宮頸細(xì)胞DNA倍體檢測(cè)分析評(píng)估宮頸上皮內(nèi)瘤變

1、宮頸細(xì)胞DNA倍體檢測(cè)分析評(píng)估宮頸上皮內(nèi)瘤變    【中圖分類號(hào)】R737.33 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】16723783201111003801 【摘要】 目的 評(píng)價(jià)通過(guò) 細(xì)胞DNA倍體分析診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）的效果。 方法 對(duì)67宮頸癌普查婦女用 宮頸刷取材，液基薄層制片對(duì)巴氏染色片的常規(guī)細(xì)胞診斷，應(yīng)用全自動(dòng)DNA倍體分析儀對(duì)DNA染色進(jìn)行全自動(dòng)掃描 分析。并對(duì)細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性者做活體組織檢查并做出病理診斷。 結(jié)果 67例受檢者中，常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷為正常36例，非典 型鱗狀細(xì)胞不能明確意義（ASCUS）22例，低度鱗狀上皮內(nèi)瘤變（LSIL）7例

2、，高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變（HSIL）2例； 無(wú)DNA異倍體細(xì)胞者28例，有DNA異倍體細(xì)胞者39例，其中CIN-I 18例、CIN-15例、CIN- 6例。22例ASCUS 中，有8例無(wú)DNA異倍體細(xì)胞，未發(fā)現(xiàn)一例CIN-以上級(jí)別的病理改變。7例LSIL者中，有3例未發(fā)現(xiàn)DNA異倍體 細(xì)胞，其中4例有CIN-以上級(jí)別的病理改變，7例伴有DNA異倍體細(xì)胞者中，6例發(fā)現(xiàn)CIN-以上級(jí)別的病理改 變。與8例未發(fā)現(xiàn)DNA異倍體細(xì)胞者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p資料與方法 1 研究對(duì)象：2010年11月至2011年6月，我們對(duì)威海市郊3200名婦女進(jìn)行宮頸常規(guī)涂片及細(xì)胞DNA倍體分析的宮頸癌篩查，并對(duì)其中428例進(jìn)

3、行了病理活檢。我們將其中的67例宮頸組織作為研究對(duì)象。 2 宮頸脫落細(xì)胞的采集：在陰道擴(kuò)張器直視下，將宮頸刷刷頭中央較長(zhǎng)的刷絲插入子宮頸管內(nèi)約8mm處，周邊刷絲頂部抵觸在子宮頸粘膜面，順時(shí)針或逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)4-8圈，取出宮頸刷，用鑷子夾緊刷頭底座，拔脫刷頭，將刷尖向下垂直方向浸泡在樣本收集管的固定液中，旋緊管蓋后振蕩搖晃，然后將標(biāo)本瓶送到病理科細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室制片。 3 液基薄層制片及染色5：將裝有固定液和刷頭的標(biāo)本收集管，鍵入消化液放在振蕩器上振蕩1小時(shí)。然后以1500r/min離心5min，棄上清液，加入50%乙醇固定液1-2ml分別清洗。最后將固定液稀釋的細(xì)胞混懸液滴入細(xì)胞涂片器中，以以1300

4、r/min離心5min。每例受檢者制片2張，其中1張進(jìn)行巴氏染色，用于常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷；另外1張進(jìn)行Feulgen DNA染色，用于DNA 定量測(cè)定。 4 細(xì)胞學(xué)診斷：采用2001年修訂的TBS分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，分為正?；蜓装Y、非典型鱗狀細(xì)胞不能明確意義（ASCUS）、低度 鱗狀上皮內(nèi)瘤變（LSIL）、高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變（HSIL）和鱗狀細(xì)胞癌 （SCC）。 5 細(xì)胞DNA定量分析：全部福爾根（Feulgen）染色片用AcCell全自動(dòng)細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行掃描處理6，該系統(tǒng)已 達(dá)到歐洲定量細(xì)胞病理學(xué)會(huì)制定的有關(guān)DNA定量分析圖像系統(tǒng)的各項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)7。根據(jù)Auer等8提出的標(biāo)準(zhǔn)，出現(xiàn) 下列情況即認(rèn)為不正常：（

5、1）DNA指數(shù)>2.5異倍體細(xì)胞（5C細(xì)胞）；（2）DNA指數(shù)在1和2之間的細(xì)胞數(shù)超過(guò)被測(cè)細(xì)胞 總數(shù)的10%；（3）出現(xiàn)異倍體細(xì)胞峰。對(duì)DNA指數(shù)>2.5的細(xì)胞玻片，由技術(shù)人員在顯微鏡下逐一復(fù)核，以排除AcCell 系統(tǒng)將垃圾和重疊的細(xì)胞核誤認(rèn)為癌細(xì)胞或異常細(xì)胞的情況。DNA異倍體細(xì)胞按異倍體細(xì)胞數(shù)的多少分為3級(jí)：1或2 個(gè)異倍體細(xì)胞為級(jí)，3-10個(gè)異倍體細(xì)胞為級(jí)，>10個(gè)異倍體細(xì)胞為級(jí)。 6 陰道鏡及病理學(xué)檢查：凡是宮頸常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查在LSIL及以上級(jí)別或DNA定量分析結(jié)果建議做進(jìn)一步臨床檢查的婦女，均建議行陰道鏡檢查，并對(duì)宮頸可疑部位進(jìn)行4點(diǎn)以上的組織活檢。少數(shù)受檢者常規(guī)

6、細(xì)胞學(xué)或DNA定量分析正常，但陰道鏡檢查可疑者也進(jìn)行了活檢。病理診斷順次為正常、炎癥、CIN-I、CIN-和CIN-（原位癌）及浸潤(rùn)癌。 7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，顯著性水平=0.05。 結(jié) 果 1 常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷、細(xì)胞DNA倍體分析結(jié)果：67例受檢者中，常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷為正常36例，ASCUS 22例， LSIL 7例，HSIL 2例。細(xì)胞DNA倍體分析可見(jiàn)，正常宮頸細(xì)胞大多分布在DNA指數(shù)為1的位置，少數(shù)在DNA指數(shù) 為2的位置，沒(méi)有超過(guò)DNA指數(shù)為2.5的細(xì)胞，有DNA異倍體者，細(xì)胞大多分布在DNA指數(shù)為1的部位，少數(shù)在DNA 指數(shù)超過(guò)2.

7、5，或很多異倍體細(xì)胞的DNA指數(shù)超過(guò)2.5，67例受檢者中，無(wú)異倍體細(xì)胞者28例，有異倍體細(xì)胞者39例 ，其中CIN-I7例，CIN-8例，CIN- 6例。 2 常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷、細(xì)胞DNA倍體分析與病理學(xué)診斷的關(guān)系：常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷為正常的36例中，有17例無(wú)異倍體 細(xì)胞，其中只有3例病理學(xué)診斷為CIN-及以上級(jí)別病變;另24例 伴有DNA 異倍體細(xì)胞者中有12例病理學(xué)診斷為 CIN-及以上級(jí)別病變。22例ASCUS者中，有7例無(wú)異倍體細(xì)胞，未發(fā)現(xiàn)一例CIN-及以上級(jí)別病變。14例有 CIN-及以上級(jí)別病變。7例LSIL者中，有4例未發(fā)現(xiàn)異倍體細(xì)胞，其中2例有CIN-及以上級(jí)別病變。6例伴有 D

8、NA異倍體細(xì)胞者中，5例發(fā)現(xiàn)CIN-及以上級(jí)別病變，與4例未發(fā)現(xiàn)異倍體細(xì)胞者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P         3 通過(guò)常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷和細(xì)胞DNA倍體分析評(píng)估CIN-及以上級(jí)別病理改變的效果：二者的關(guān)系見(jiàn)表2。若以常規(guī) 細(xì)胞學(xué)診斷為ASCUS及以上級(jí)別作為評(píng)估CIN-及以上級(jí)別改變的標(biāo)準(zhǔn)，其敏感性為76.3%，特異性為55.4%，陽(yáng)性預(yù) 測(cè)值為73.5%，陰性預(yù)測(cè)值為59.5%。而以1個(gè)DNA異倍體細(xì)胞作為評(píng)估CIN-及以上級(jí)別改變的標(biāo)準(zhǔn)，其敏感性 為88.2%，特異性為62.5%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為80.2%，陰性預(yù)

9、測(cè)值為79.6%。若以常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷為L(zhǎng)SIL及以上級(jí)別改變 的標(biāo)準(zhǔn)，其敏感性為57.4%，特異性為82.5%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為85.4%，陰性預(yù)測(cè)值為53.0%。而以3個(gè)DNA異倍體細(xì) 胞作為評(píng)估CIN-及以上級(jí)別改變的標(biāo)準(zhǔn)，其敏感性為71.2%，特異性為83.5%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為90.1%，陰性預(yù)測(cè)值 為65.1%。數(shù)據(jù)顯示通過(guò)細(xì)胞DNA倍體分析評(píng)估CIN-及以上病理改變的效果優(yōu)于常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷。 討 論 1 細(xì)胞DNA倍體分析評(píng)估不僅能用于診斷CIN病變，而且還可以用于預(yù)測(cè)CIN疾病的發(fā)展：本研究結(jié)果表明,僅根 據(jù)TBS分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行常規(guī)宮頸細(xì)胞學(xué)診斷作為活檢標(biāo)準(zhǔn),以發(fā)現(xiàn)CIN-及以上病理改變是

10、不夠的，若結(jié)合細(xì)胞DNA 倍體分析結(jié)果，可以明顯提高病變的檢出率。Bcking等9報(bào)道了相似的結(jié)果。因此，建議：（1）僅細(xì)胞學(xué)診斷為 ASCUS、LSIL，而無(wú)異倍體細(xì)胞者，應(yīng)進(jìn)行定期隨訪，即12-18個(gè)月復(fù)查。（2）細(xì)胞學(xué)診斷為ASCUS、LSIL，并伴 有異倍體細(xì)胞者，需及時(shí)進(jìn)行病理組織活檢。本研究結(jié)果還表明，細(xì)胞DNA倍體分析評(píng)估CIN-及以上級(jí)別病理改變 的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值均比常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷高。Grote等10報(bào)道，ASCUS 、LSIL和AGC作為診斷CIN-的 陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值為35%和22%，而細(xì)胞DNA倍體分析的陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值為65%和85%。Bcking等報(bào)道， 無(wú)異

11、倍體細(xì)胞的ASCUS 、LSIL患者診斷CIN-的陰性預(yù)測(cè)值為95%，而具有異倍體細(xì)胞的ASCUS 、LSIL患者 2個(gè)月后發(fā)展為CIN-或?qū)m頸癌的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為46.0%，3年后100%發(fā)展為宮頸癌，其陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為100%. 2 細(xì)胞DNA倍體分析對(duì)CIN-較以上級(jí)別的診斷較常規(guī)細(xì)胞學(xué)方法更敏感：本研究結(jié)果顯示，以常規(guī)宮頸細(xì)胞學(xué)診 斷為L(zhǎng)SIL及以上級(jí)別作為評(píng)估CIN-及以上級(jí)別病理改變的標(biāo)準(zhǔn)，其敏感性為57.4%，特異性為82.5% ；而以3個(gè) DNA異倍體細(xì)胞作為評(píng)估CIN-及以上級(jí)別改變的標(biāo)準(zhǔn)，其敏感性為71.2%，特異性為83.5%。此前，武漢蘭丁細(xì)胞 DNA公司的孫小蓉博士等的研究也

12、得到了相似的結(jié)果11。常規(guī)宮頸細(xì)胞學(xué)診斷除了宮頸取材、制片可影響其結(jié)果 外，細(xì)胞病理學(xué)醫(yī)生的診斷水平也至關(guān)重要，不同水平的醫(yī)生做出的診斷結(jié)果常常不一致。而宮頸細(xì)胞DNA倍體分析因量化而減少了人為的誤差，提高了診斷的準(zhǔn)確性。 參考文獻(xiàn) 1 Ostor AG. Natural history of cervical intraepithelial ： a critical review .Int J Gynecol Pathol, 1993, 12: 186-192. 2 Heatley MK . How should we grade CINHistopathology, 2002, 40: 3

13、77-390 3 Blohmer JU, Schmalisch G, Klette I, et al . Lnereased incidence of cervical intraepithelial neoplasia in young women in the mitte district , district , Berlin : Germany. Acta Gytology , 1999 , 43: 195-200 4 孫小蓉，汪鍵，Bcking A. DNA倍體分析系統(tǒng)用于宮頸癌及上皮內(nèi)瘤變的診斷及預(yù)測(cè)。中華病理學(xué)雜志，2005，34：435-437. 5 Sun XR ,Wang

14、J, Gamer D, et al. Detection of cervical cancer and high grade neoplastic lesions by a combination of liquid-based sampling preparation and DNA measurements using automated image cytometry. Cell Oncol, 2005, 27:33-41. 6 Palcic B, Gamer DM , MacAulay CE , at al . Oncometrics Imaging Corporation and X

15、illix Technologies Corporation .Use of the Cyto Savant in quantitative cytology. Acta Cytol , 1996, 40: 67-72. 7 Bcking A ,Giroud F, Reith A. Consensus report of the ESACP task force on standar dization of diagnostic DNA image cytometry. European Society for Analytical Cellular Pathology . Anal Cell Pathol , 1995, 8: 67-74. 8 Auer GU, Caspersson TO ,Wallgren AS . DNA content and survival in mammary carcinoma . Anal Quant Cytol , 1