肝硬化患者胃粘膜誘導(dǎo)型一氧化氮合酶定位、定量研究

1、    肝硬化患者胃粘膜誘導(dǎo)型一氧化氮合酶定位、定量研究        應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP方法研究肝硬化患者胃粘膜誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的表達(dá)，探討一氧化氮(NO)在肝硬化胃粘膜病變(GML)中的作用。 對(duì)象與方法一、研究對(duì)象乙型肝炎后肝硬化患者45例，男女比為81，平均年齡52.8歲(范圍2164歲)；肝硬化按Child-pugh評(píng)分：A級(jí)15例，B級(jí)12例，C級(jí)18例。對(duì)照組19例：輕型慢性乙型肝炎(CPH)13例，急性甲型肝炎(AH)6例(1995年全國(guó)病毒性

2、肝炎會(huì)議診斷標(biāo)準(zhǔn))；男女比為154，平均年齡43.5歲(范圍2461歲)。根據(jù)內(nèi)鏡診斷有無GML分5組：(一)肝硬化伴門脈高壓性胃病(PHG)組：20例；PHG內(nèi)鏡診斷參考Sarin1標(biāo)準(zhǔn)：胃粘膜mosaic樣變伴紅暈；散在或彌漫性紅斑呈“麻疹或猩紅熱樣”改變；胃粘膜呈“櫻桃色”紅斑。(二)肝硬化合并十二指腸潰瘍(HPU)組：14例；內(nèi)鏡下潰瘍分期為A1H2。(三)肝硬化無GML(LC-N)組：11例；內(nèi)鏡下表現(xiàn)為輕度慢性胃炎。(四)十二指腸潰瘍病(Non-HPU)組：11例(CPH8例，AH3例)；潰瘍分期為A1H2。(五)無GML(正常)組：8例(CPH 5例，AH 3例)；內(nèi)鏡診斷為輕度

3、慢性胃炎。二、方法GIF-XQ30型內(nèi)鏡下于胃竇前壁距幽門口23cm取胃粘膜3塊，Bouin液固定24小時(shí)，常規(guī)酒精梯度脫水；石蠟包埋、切片5m，常規(guī)HE染色；免疫組化SP法步驟：脫蠟3%H2O2室溫30分鐘10%羊血清封閉160抗iNOS多抗(Santa Cruz)4°C過夜SP試劑盒染色(北京中山公司提供，按說明書操作)；MPV型顯微分光光度計(jì)測(cè)定iNOS表達(dá)陽性組織、細(xì)胞的光密度值，放大倍數(shù)400×，每例隨機(jī)測(cè)定10個(gè)區(qū)域數(shù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法：光密度值用±s表示,Systat統(tǒng)計(jì)軟件秩和檢驗(yàn)。結(jié)果肝硬化患者胃粘膜上皮細(xì)胞、腺細(xì)胞、血管均有iNOS陽性表達(dá)，但其

4、表達(dá)強(qiáng)弱不一致，見表1。PHG組及HPU組血管iNOS表達(dá)均較正常組及LC-N組增加(P<0.001)，胃粘膜上皮細(xì)胞、腺細(xì)胞iNOS表達(dá)均較正常組減少(P<0.001)；HPU組胃粘膜血管iNOS表達(dá)較非HPU患者增加(P<0.001)。肝硬化患者Child分級(jí)與胃粘膜iNOS表達(dá)見表2：Child C級(jí)患者胃粘膜血管iNOS較Child A級(jí)明顯增加(P<0.001)，但胃粘膜上皮細(xì)胞、腺細(xì)胞iNOS減少與肝硬化Child分級(jí)無明顯關(guān)系(P>0.05)。表1各組患者胃粘膜iNOS表達(dá)定量測(cè)定結(jié)果組別病例數(shù)測(cè)定區(qū)域數(shù)血管腺細(xì)胞上皮細(xì)胞PHG組202000.21&

5、#177;0.10*?0.15±0.110.18±0.08?HPU組141400.23±0.12*?0.16±0.080.16±0.04?LC-N組111100.17±0.080.16±0.040.18±0.09非HPU組111100.17±0.090.15±0.09?0.18±0.09?正常組8800.16±0.070.19±0.080.54±0.45注：*與LC-N比較，與非HPU比較，與正常組比較，P<0.001表2胃粘膜iNOS表達(dá)與肝硬化C

6、hild分級(jí)關(guān)系分組例數(shù)測(cè)定區(qū)域數(shù)血管腺細(xì)胞上皮細(xì)胞肝硬化Child分級(jí)A151500.16±0.06*0.12±0.050.17±0.05B121200.19±0.080.15±0.060.18±0.09C181800.21±0.08?0.13±0.05?0.18±0.05?對(duì)照組191900.16±0.090.17±0.050.51±0.45注：與對(duì)照組比較P<0.001,*組內(nèi)比較P<0.001討論新近發(fā)現(xiàn)，NO與肝硬化患者PHG、GML及消化性潰瘍的發(fā)生有

7、關(guān)2。El-Newihi等3研究也發(fā)現(xiàn)，肝硬化PHG患者胃粘膜cNOS/iNOS活性明顯高于無肝病對(duì)照者，并且血清NO?-?2/NO?-?3水平也明顯增高；提示NO在肝硬化PHG、GML中具有重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)：肝硬化患者胃粘膜上皮細(xì)胞、腺細(xì)胞、血管均有iNOS陽性表達(dá)；PHG與HPU患者胃粘膜血管iNOS表達(dá)明顯增加。因此認(rèn)為，肝硬化患者胃粘膜血管iNOS過度表達(dá)導(dǎo)致局部NO合成增加，NO引起局部血管擴(kuò)張與PHG及HPU發(fā)生有密切關(guān)系，與Ohta2的觀點(diǎn)基本一致。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)：HPU患者胃粘膜血管iNOS表達(dá)較非HPU患者增加，但胃粘膜上皮細(xì)胞、腺細(xì)胞iNOS表達(dá)無明顯差異，提示HPU發(fā)生機(jī)

8、制可能不同于普通消化性潰瘍；肝硬化患者胃粘膜上皮細(xì)胞iNOS表達(dá)降低，導(dǎo)致局部NO合成減少，可能與胃粘膜上皮細(xì)胞對(duì)其它損傷因素防御功能減弱有關(guān)2，提示NO在肝硬化GML中具有粘膜保護(hù)與細(xì)胞損傷雙重作用。本研究還發(fā)現(xiàn)：肝硬化Child C級(jí)患者胃粘膜血管iNOS表達(dá)明顯增加，但胃粘膜上皮細(xì)胞、腺細(xì)胞iNOS表達(dá)減少與Child分級(jí)無明顯關(guān)系。因此認(rèn)為，肝臟嚴(yán)重病變是胃粘膜血管iNOS表達(dá)增加的始動(dòng)因素，與肝硬化患者胃粘膜病變的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系；NO可能僅在組織、細(xì)胞局部發(fā)生重要的病理生理作用。作者單位：100054北京佑安醫(yī)院(丁惠國(guó)，金瑞，胡中杰)；首都醫(yī)科大學(xué)(尚宏偉，王興翠)參考文獻(xiàn)1

9、. Sarin SK. Diagnostic issues: portal hypertensive gastropathy and gastric varices. In: Franchis RD. Portal hypertension . Blackwell Science Ltd, 1996, 30-39.2. Ohta M, Tanoue K, Tarnawski A, et al. Overexpressed nitric oxide synthase in portal hypertensive stomach of rats: A key to increase susceptibility to damage? Gastroenterology, 1997, 112:1920-1930.3. El-Newihi HW, Kanji VK, Mihas A