膠體金法在HIV抗體檢測中的應(yīng)用

1、1.D NA marker(bp2.陽性對照3.陰性對照48.樣本PCR產(chǎn)物3討論喹諾酮類藥物有多種,因很多結(jié)構(gòu)含氟,也稱為氟喹諾酮類藥物,其典型的代表藥物為環(huán)丙沙星。早期研究發(fā)現(xiàn)淋球菌氟喹諾酮耐藥性的發(fā)生與細(xì)菌染色體上氟喹諾酮耐藥性決定區(qū)(QRDR上DNA螺旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶I V有關(guān)。直到1994年,才由美國Belland首次揭示了淋球菌環(huán)丙沙星耐藥性與DNA螺旋酶A亞單位(gyr A基因和拓?fù)洚悩?gòu)酶I V C 亞單位(par C基因之間的相關(guān)性。DNA螺旋酶是一種型的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶,DNA螺旋酶A亞基(Gyr A由gyr A編碼,DNA螺旋酶是氟喹諾酮類藥物的主要作用靶位,gyr A基因

2、的突變可造成藥物靶位點(diǎn)A亞基發(fā)生改變,影響它與藥物結(jié)合的能力,使淋球菌表現(xiàn)出對該類藥物的耐受性;也是造成淋球菌產(chǎn)生對喹諾酮類耐藥的主要原因,DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I V C亞單位(Par C由par C基因編碼,gyr A和par C位點(diǎn)改變是淋球菌重要的耐藥機(jī)制。DNA螺旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶是細(xì)菌細(xì)胞生長所必需的酶,喹諾酮類藥物抗菌作用的原始靶位是細(xì)菌的DNA螺旋酶(即拓?fù)洚悩?gòu)酶II,通過對抗其酶活性,干擾其DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄,破壞其DNA結(jié)構(gòu),使細(xì)菌染色體斷裂,從而起到殺菌作用。由于編碼DNA螺旋酶A亞基和DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I V C亞單位的基因發(fā)生點(diǎn)突變,形成編碼另一種氨基酸的密碼子,而使所編碼的酶亞

3、基發(fā)生氨基酸取代,影響到喹諾酮類藥物與靶位的結(jié)合,從而影響細(xì)菌對環(huán)丙沙星類藥物的敏感性及耐藥性的出現(xiàn)。本試驗(yàn)33株淋球菌對環(huán)丙沙星全部耐藥,證實(shí)了臨汾地區(qū)的淋球菌對環(huán)丙沙星的耐藥率較高。耐環(huán)丙沙星淋球菌都擴(kuò)增出了gyr A基因QRDR區(qū)域,證明QRDR在對環(huán)丙沙星的耐藥中起重要作用。PCR方法對淋球菌的耐藥性進(jìn)行快速檢測,克服細(xì)菌培養(yǎng)檢測藥物敏感性需要較長時(shí)間的弊端,對于促進(jìn)臨床合理應(yīng)用抗生素將具有重要意義。參考文獻(xiàn):1王蓓,王長嫻,糜祖煌.淋球菌對大觀霉素與環(huán)丙沙星耐藥性研究J.中國公共衛(wèi)生,2005,21(3.2謝國艷.淋病奈瑟球菌耐氟喹諾酮類藥物與gyr A和par C基因突變的相關(guān)性研

4、究J.中國感染與化療雜志,2006,6(2:89. 3Belland RJ,Morris on SG,Is on C,et al.Neisseria gonorrhoeae ac2quires mutati ons in anal ogous regi ons of gyr A and par C in fluor o2quinol one resistant is olatesJ.MolM icr obi ol,994,14:3712380. 4Deguchi T,Yasuda M,Nakano M,et al.Rap id detecti on of pointmutati ons of

5、the Neisseriagonorrhoeae gyr A gene ass ociated with in2 creased suscep tibilities t o quinol onesJ.Jclin M icr obi ol,1996,34:225522258.(收稿日期:2008203216作者簡介:侯臨平(1972,女,山西臨汾人,1997年畢業(yè)于青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院,主管檢驗(yàn)師,山西醫(yī)科大學(xué)在職研究生。膠體金法在H I V抗體檢測中的應(yīng)用程慶,劉志偉,鄭定容(深圳市寶安區(qū)西鄉(xiāng)人民醫(yī)院,廣東深圳518102摘要目的:通過E L I S A雙抗原夾心法和膠體金法檢測H I V抗體的比較

6、,評價(jià)膠體金法檢測H I V抗體的效果。方法:用膠體金法和E L I S A法檢測H I V抗體。結(jié)果:用E L I S A法對11497份待測標(biāo)本進(jìn)行初篩,有19份標(biāo)本為陽性;用E L I S A雙孔實(shí)驗(yàn)和膠體金法對這19份陽性標(biāo)本復(fù)查,其中兩者復(fù)查結(jié)果均為陽性5份標(biāo)本;未出現(xiàn)E L I S A雙孔實(shí)驗(yàn)復(fù)查陽性,膠體金法復(fù)查陰性的情況。結(jié)論:抗2H I V初篩試驗(yàn)陽性S/CO值4.0的標(biāo)本,膠體金法代替E L I S A 雙孔復(fù)查是可行的。關(guān)鍵詞H I V抗體檢測;E L I S A法;膠體金法中圖分類號R512.91文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼B文章編號167125098(20081722207202艾滋病

7、又稱獲得性免疫缺陷綜合征(A I D S,由人類免疫缺陷病毒(H I V引起的,以細(xì)胞免疫缺陷為主要特征的傳染病。H I V抗體的檢測結(jié)果是H I V感染者和A I D S患者重要的診斷依據(jù)。目前,醫(yī)院、疾病預(yù)防控制中心等H I V初篩實(shí)驗(yàn)室普遍采用E L I S A法對可疑人群進(jìn)行篩選。本文將初篩實(shí)驗(yàn)陽性的標(biāo)本分別用E L I S A雙孔實(shí)驗(yàn)和膠體金法實(shí)驗(yàn)復(fù)查,探討用膠體金法代替E L I S A雙孔實(shí)驗(yàn)復(fù)查的可行性。1材料和方法1.1材料表1三種檢測試劑方法試劑品牌批號有效期生產(chǎn)廠家試劑進(jìn)行E L I S A雙孔實(shí)驗(yàn)復(fù)查,同時(shí)用膠體金試紙板條復(fù)查(取40l待測樣本加在試紙板條的加樣區(qū),再在

8、加樣區(qū)的上方加1滴稀釋液,30m in內(nèi)觀察并記錄結(jié)果。對比這兩種方法復(fù)查的陽性率。將初篩試驗(yàn)陽性的標(biāo)本送深圳市疾病預(yù)防控制中心確診。2結(jié)果2.1H I V抗體初篩從11497份標(biāo)本中,用E L I S A法初篩,有19份標(biāo)本陽性,兩組A值與臨界值(cut off的比值(S/ CO范圍見表2。表211497份標(biāo)本初篩陽性結(jié)果S/CO值范圍試劑份數(shù)臨界值S/CO4.0S/CO1.04.0S/CO<1.0麗珠69350.23366926科華45620.1180.2302845522.2H I V抗體復(fù)查將19份初篩陽性的血清標(biāo)本同時(shí)用E L I S A雙孔實(shí)驗(yàn)和膠體金法復(fù)查,結(jié)果見表3。表3

9、19份標(biāo)本初篩與復(fù)篩結(jié)果方法S/CO4.0S/CO1.04.0初篩(EL I S A514復(fù)篩(EL I S A50復(fù)篩(膠體金法50確診(免疫印跡法503討論A I D S的流行已成為人類社會(huì)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展的災(zāi)難,全球活著的H I V感染者已超過4300萬人,自1985年我國發(fā)現(xiàn)首例A I D S患者以來,呈加速流行的趨勢,疫情正在從高危人群向一般人群傳播,截止到2007年底,我國估測存活的H I V感染者超過100萬。因此,對H I V感染者的早期診斷,便于控制自身疾病的發(fā)展,也可以防止傳染給他人。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),初篩實(shí)驗(yàn)中S/CO比值4.0的5份標(biāo)本,用膠體金法和E L I S A法雙孔實(shí)驗(yàn)復(fù)查

10、均為陽性,送深圳市疾病預(yù)防控制中心確診也是陽性?？梢?初篩試驗(yàn)陽性S/CO 值4.0的標(biāo)本,可用膠體金法代替E L I S A法雙孔實(shí)驗(yàn)復(fù)查,而且膠體金法操作簡單。此外,對懷疑是H I V感染的急診手術(shù)前患者采用膠體金法快速檢測H I V抗體,可節(jié)省檢測時(shí)間以贏得寶貴的手術(shù)時(shí)間,又可使醫(yī)生在術(shù)中對可疑患者進(jìn)行針對性預(yù)防,降低醫(yī)源性H I V感染概率。但對于初篩S/CO 比值在1.04.0之間的標(biāo)本,用E L I S A雙孔實(shí)驗(yàn)進(jìn)行復(fù)查未出現(xiàn)陽性,但在第一次初篩試驗(yàn)出現(xiàn)假陽性,這可能與血清中類風(fēng)濕因子干擾有關(guān)1,造成E L I S A法檢測H I V抗體試驗(yàn)假陽性。而用膠體金法復(fù)查均為陰性。本著

11、為患者負(fù)責(zé)的原則,我們?nèi)詫⒊鹾Y實(shí)驗(yàn)中S/C O比值在1.04.0之間的標(biāo)本送深圳市疾病預(yù)防控制中心確診,最后也確診為陰性。根據(jù)衛(wèi)生部2004年“規(guī)范”中規(guī)定H I V抗體檢測分初篩和復(fù)篩兩個(gè)步驟,而確認(rèn)試驗(yàn)(免疫印跡法操作復(fù)雜、費(fèi)用昂貴,為減少受檢人員的經(jīng)濟(jì)支出和實(shí)驗(yàn)人員的工作負(fù)荷,要求初篩實(shí)驗(yàn)盡可能的準(zhǔn)確。在臨床工作中,經(jīng)典的初篩方法是E L I S A法,若為陽性再用E L I S A雙孔實(shí)驗(yàn)復(fù)查,而E L I S A 雙孔復(fù)查操作繁鎖和耗時(shí)長,增加了實(shí)驗(yàn)人員的感染機(jī)會(huì)。因此筆者通過此實(shí)驗(yàn)認(rèn)為:抗2H I V初篩試驗(yàn)陽性S/CO值4.0的標(biāo)本,膠體金法代替E L I S A雙孔復(fù)查是可行的

12、。參考文獻(xiàn):1許春向,呂蛛清.衛(wèi)生化學(xué)M.第3版.人民衛(wèi)生出版社,1993,10.2李宏,王哲,馬麗萍,等.H I V抗體初篩與確認(rèn)(WB測試結(jié)果對比分析J.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2003,13(6:7522753.(收稿日期:2008203222實(shí)驗(yàn)室對急性心肌梗死早期診斷指標(biāo)的應(yīng)用及評價(jià)常玉梅(解放軍第252醫(yī)院,河北保定071000摘要目的:探討實(shí)驗(yàn)室對急性心肌梗死(AM I早期診斷指標(biāo),為臨床診斷提供有價(jià)值的依據(jù)。方法:采用血清肌鈣蛋白(cTn I和肌紅蛋白(Mb免疫比濁定量測定法和肌酸激酶同工酶2MB(CK2MB活性定量測定法,儀器貝可曼,對53例AM I患者,126例不穩(wěn)定性心絞痛患者

13、和22例骨骼肌損傷患者,24例健康對照組檢測結(jié)果進(jìn)行綜合比較分析。結(jié)果:AM I組患者血清cTn I值明顯高于健康對照組差異非常顯著(P<0.01AM I組Mb值顯著高于正常值,除骨骼肌損傷組Mb有明顯升高外,其他對照組測定值均在正常范圍以內(nèi),與AM I組有明顯差異(P<0.01,cTn I及Mb 的靈敏性明顯高于CK2MB。結(jié)論:Mb是早期首選診斷指標(biāo),cTn I有獨(dú)特的特異性和更寬的時(shí)間診斷窗,cTn I、Mb以及CK2MB三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測,在AM I早期診斷起著彼此互補(bǔ)的作用,并具有非常重要的臨床意義。關(guān)鍵詞急性心肌梗死;肌紅蛋白;肌鈣蛋白I;肌酸激酶同工酶2MB中圖分類號R5