p57KIP2、cyclin D1和cyclin E在宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義

1、p57KIP2、cyclin D1和cyclin E在宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義              作者：周正平，肖慶邦，冉豐豐，王進(jìn)京，鄭洪【摘要】  目的探討p57KIP2、cyclin D1及cyclin E蛋白在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法用免疫組織化學(xué)SP法檢測100例宮頸鱗癌、60例宮頸上皮內(nèi)瘤變和30例正常宮頸鱗狀上皮組織中p57KIP2、cyclin D1和cyclin E蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果cyclin D1、cyclin E蛋白在宮頸SCC

2、與NE、CIN與NE組織中陽性表達(dá)率之間比較、cyclin E蛋白在宮頸SCC與CIN組織中陽性表達(dá)率之間比較，差異均有顯著性(P0.01)； cyclin D1與cyclin E之間的表達(dá)呈正相關(guān)(P0.01)；三者表達(dá)均與組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、患者年齡無關(guān)(P0.05)。結(jié)論p57KIP2、cyclin D1及cyclin E蛋白共同參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。cyclin D1和cyclin E蛋白高表達(dá)可能是宮頸組織惡變的重要生物學(xué)標(biāo)志，cyclin E異常表達(dá)是宮頸癌發(fā)生的早期事件。 【關(guān)鍵詞】  宮頸癌；免疫組織化學(xué)；p57KIP2；cyclin D1；cyclin E&#

3、160;  1資料與方法   1.1標(biāo)本來源收集遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科1999年1月2004年1月的宮頸活檢或者手術(shù)確認(rèn)的宮頸SCC標(biāo)本100例(I級27例、II級48例、III級25例)，CIN60例(I級20例、II級20例、III級20例)。病人術(shù)前均未行放、化等治療。檢出伴盆腔淋巴結(jié)腫大41例，其中伴盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12例(每例平均檢出淋巴結(jié)4.33枚)；患者年齡2075歲，中位年齡45歲。隨機(jī)選取30例正常宮頸鱗狀上皮(Normal cervical squamous epithelium,NE)（均選自因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)的宮頸上皮組織）作為試驗對照

4、組。   1.2試劑兔抗人p57KIP2多克隆抗體、鼠抗人cyclin D1單克隆抗體(DCS/6)、鼠抗人cyclin E單克隆抗體(13A3)，與SP試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。3種抗體的工作濃度分別為175、1100、150。   1.3方法將存檔的10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋，4m厚連續(xù)切片，行HE染色和SP免疫組化染色。嚴(yán)格按照說明書操作步驟進(jìn)行，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。用邁新生物技術(shù)有限公司提供的陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作空白對照。組織抗原均采用高壓修復(fù)處理。   1.

5、4結(jié)果判斷p57KIP2、cyclin D1及cyclin E蛋白陽性信號呈棕黃色或棕褐色，均主要定位于細(xì)胞核，見圖13。每張切片隨機(jī)選取有腫瘤組織的不同高倍視野(×400)，計數(shù)2000個腫瘤細(xì)胞，根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)占所計數(shù)腫瘤細(xì)胞的百分率分為：(1)陰性()：陽性細(xì)胞數(shù)5%；(2)弱陽性(+)：陽性細(xì)胞數(shù)為5%24%；(3)陽性(+)：陽性細(xì)胞數(shù)為25%49%；(4)強(qiáng)陽性(+)：陽性細(xì)胞數(shù)50%。   1.5統(tǒng)計學(xué)處理所得數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，應(yīng)用2檢驗、Fisher確切概率法及配對四格表進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。   2結(jié)果 &

6、#160; 2.1p57KIP2、cyclin D1及cyclin E在宮頸SCC、CIN、NE中的表達(dá)cyclin D1、cyclin E蛋白在宮頸SCC與在NE中陽性表達(dá)率之間比較、在CIN與在NE中陽性表達(dá)率之間比較、以及cyclin E蛋白在宮頸SCC與在CIN中陽性表達(dá)率之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；p57KIP2蛋白在宮頸SCC與在CIN、NE中陽性表達(dá)率之間比較、以及在CIN、NE組織中陽性表達(dá)率之間比較、cyclin D1在宮頸SCC與在CIN中陽性率比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，見表1。   2.2p57KIP2、cyclin D1及

7、cyclin E蛋白在宮頸SCC中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系在宮頸SCC組織中，隨著組織學(xué)分級的增加，p57KIP2蛋白的陽性表達(dá)率逐漸降低，cyclin D1蛋白陽性表達(dá)率在組織學(xué)級組高于組織學(xué)、級組， cyclin E蛋白的陽性表達(dá)率在組織學(xué)級組高于組織學(xué)、級組，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；在盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組，p57KIP2蛋白的陽性表達(dá)率低于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組，cyclin D1、cyclin E蛋白陽性表達(dá)率均明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；p57KIP2、cyclin D1、cyclin E蛋白的表達(dá)均與患者年齡無關(guān)(P0.05)，見表2。&#

8、160;  2.3p57KIP2、 cyclin D1和cyclin E蛋白在宮頸鱗癌組織中表達(dá)的相互關(guān)系根據(jù)配對四格表分析， p57KIP2與cyclin D1之間、 p57KIP2與cyclin E之間的陽性表達(dá)均無相關(guān)性(2=0.958、 2=0.928， P表1p57KIP2、cyclin D1、cyclin E蛋白在宮頸SCC、CIN、NE中的表達(dá)組織學(xué)            3討論在哺乳動物細(xì)胞中，細(xì)胞的正常增殖受到嚴(yán)格的調(diào)控。一旦細(xì)胞周期調(diào)控失常，就會導(dǎo)致腫瘤的惡性增生1

9、。p57KIP2是1995年由Shuhei等用雙雜交系統(tǒng)克隆出來，定位于人染色體11p15.5，編碼316個氨基酸殘基的多肽，分子量為57KD的蛋白質(zhì)，屬于CKIs，負(fù)向調(diào)控G1期和S期細(xì)胞周期進(jìn)程，是一種腫瘤抑制基因。在許多人類惡性腫瘤存在著染色體11p15.5等位基因高頻的雜合性丟失(LOH)3,4。Yasuhiro等研究90例肝細(xì)胞肝癌和66例肝良性病變，周正平等研究64例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌，均發(fā)現(xiàn)p57KIP2蛋白在惡性腫瘤組織中的表達(dá)明顯低于良性病變，尤其在病程進(jìn)展期、低分化組織、伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高的增殖指數(shù)以及cyclin D1、cyclin E蛋白過表達(dá)的癌組織中低表達(dá)。本研究結(jié)果顯

10、示，在宮頸CIN及NE中，p57KIP2蛋白的陽性表達(dá)率均高于在SCC中的陽性表達(dá)率；SCC組織分化差的病例中陽性表達(dá)率低于分化好者；盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組陽性表達(dá)率低于陰性組；高齡組患者陽性表達(dá)率高于年齡較小組，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。提示p57KIP2蛋白在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著一定的作用。p57KIP2蛋白過表達(dá)對宮頸上皮細(xì)胞的異常增殖可能有一定阻抑作用，其低表達(dá)則可能解除其抑制細(xì)胞生長的作用，導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖，甚至發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。cyclin D1定位于人染色體11q13，編碼由295個氨基酸構(gòu)成、分子量為34 KD的蛋白質(zhì)。cyclin E是1991年由Andrew等發(fā)

11、現(xiàn)的，定位于人染色體19q1219q13，編碼分子量為50 KD的蛋白質(zhì)。一些研究顯示，cyclin D1基因蛋白的過表達(dá)與惡性腫瘤的預(yù)后不良有關(guān)，cyclin E基因蛋白過表達(dá)與胰腺癌的發(fā)生、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)10。本研究顯示，在NE中，cyclin D1與cyclin E蛋白均呈低表達(dá)，在CIN中的陽性表達(dá)率逐漸增高，在SCC中明顯增高(P0.01)，cyclinD1與cyclin E蛋白的陽性表達(dá)之間呈正相關(guān)(P0.01)。在SCC中，cyclin D1蛋白陽性表達(dá)率在組織學(xué)級組高于組織學(xué)、級組，cyclin E蛋白的陽性表達(dá)率在組織學(xué)級組高于組織學(xué)、級組，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)

12、；cyclin D1、cyclin E蛋白的陽性表達(dá)率均與盆腔淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、患者年齡無關(guān)(P0.05)。提示cyclin E蛋白的異常表達(dá)是宮頸癌發(fā)生的早期事件，cyclinD1與cyclin E蛋白的異常表達(dá)可能協(xié)同促使宮頸上皮細(xì)胞過度增生，最后發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。因此，cyclinD1與cyclin E蛋白可以作為評估宮頸上皮組織發(fā)生惡性轉(zhuǎn)變的生物學(xué)指標(biāo)。本研究結(jié)果提示，p57KIP2蛋白低表達(dá)、cyclin  D1和（或）cyclin E蛋白高表達(dá)，可能導(dǎo)致宮頸上皮細(xì)胞增殖周期調(diào)控失常，從而使細(xì)胞發(fā)生無限制增殖及異常分裂，最后導(dǎo)致宮頸上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，甚至發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移?！緟⒖嘉墨I(xiàn)

13、】  1Charles J, Sherr. The Pezcoller Lecture: Cancer Cell Cycles RevisitedJ. Cancer Research,2000,60（14）:36893695.Shuhei Matsuoka,Michael C Edwards,Chunyan Bai,et al. p57KIP2, a structurally distinct member of the p21CIP1 Cdk inhibitor family,is a candidate tumor suppressor geneJ.Genes Dev,1995,

14、9（6）:650662.Pumin Zhang,Nanette J Liegeois,Calvin Wong,et al. Altered cell differentiation and proliferation in mice lacking p57KIP2 indicates a role in BeckwithWiedemenn syndromeJ. Nature,1997,387（6629）:151158.Tarlochan Nijjar,Don Wigington,James C Garbe Garbe,et al. p57KIP2 Expression and Loss of

15、Heterozygosity during Immortal Conversion of Cultured Human Mammary Epithelial CellsJ.Cancer Research,1999,59（20）:51125118.Yasuhiro Ito, Tsutomu Takeda,Masato Sakon,et al.Expression of p57KIP2 protein in hepatocellular carcinomaJ.Oncology,2001,61(3):221225.周正平,王進(jìn)京,肖慶邦,等.乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中cyclin D1、p57KIP2的表達(dá)

16、及意義J.腫瘤防治研究,2005,32(8):476478.Toru Motokura,Theodora Bloom,Hyung Goo Kim,et al.A novel cyclin encoded by a bcl1linked candidate oncogeneJ.Nature,1991,350（6318）:512515.Andrew Koff,Fred Cross,Alfred Fish,et al.Human cyclin E,a new cyclin that interacts with two members of the CDC2 gene familyJ. Cell,1991,66（6）:12171228.Robert L Sutherland,Elizabeth A Musgrove.cyclin D1 and mammary carcinoma:new insights from transgenic mouse modelsJ