風疹病毒IgM抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

1、風疹病毒IgM抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）【產(chǎn)品名稱】風疹病毒IgM抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）。【用途】利用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）定性檢測人血清或血漿中的風疹病毒（RV）IgM抗體，適用于人類風疹病毒感染的輔助診斷。【試驗原理】本試劑盒采用捕獲法原理檢測人血清或血漿樣品中風疹病毒IgM抗體（RV-IgM），微孔中預包被鼠抗人-IgM（U-鏈），首先加入待測標本的血清或血漿樣品后，樣品中的IgM抗體都可被捕獲，為結合的其他成分（包括特異的IgG抗體）請被洗滌除去，第二步，加入RV抗原酶標記物，被捕獲的IgM中的RV-IgM會與來更過氧化物酶標記的RV重組抗原特異性的結合，洗去其它未結合物

2、，做好用TMB底物顯色。通過酶標儀檢測吸光度（A值）從而判定樣品中的RV-IgM抗體的存在與否。【主要組成成分】1抗人-IgM（U-鏈）包被板 1塊（48孔/96孔），4×12/8×12孔板，微孔條 可以拆開使用。包被板由板條和板架組成，與含有干燥劑的鋁箔袋密封。未使用完的微孔條與干燥劑一起放在塑料袋中放置于2-8保存，包被板放置與自封袋保存后，減少開封次數(shù)，不良的保存條件將縮短穩(wěn)定期。2 RV-IgM陽性對照 1支（0.5ml），主要成分為蛋白緩沖稀釋液稀釋的RV-IgM抗體，含穩(wěn)定劑、防腐劑。3 RV-IgM陽性對照 1支（0.5ml），主要成分為蛋白緩沖稀釋液稀釋的正

3、常人血清，檢測無RV-IgM抗體反應，含穩(wěn)定劑、防腐劑。4 酶標工作液 1瓶（3ml/6ml），主要成分為辣根過氧化物酶標記的RV重組抗原，含穩(wěn)定劑。5 濃縮洗滌液（20×） 1瓶（20ml/50ml），為無色液體，成分為磷酸緩沖液和吐溫20。用前用蒸餾水或去離子水按照1:20的比例稀釋。6 底物液A 1瓶（3ml/6ml），為無色液體，主要成分為過氧化物。7 底物液B 1瓶（3ml/6ml），為無色液體，主要成分為TMB。8 終止液 1瓶（3ml/6ml），為無色液體，主要成分為2M H2SO4。9 自封袋 1個將微孔板裝入自封袋，封緊袋口。10 封板膜 3張在溫育時防止水份蒸發(fā)和

4、污染。【使用儀器及所需材料】1. 蒸餾水或去離子水2. 一次性手套和定時器3. 吸水紙4. 25ml、100ml、1000ml可度量筒5. 酶免自動儀器或者手持單道/多道移液器6. 適用于盛放污物的容器7. 溫箱或水浴箱8. 手用于混合微孔內液體的震蕩器9. 全自動、半自動或手工洗板系統(tǒng)10. 酶標儀，單波長450nm或雙波長450nm和630nm【樣本要求】1. 血清和血漿都可以用來檢測，新鮮采集的標本應先充分離心，然后去澄清的液體進行檢測，如果未充分沉淀，懸浮的纖維蛋白可能引起假陽性。2. 標本含有EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉等抗凝劑時，不影響結果，但是高血脂、高溶血或高蛋白血標本可能導致錯

5、誤結果。3. 不要使用熱滅活后的標本，加熱滅活可是樣本中IgM抗體降解。4. 標本儲存在2-8，一周內不需要檢測的標本應儲存在-20一下，避免反復凍融?！驹囼灧椒ā?. 取出試劑盒置室溫平衡30分鐘。將20×洗滌液用蒸餾水做20倍稀釋。2. 加樣品：取50ul待測血清液加入反應板孔內，同時預留陰、陽性及空白對照共5孔。3. 加入陰性對照3孔，陽性對照1孔，各50ul對照血清，空白對照1孔位置。將反應板輕輕震蕩是樣品混勻。4. 溫育:用封板膜封板后，置37溫箱或水浴中反應30分鐘。5. 洗板：溫育后，將封板膜揭掉，吸干孔內液體，用洗滌液洗板5次，每次浸泡30秒。6. 加酶標工作液：每孔

6、加入50ul酶標工作液，空白孔除外。7. 溫育：用封板膜封板后，置37溫箱或水浴中反應30分鐘。8. 洗板：溫育后，將封板膜揭掉，吸干孔內液體，用洗滌液洗板5次，每次浸泡30秒。9. 顯色：每孔加入底物A、B液50ul，輕輕震蕩混勻，用封板膜封板后，置37溫箱或水浴浸泡30分鐘。10. 終止：每孔加入終止液50ul，輕輕震蕩混勻。11. 測定：設定酶標儀波長于450nm（建議雙波長450/630nm檢測），測定各孔A450值。注意：終止液反應30分鐘內度數(shù)。12. 當使用單波長時，校準空白孔，設定酶標儀波長于450nm，測定各孔A450值，當使用雙波長450/630nm檢測時，可以不設空白孔，

7、直接測定各孔A值?！窘Y果判斷】1. 每個試劑結果獨立使用，通過（Cut off）值判定結果。2. 計算臨界值：Cut off（C.0）=1.10+陰性對照平均（NC）A450值（當陰性平均A450值小于0.05時，按0.05計算；當陰性平均A450值大于或等于0.05時按實際值計算）。3. 質量控制：3.1空白孔（只加顯色劑和終止液）的吸光度值應不大于0.08。3.2陽性對照（PC）A450值大于0.30。3.3陰性對照平均值A450值小于0.08；如果指控結果合格，實驗結果有效。4.結果判定：陰性結果：標本吸光度值小于臨界值為陰性；陽性結果：標本吸光度值大于等于臨界值為陽性?！緦嶒灲Y果的解釋】陰性結果代表標本中未檢測出RV-IgM抗體，陽性結果代表標本中檢測出RV-IgM抗體，RV-IgM抗體陽性是新近原發(fā)性風疹感染的重要指標。【實驗方法的局限】1. 所有高敏感性的免疫實驗系統(tǒng)，都潛在有非特異性反應，因此不可接受的陽性結果可能是由于ELISA方法的生物學假陽性造成。2. 任何陽性結果均需與臨床信息聯(lián)系來判斷?！局饕马棥?. 任何血清都應作為具有傳染性樣品對待。2.