培養(yǎng)基促生長實驗操作

1、大腸埃希菌 Escherichia coliATCC 8739制訂培養(yǎng)基靈敏度實驗操作，是為了規(guī)范、統(tǒng)一培養(yǎng)基靈敏度檢測，確保微生物檢測 準確、安全進行。范圍適用于所有配制好并滅菌的培養(yǎng)基。編寫依據(jù)EP6.5術(shù)語職責QC衛(wèi)檢組人員負責培養(yǎng)基的配制、滅菌、靈敏度實驗。內(nèi)容6.1 使用的設(shè)備、器具生物安全柜、無菌培養(yǎng)皿、無菌刻度吸管或無菌注射器、無菌玻璃涂布器、酒精燈等6.2 使用的菌株EP檢測用ATCC的菌株:金黃色葡萄球菌 Staphylococcus aureus ATCC 6538銅綠假單胞菌 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027枯草芽孢桿菌 Bacilllus

2、 subtilis ATCC 6633沙門氏菌 Salmonella enterica subsp ATCC 14028白色念珠菌 Candida albicansATCC 10231黑曲霉 Aspergillus nigerATCC 16404培養(yǎng)基靈敏度檢測所用的菌株傳代次數(shù)不得超過 5代, 并采用適宜的菌種保藏技術(shù)， 以保證試驗用菌株的生物學特性。6.3 檢測頻率每批配制、滅菌后的培養(yǎng)基均應(yīng)做靈敏度測試。6.4 操作方法6.4.1 對照標準培養(yǎng)基用已經(jīng)過實驗證明合格的培養(yǎng)基或購買的有質(zhì)量證書的成品平皿培養(yǎng)基作為對照標準 培養(yǎng)基.6.4.2 實驗培養(yǎng)基將瓊脂類的實驗培養(yǎng)基加熱融化后，冷卻至

3、45 C左右，以無困的方式在無困培養(yǎng)皿中注入1520ml，備用。液體類的培養(yǎng)基直接使用。6.4.3 菌懸液的制備6.4.3.1 細菌菌懸液的制備方法一：取細菌的斜面培養(yǎng)物1耳匙接種在酪蛋白大豆消化肉湯培養(yǎng)基中 3035C培養(yǎng)1824h，取上述培養(yǎng)物用無菌水按10倍系列稀釋，分別制成10-710-8的菌懸液備用。6.4.3.2 霉菌菌懸液的制備取白色念珠菌的斜面培養(yǎng)物1耳匙接種在沙氏瓊脂斜面上于 2025C培養(yǎng)2448h,加入無菌水 4ml 制成原液，取上述原液按 10倍系列稀釋，分別制成 10-610-7的菌懸液備用。取黑曲霉的斜面培養(yǎng)物加入無菌水 4ml制成抱子懸液，取上述抱子懸液按10倍系

4、列稀釋，分別制成 10-610-7的菌懸液備用。方法二：直接用杭州微球生物技術(shù)有限公司的產(chǎn)品 -培養(yǎng)基靈敏度指示劑， 該產(chǎn)品已經(jīng)10100CFU試驗0.1 0.5ml 的菌幫我們精確控制了細菌數(shù)量，只要直接拿稀釋液稀釋下就可以直接取到 菌。使用方便，數(shù)量精確。推薦用此方法操作。6.4.4 培養(yǎng)基的生長促進實驗6.4.4.1 瓊脂類培養(yǎng)基的生長促進實驗每株菌用 2 個實驗培養(yǎng)基平皿，用表面涂布法在每個平皿表面接種 懸液（約10100CFU式驗菌），同時用2個對照標準的培養(yǎng)基平皿做對照，接種相同量的 菌懸液試驗， 在規(guī)定溫度下培養(yǎng) , 取出平皿點計菌落數(shù)。 實驗培養(yǎng)基上的微生物數(shù)量應(yīng)為對 照培養(yǎng)基

5、上微生物生長數(shù)量的 70%-150%范圍內(nèi)。（注：每種培養(yǎng)基生長促進實驗的具體菌株見附錄 1 ）6.4.4.2 液體類培養(yǎng)基的生長促進實驗每株菌用2管（或瓶）實驗培養(yǎng)基，接種 0.10.5ml的菌懸液（約10100CFU式驗菌），同時用 2個對照標準的培養(yǎng)基或用已知合格的酪蛋白大豆消化瓊脂平皿做對照，接種 相同量的菌懸液試驗，在規(guī)定溫度下培養(yǎng) , 對比或計數(shù)，在規(guī)定時間內(nèi)能生長菌落為合格。6.4.5 培養(yǎng)基的生長促進和抑制特性試驗6.4.5.1 液體培養(yǎng)基的生長促進特性試驗接種0.10.5ml的菌懸液（約10100CFU式驗菌）于一定量適合的培養(yǎng)基。在特定 溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過試驗中規(guī)定

6、的最短期限。與對照標準的培養(yǎng)基獲得的微生物 生長相比，接種微生物的生長應(yīng)明顯。6.4.5.2 固體培養(yǎng)基的生長促進特性試驗采用表面涂布法，在每一塊平皿上接種0.10.5ml的菌懸液（約10100CFU式驗菌） 適宜微生物。在特定溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不長于試驗中規(guī)定的最短期限。接種微生物的 生長與對照標準的培養(yǎng)基獲得的微生物生長相當。6.4.5.3 液體或固體培養(yǎng)基的抑制特性試驗用適當培養(yǎng)基接種至少100 CFU適宜微生物。在特定溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間至少為試驗中規(guī)定的最長期限。無受試微生物生長。注：每種培養(yǎng)基生長促進和抑制特性試驗的具體菌株見附錄 1） 7 附錄附錄 1 培養(yǎng)基生長促進和抑制特性

7、表 附錄 1：培養(yǎng)基的生長促進、抑制特性表培養(yǎng)基特性受試菌株培養(yǎng)時間培養(yǎng)溫度酪蛋白大豆消化瓊脂生長促進金黃色葡萄球菌 3天30-35 C銅綠假單胞菌 3天30-35 C枯草芽抱桿菌 3天30-35 C白色念珠菌 5天30-35 C黑曲霉 5天30-35 C酪蛋白大豆消化肉湯生長促進金黃色葡萄球菌 3天30-35 C銅綠假單胞菌 3天30-35 C枯草芽抱桿菌 3天30-35 C沙氏匍萄糖瓊脂生長促進白色念珠菌 5天20-25 C黑曲霉 5天20-25 CR2A生長促進金黃色葡萄球菌 3天30-35 C銅綠假單胞菌 3天30-35 C枯草芽抱桿菌 3天30-35 C大腸埃希菌 3天30-35 C麥康凱肉湯生長促進大腸埃希菌 3天42-44 C抑制金黃色葡萄球菌 3天42-44 C麥康凱瓊脂生長促進大腸埃希菌 3天30-35 C氯化鎂孔雀綠沙門氏菌增菌液生長促進沙門氏菌 3天30-3