維生素B1的含量測定講義-分析大課堂

1、維生素B1的含量測定一、實(shí)訓(xùn)目的1. 掌握差示分光光度法的原理和方法2. 掌握差示分光光度法計(jì)算含量的方法3. 掌握紫外分光光度計(jì)的使用二、實(shí)訓(xùn)原理差示分光光度法（簡稱A法），它保留了通常的分光光度法簡便、快捷、直接讀數(shù)的優(yōu)點(diǎn)，又無需事先分離，并能消除干擾。差示分光光度法指取兩份相等的供試液，分別制成兩種不同的化學(xué)環(huán)境（如在其一中加酸或堿，改變pH或在其一中加能與供試品發(fā)生某種化學(xué)反應(yīng)的試劑），然后將它們稀釋至同樣濃度后，分置于樣品池和參比池中，于適當(dāng)波長處，測定吸光度的差值（A）。差示分光光度法適用條件：供試品在不同的化學(xué)環(huán)境中以不同的分子形式存在，它們的吸收光譜有顯著的差異；干擾物的吸收不

2、受測定時(shí)化學(xué)環(huán)境的影響，光譜行為不變。 定量依據(jù)：設(shè)x、y分別代表在兩種不同的化學(xué)環(huán)境中供試品的存在形式，它們在測定波長處的吸光度以Ax 、Ay表示，背景和干擾的吸收度以AZ表示，AZ不受測定時(shí)化學(xué)環(huán)境改變的影響。根據(jù)吸光度加和性原則： 即在供試液的一定濃度范圍內(nèi)A值與其濃度C呈線性關(guān)系，并消除了AZ的干擾，可用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或?qū)φ辗ǘ?。維生素B1分子中具有共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，在紫外區(qū)有吸收，其紫外吸收隨溶液pH的變化而變化。在pH7的磷酸鹽緩沖液中具有兩個(gè)吸收峰，在232233nm處，=255；另一處在266nm處，=255在pH2時(shí)，最大吸收在246nm處，=425，因此可用于維生素B1片的差示分

3、光光度法的測定。三、儀器及試劑1. 儀器紫外分光光度計(jì)、容量瓶、移液管等維生素B1標(biāo)準(zhǔn)品、 維生素B1片、緩沖液(pH 7.0)、鹽酸液(pH 2.0)四、測定方法1. 測定波長的選擇 精密稱取維生素B1100mg，用水溶解并稀釋成100ml，精密量取2ml二份，分別用緩沖液(pH 7.0)和鹽酸液(pH 2.0)稀釋成100ml，以相應(yīng)溶劑為空白，測定紫外吸收光譜。再將前者放于參比池，后者放于樣品池，繪制差示吸收光譜。差示光譜圖表明在247nm處有最大差示吸收值(A)，確定247nm為測定波長。 2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密稱取干燥至恒重的維生素B1100mg，置100ml量瓶中， 用水溶解并稀

4、釋至刻度,搖勻，作為貯備液。精密量取1.0、1.5、 2.0、2.5、3.0ml貯備液各二份，分別置100ml量瓶中，一份用 緩沖液稀釋至刻度；另一份用鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。取 上述五組濃度相同，pH不同的溶液，在247nm處分別測定差 示吸收值(A)。以濃度C為橫坐標(biāo)，以差示吸收值A(chǔ)為縱坐 標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或進(jìn)行回歸，求得回歸方程和相關(guān)系數(shù)。3. 樣品測定 取本品20片，精密稱定，研細(xì)。精密稱取適量粉末(約相 當(dāng)于維生素B1 50mg)，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻 度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2ml二份，分 別置100ml量瓶中，分別用緩沖液和鹽酸液稀釋至刻度，搖勻。 將前者置參比池中，后者置樣品池中，在247nm波長處測定差 示吸收值。由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得維生素B1，濃度，計(jì)算維生素B1片的 標(biāo)示量。4. 計(jì)算方法本品含維生素B1 (C12H17ClN4OS·HCl)應(yīng)為標(biāo)示量的90.0110.0。五、注意事項(xiàng)1.由于儀器波長可能存在差