǔn)：峰面積的 SeiW2.0%。1.4 阿奇霉素片含量分析方法準(zhǔn)確度驗證1.4.1 流動相配制、處方量輔料配制見阿奇霉素片含量分析方法線性驗證項下。1.4.2 樣品溶液配制精密稱取阿奇霉素對照品約 8mg、10mg、12 mg,置10ml量瓶中， 乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻， 作為對照品溶液。按 80%、100%、 120%的倍數(shù)稀釋，加乙腈配置成

13、濃度為0.8mg /ml 、 1mg/ml、1.2mg /ml 的溶液。1.1.3 測定精密量取50屋 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，得到阿奇霉素峰面積。 通過線性方程計算阿奇霉素濃度。用測得濃度和實際濃度之比計算回收率。1.1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)：回收率限度應(yīng)在98%-102臉間，回收率的SeiW2.0%。1.5 阿奇霉素片含量分析方法范圍驗證1.5.1 數(shù)據(jù)記錄及結(jié)果計算依據(jù) 1.2 線性， 1.3 精密度，1.4 準(zhǔn)確度，確定高效液相色譜法符合中國藥典2015 版阿奇霉素峰含量的范圍一般為測定濃度的范圍。1.5.2 判定標(biāo)準(zhǔn)：含量的范圍一般為測定濃度的80%? 120%。1.6 阿奇霉素片含量分

14、析方法專屬性驗證1.6.1 流動相配制、處方量輔料配制見阿奇霉素片含量分析方法線性驗證項下。1.6.2 溶液配制1.6.2.1 供試品溶液：取阿奇霉素片（XXX雙產(chǎn)）10片，研細(xì)，精密稱取樣品適量（約相當(dāng)于阿奇霉素0.1g ）置 100ml 量瓶中，加乙睛溶解并定量稀釋制成每1ml中約含阿奇霉素1mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；1.6.2.2 精密稱取阿奇霉素對照品（約25mg） ，置25ml 量瓶中，乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。1.6.2.3 空白溶液：取乙腈作為空白溶液。1.6.2.4 陰性溶液：按照阿奇霉素片配方，加入處方量混合輔料60.2mg,置100ml量瓶

15、中，加乙睛溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過 （0.45um微孔濾膜），濾過，續(xù)濾液，作為陰性溶液。1.6.3 測定精密量取經(jīng)微孔濾膜過濾后的供試品溶液、對照品溶液、空白溶液、陰性溶液各50區(qū)l ,注入液相色譜儀，每個樣品進(jìn)樣 2次，記錄色譜圖。1.6.4 判定標(biāo)準(zhǔn)：阿奇霉素對照品溶液與樣品溶液主峰保留時間一致，空白溶液與陰性溶液在主峰保留時間處應(yīng)為平直基線，無吸收峰。1.7 阿奇霉素片含量分析方法耐用性驗證1.7.1 改變流動相比例1.7.1.1 色譜條件 固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（C18） ； 檢測器：紫外檢測器，檢測波長210nm； 流動相： 磷酸鹽緩沖液（ 0.05mol/L 磷酸

16、氫二鉀溶液，用 20%磷酸溶液調(diào)節(jié)PH值至8.2）-乙睛=（40: 60） 流 速： 1.0mL/min。 柱 溫：30進(jìn)樣量：50 w L。照高效液相色譜法（通則0512）測定。1.7.1.2 系統(tǒng)適用性試驗溶液：取阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品約20mg加乙睛2ml溶解，制成每1ml中含10mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性試 驗溶液。1.7.1.3 取系統(tǒng)適用性試驗溶液50區(qū)L注入液相色譜儀。1.7.1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)：在改變流動相比例后，記錄的色譜圖應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)圖 譜一致。2. 阿奇霉素片溶出度分析方法驗證2.1 阿奇霉素片溶出度分析方法線性驗證照溶出度與釋放度測定法（ 通則 0931 第二法及高效液相色

17、譜法測定法測定 ）2.1.1 溶液配制2.1.1.1 取磷酸鹽緩沖液（ pH6.0） （0.1mol/L 磷酸氫二鈉溶液6000ml，加鹽酸約40ml,調(diào)節(jié)PH值至（6.0 ±0.05）900ml為溶出介質(zhì)。2.1.1.2 樣品溶液配制分別稱取阿奇霉素對照品約2.4 mg、 2.7 mg、 3.0 mg、 3.3mg、1.1.1 ,精密稱定，置10ml的量瓶中，加乙醇12ml使阿奇霉素溶解，再加溶出介質(zhì)稀釋至刻度，濾過，分別制成含阿奇霉素濃度約為0.24mg /ml 、 0.27mg /ml 、 0.3mg/ml 、 0.33mg /ml 、 0.36mg /ml 的溶液。1.1.2

18、 測定以溶出介質(zhì)作為空白試驗；照高效液相色譜法，取供試品溶液在210nm的波長處測定峰面積 A,記錄色譜圖。（圖譜附后）1.1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)：阿奇霉素片在0.24mg /ml 至 0.36mg /ml 的濃度范圍內(nèi)，阿奇霉素溶出度峰面積成線性且相關(guān)系數(shù)RA 99.0%。2.2 阿奇霉素片溶出度分析方法精密度驗證2.2.1 樣品溶液配制取阿奇霉素片1片（XXXX雙產(chǎn)），用磷酸鹽緩沖液（pH6.0）（0.1mol/L 磷酸氫二鈉溶液6000ml,加鹽酸約40ml,調(diào)節(jié)PH值至（6.0± 0.05）900ml 為溶出介質(zhì)。照溶出度與釋放度第二法（通則0931）測定，轉(zhuǎn)速為每分鐘100 轉(zhuǎn)，

19、依法操作。經(jīng)45 分鐘時，在漿葉頂端至液面中心，距溶出杯內(nèi)壁10mm處取溶液10 ml,濾過，作為樣品溶液。2.2.2 測定取供試品溶液在210nm勺波長處測定峰面積A,記錄色譜圖。連 續(xù)檢測6次，得阿奇霉素峰面積，計算RSDt。2.2.3 判定標(biāo)準(zhǔn)：阿奇霉素片溶出度溶液峰面積的 SeiW2.0%。2.3 阿奇霉素片溶出度分析方法耐用性驗證2.3.1 樣品溶液配制取阿奇霉素片1片（XXXXXXk產(chǎn)），用磷酸鹽緩沖液（pH6.0）（0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液 6000ml,加鹽酸約 40ml,調(diào)節(jié) PH值至（6.0 士0.05）900ml 為溶出介質(zhì)。，照溶出度與釋放度第二法（通則0931）

20、測定，轉(zhuǎn)速為每分鐘100 轉(zhuǎn)，依法操作。經(jīng)45 分鐘時，在漿葉頂端至液面中心，距溶出杯內(nèi)壁10mm處取溶液10 ml,濾過，作為樣品溶液。2.3.2 測定樣品溶液，在室溫下放置，分別于0、 1、 2、 3、 4、 5、 6小時精密樣品溶液，按含量測試方法，在 210nm的波長處測定峰面積 A2.3.3 判定標(biāo)準(zhǔn)：溶出度溶液6小時內(nèi)溶液穩(wěn)定，阿奇霉素片溶出度溶液峰面積的RS比2%2.4 阿奇霉素片溶出度分析方法準(zhǔn)確度驗證2.4.1 處方量原輔料配制處方量50%M輔料：精密稱定阿奇霉素原料藥 125mg混合輔料75.3 mg ,混合。處方量80%M輔料：精密稱定阿奇霉素原料藥 200mg混合輔料1

21、20.4 mg,混合。處方量100%原輔料：精密稱定阿奇霉素原料藥250mg、 混合輔料150.5 mg,混合。2.4.2 樣品溶液配制分別將處方量50%、 80%、 100%原輔料置溶出杯中，用磷酸鹽緩沖液 （ pH6.0） （0.1mol/L 磷酸氫二鈉溶液6000ml， 加鹽酸約40ml，調(diào)節(jié)PH值至（6.0 士 0.05）900ml為溶出介質(zhì)。，照溶出度與釋放度第二法（通則0931）測定，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，依法操作。經(jīng)45分鐘時，在漿葉頂端至液面中心，距溶出杯內(nèi)壁10mmt取溶液10 ml,濾過 , 作為樣品溶液。每個濃度水平配制3 份。2.4.3 測定按含量測試方法，在210nm

22、的波長處測定峰面積 A2.4.4 判定標(biāo)準(zhǔn)：回收率應(yīng)為標(biāo)示量的95%-105%之間，回收率的Sel W2.5%。3. 阿奇霉素片有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證3.1 系統(tǒng)適用性實驗3.1.1 色譜條件 固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（C18） ； 檢測器：紫外檢測器，檢測波長275nm； 流動相：0.5mol/L醋酸鏤（用冰醋酸調(diào)節(jié)PH至6.5）甲 醇乙腈（70： 30： 30） 流速：1.0mL/min 。 柱溫：35 進(jìn)樣量：20 wL。3.1.2 測定方法按高效液相色譜法（通則0512）測定。3.1.3 溶液配制取阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品約 20mg加乙睛2ml溶解，制成每 1ml中含10mg

23、的溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗溶液。3.1.4 取系統(tǒng)適用fi試驗溶液50M注入液相色譜儀，記錄色譜圖。3.1.5 判定標(biāo)準(zhǔn)：阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致。3.2 阿奇霉素片有關(guān)物質(zhì)分析方法專屬性驗證3.2.1 溶液配制A. 稀釋液配制：磷酸二氫銨溶液（稱取磷酸二氫銨1.73g, 加水溶解并稀釋至1000ml,用氨試液調(diào)節(jié)PH直至10.0 ±0.05）-甲醇- 乙腈（7： 7： 6）流動相：流動相A為磷酸鹽緩沖液（取0.05mol/L磷酸氫二鉀溶 液，用20%勺磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至8.2）-乙睛（45 ： 55）,流動相B為甲醇B.取雜質(zhì)S和雜質(zhì)A對照品（約5m。，置同一

24、100ml量瓶中加上 述稀釋液溶解并稀釋至刻度，制成每 1ml中各約含0.05mg的溶液， 作為雜質(zhì)S和雜質(zhì)A對照品溶液；另取阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品約 20m動口上述對口K品溶液2ml 溶解，制成每1ml中約含10mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液； C精密量取對照溶液10ml,置50ml量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度， 搖勻，作為靈敏度溶液， 取系統(tǒng)適用性溶液和靈敏度溶液各 50口,分別注入液相色譜儀，記 錄色譜圖，系統(tǒng)性實驗圖譜。D.空白溶液：取已配制的處方量輔料 60.2mg,置10ml量瓶中，加稀 釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過（0.45um微孔濾膜），搖勻，濾 過，取續(xù)濾液，作為儲備液。

25、E供試品溶液：取本品細(xì)粉適量（約0.16g）稱定，置10ml的量瓶中 加稀釋液溶解并定量稀釋制成每1ml中含10mg的溶液，濾過，取濾 液，作為供試品溶液；3.2.2 測定色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 流動相A為磷酸鹽緩沖液（取 0.05mol/L磷酸氫二鉀溶液，用20%勺磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至8.2）- 乙睛（45： 55）,流動相B為甲醇，柱溫為30C （必要時適當(dāng)調(diào)整）； 按下表進(jìn)行線性梯度洗脫；流速為每分鐘1.0ml,檢測波長為210nm時間（）流動相A（%）流動相B（%）075253595564955657525717525精密量取系統(tǒng)適用性溶液、供試品溶液、儲備液各50 w l,注入液相色譜儀，記錄色譜圖。3.2.3 判定標(biāo)準(zhǔn)：取系統(tǒng)適用性溶液、供試品溶液、儲備液各50“，分別注入液相色譜儀，系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中各峰之間的分 離度均應(yīng)大于1.2,阿奇霉素峰的保留時間應(yīng)在 3040分鐘之間。 空白輔料不干擾有關(guān)物質(zhì)檢測。3.3 阿奇霉素片有關(guān)物質(zhì)分析方法檢測限驗證與定量限檢測。3.3.1 溶液配制供試品溶液：見專屬性驗證項下供試品溶液。樣品溶液：取供試品溶液適量，加流動相分別配置成 1 mg/ml、 0.1 mg/ml、10 回/ml、1 閔/ml、0.1 ml、0.01