巰甲丙脯酸和倍他樂克對高血壓大鼠左心室MHC基因表達的影響

1、    巰甲丙脯酸和倍他樂克對高血壓大鼠左心室MHC基因表達的影響            關鍵詞：高血壓；肌球蛋白；卡托普利    中國病理生理雜志000803    摘 要 目的和方法:采用核酸斑點雜交技術，測定雙腎雙夾(2K2C)腎性高血壓大鼠早期左心室肌球蛋白重鏈(MHC)基因表達的變化，及血管緊張素轉換酶抑制劑巰甲丙脯酸和-受體阻斷劑倍他樂克對該變化

2、的影響。結果:2K2C組大鼠術后24 h，左心室-MHC mRNA水平即有所降低， 72h時明顯降低，為對照組的0.48倍(P<0.05)；與此相反，2K2C組-MHC mRNA水平，在術后24h已略有升高，72 h時明顯增加，為對照組的2.7倍(P<0.05)。巰甲丙脯酸可抑制2K2C引起的MHC基因表達的改變，而倍他樂克不能阻止該變化。結論:腎性高血壓早期,MHC基因表達發(fā)生改變，腎素血管緊張素系統(tǒng)可能起重要作用。    中分類號 R544.1+4 文獻標識碼 A    文章編號 1000-4718

3、(2000)08-0681-04    Effect of captopril and betaloc on the changes in    expression of MHC of left ventricle in hypertensive rats    RUAN Hong-mei    (Department of Physiology，Guangzhou Medical College, Guangzhou 510182,

4、 China)    PAN Jing-yun    (Department of Physiology, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089, China)    Abstract AIM：To investigate myosin heavy chain(MHC)gene expression and the effects of captopril and betaloc at an

5、early stage of hypertension. METHODS：Model of hypertension was made by partly narrowing two bilateral renal arteries(2K2C). The rats were divided into four groups at random. (1) control group; (2)2K2C group；(3)captopril group;(4)betaloc group.Levels of -MHC and -MHC mRNA were determined by dot-blot.

6、 RESULTS：-MHC mRNA expression were gradual1y reduced in 2K2C group，while -MHC mRNA expression were increased，and the marked changes were observed at 72h postoperation. Captopril could inhibit the changes in MHC gene expression; but betaloc could not. CONCLUSION: The expression of MHC gene has change

7、d at an early stage of renal hypertensive rat，and renin-angiotensin system may play an important role in this change.    MeSH Hypertension; Myosin; Captopril    肌球蛋白重鏈(myosin heavy chain,MHC)基因表型的變化是心肌肥大的重要表現之一。在哺乳動物心室肌中存在兩種MHC基因，即-MHC 基因和-MHC基因，其表達產物形成3種同型異構體

8、，其中V1型含兩條相同的-MHC鏈，V3型含兩條相同的鏈。    正常成年大鼠以V1型占絕對優(yōu)勢，V3型為胚胎期的主要形式。主動脈縮窄壓力超負荷大鼠心室肌由V1型向V3型遷移1，進而引起心肌細胞功能改變，其機制尚不清楚。本工作用核酸雜交技術，研究雙腎雙夾(two-kidney two-clip, 2K2C)早期高血壓大鼠，左心室MHC基因轉錄的變化，以及巰甲丙脯酸和倍他樂克的作用，探討心肌肥大的可能機制。    材 料 和 方 法    一、實驗分組  &

9、#160; 雄性SD大鼠體重80100 g(購自廣東省實驗動物中心)隨機分4組。(一)2K2C組 經戊巴比妥鈉麻醉(50 mg/kg，ip),無菌條件下切開腹腔，將銀夾(內徑0.3 mm)安置于雙側腎動脈起始部，造成雙側腎動脈部分狹窄。(二)巰甲丙脯酸組 手術同2K2C組，術前3 d至實驗結束服用巰甲丙脯酸，劑量為100 mg.kg-1.d-1，加至水中飲用，每日新鮮配制。(三)倍他樂克組 手術同2K2C組，術前3 d至實驗結束服用倍他樂克，劑量為200 mg.kg-1.d-1，加至水中飲用。(四)對照組 除不上銀夾外，其余手術同2K2C組。   

10、60;二、平均動脈血壓(MAP)和左心室重量測定    術后24 h、36 h、48 h、72 h，麻醉，稱體重，由右頸總動脈插管經壓力換能器四導生理記錄儀(RM-6000，日本光電廠)測血壓。開胸取出心臟，留取左心室(含室間隔)并稱重，測定左心室重量/體重比值。    三、左心室總RNA提取及-MHC和-MHC mRNA水平的測定    用硫氰酸胍-酚-氯仿一步法2提取左心室總RNA,-MHC和-MHC探針各含20個核苷酸3(上海細胞生物學研究所合成)，用T4噬菌體多核苷酸

11、酶(Pharmacia Co.產品)在其5端標記-32P(購自北京福瑞生物工程公司)，依方法4在液體閃爍計數儀檢測counts.min-1，探針比活度達3×l08 counts.min-1.g-1，探針標記率為40%。各樣品取8.0 g總RNA，采用Dot一blot進行雜交分析3，放射自顯影后，剪下雜交纖維膜上各斑點放入5 mL液閃劑中，作液體閃爍計數。    四、統(tǒng)計分析    每組實驗重復3次，數據以±s表示，t檢驗和方差分析。    結 果 

12、;   一、 平均動脈血壓(MAP)和左心室重量/體重比(LVW/BW)    表1 各實驗組術后不同時間MAP的水平    Tab 1 Characteristics of 2K2C ,captopril and betaloc on MAP after 2K2C(±s,n=6)    24h    36h    48h   

13、 72h    Control    14.28±0.50    14.17±1.17    12.75±1.16    13.11±1.46    2K2C    15.42±0.97    16.31±0.

14、19.    19.46±4.71. .    23.77±1.93. .    2K2C+captopril    11.91±1.68    10.09±1.47    12.84±1.14    11.06±0.63   &

15、#160;2K2C+betaloc    12.56±2.2    11.43±1.37    12.17±0.94    13.02±2.50    .P<0.05,. .P<0.01, vs control    雙腎雙夾36 h，大鼠動脈血壓明顯高于假手術組，并持續(xù)72 h。巰甲丙脯酸組、倍他樂克組血

16、壓術后36 h開始，明顯低于2K2C組；在各對應時點，與對照組無顯著差異。觀察期間(表2)，各實驗組在不同時點，各實驗組LVW/BW比值均接近，無顯著差異(P>0.05)。在2K2C組術后24h,36h,48h和72h時，LVW/BW比值與對照組比無明顯差異(P>0.05)。    表2 各實驗組術后不同時間LVW/BW的水平    Tab 2 Characteristics of 2K2C,captopril and betaloc on LVW/BW (×10-3)after 2K2C (

17、±s,n=6)    24h    36h    48h    72h    Control    3.37±0.18    2.92±0.27    2.89±0.09    3.37±0

18、.16    2K2C    3.68±0.03    3.44±0.14    4.05±0.40    4.22±0.20    2K2C+captopril    3.34±0.09    2.88±0.02

19、60;   3.34±0.11    3.43±0.33    2K2C+betaloc    3.24±0.21    4.03±0.07    4.11±0.19    3.92±0.27    二、 左心室-MHC和-MHC

20、 mRNA水平的變化    (一)-MHC和-MHC 基因表達的時間過程 在整個實驗期間，對照組-MHC和-MHC mRNA水平無明顯差異(P>0.05)(結果未顯示)。2K2C組大鼠在術后24 h，-MHC表達低于對照組。36 h后，隨腎動脈縮窄時間延長,-MHC mRNA含量逐漸減少，72 h時左心室-MHC表達水平僅有(243±34.5) counts.min-1，明顯低于對照組-MHC mRNA水平(497.0±23.6) counts.min-1(P<0.05)。與-MHC 變化相反，2K2C組大鼠左心室-MHC

21、 mRNA水平在術后24h高于對照組，并隨腎動脈縮窄時間延長,表達亦越來越強。72 h時，-MHC 表達水平為(381.7±93.6) counts.min-1，明顯高于對照組(141.0±10.4) counts.min-1(P<0.05)(1)。    (二)血管緊張素轉換酶抑制劑巰甲丙脯酸(captopril)的作用 2K2C組術后72 h時，左心室-MHC顯著少于對照組。在對應時點，巰甲丙脯酸組左心室-MHC mRNA水平均高于2K2C組，72 h時有顯著差異，為2K2C組的1.45倍(P<0.05)；與對照組間無

22、明顯差異(P>0.05)。2K2C組大鼠，術后48 h、72 h時，左心室-MHC表達明顯高于對照組，分別達到(257.67±6.7) counts.min-1和(381.7±33.6) counts.min-1。巰甲丙脯酸組大鼠，術后36 h、48 h、72 h, -MHC表達均少于2K2C組，72 h時為(152.3±7) counts.min-1，有顯著差異(P<0.05)；與對應時點對照組的-MHC含量(134.3±17.3) counts.min-1接近(P>0.05)。結果表明，巰甲丙脯酸能夠逆轉2K2C腎性高血壓早期左心室

23、MHC基因表達的改變(2)。    Fig 1 Dot-blot analysis of MHC mRNA levels in 2K2C hypertension rats    1 斑點雜交分析2K2C高血壓大鼠左心室MHC基因表達    Fig 2 Dot-blot analysis of effect of captopril on MHC gene expression in 2K2C hypertension rats at 72h post-operation&#

24、160;   2 斑點雜交分析captopril對2K2C術后72h大鼠左心室MHC基因表達的影響    (三)-腎上腺素能受體阻斷劑倍他樂克(betaloc)的作用 為進一步探討2K2C引起MHC基因表型轉換的作用機制，大鼠預先服用等效降壓作用的降壓藥倍他樂克，再接受2K2C手術。術后72 h，倍他樂克組-MHC 表達量為(289.7±31.4) counts.min-1，與2K2C組(257±48.3) counts.min-1水平接近(P>0.05)；仍明顯低于對照組(406.0±23.5) counts.min-1(P<0.05)。2K2C組術后72 h，-MHC表達已明顯高于對照組(1)；倍他樂克組血壓雖然正常，左心室-MHC mRNA含量