抗凋亡基因Bcl

1、抗凋亡基因 Bcl-2 在皮膚良惡性腫瘤中 的表達(dá) 病學(xué)萬力 高順強(qiáng)摘要：為探討 Bcl-2 蛋白與皮膚腫瘤的關(guān)系，作者用流式細(xì)胞免疫熒光技術(shù)， 檢測(cè)了 33 例皮膚良惡性病變。結(jié)果顯示： Bcl-2 蛋白的相對(duì)含量 FI(fluorescenceindex) 在惡性腫瘤中的表達(dá)明顯高于良性腫瘤，PvO.001。提示細(xì)胞凋亡抑止作用在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中也起著 重要的作用，同時(shí)研究下調(diào) Bcl-2 的機(jī)制，可能成為 Bcl- 蛋白過度表達(dá)腫瘤治 療的一種途徑。關(guān)鍵詞：腫瘤，皮膚； Bcl0-2 蛋白；鱗癌中圖分類號(hào)：R739.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：100 0 4963(2000)04Expr

2、ession of apoptosis-suppressing protein Bcl-2 in the benign and malignant skin tumorsWAN Li, GAO Shun qiang(Department of Dermatology, The 4th Hospital, Hebei Medical University, Shijiazhuang ， 050011)Abstract:In order to explore the relation ship between Bcl-2 protein and the skin tumors, authors a

3、nalysed 33 cases of various skin tumors with immunofluorescence staining technique and flow cytometry. The results showed that the fluorescence indices(FI) representing the relative content of Bcl-2 protein in malignant skin tumors were all higher than those in benign ones, P< 0.001.This suggeste

4、d that the Bcl-2 was very likely play an important role in the develoment and progress of the skin malignant tumors. We studed further the mechanism of reducing the expression protein of Bcl-2, may be become a treatment method to the tumors with over expressed Bcl-2 protein.Key words: Tumors, skin;

5、Bcl-2protein, SCC近年來，關(guān)于腫瘤發(fā)生機(jī)制的研究表明，多數(shù)腫瘤均有癌基因的異常表 達(dá)，原癌基因異常常引起細(xì)胞過度增生，但細(xì)胞凋亡受阻，在腫瘤發(fā)生中也起 著重要作用1。Bel 2 基因(B cell lymphoma/leukemia 2 gene) 的表達(dá)產(chǎn) 物為 Bcl 2 基因蛋白，可抑制細(xì)胞凋亡。已發(fā)現(xiàn)不少腫瘤有該蛋白的過度表 達(dá)，如 B 細(xì)胞淋巴瘤、基底細(xì)胞癌等 2,3 。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞免疫熒光技術(shù) 對(duì) 33 例皮膚良惡性病變細(xì)胞中的 Bcl 2 蛋白相對(duì)含量進(jìn)行了定量分析，以探 討該蛋白與皮膚良惡性腫瘤的關(guān)系。1 材料和方法1.1 標(biāo)本來源：采用我院1989年19

6、97年活檢及手術(shù)切除標(biāo)本的石蠟包埋組 織塊，其中鱗狀細(xì)胞癌(SCC)10例，角化棘皮瘤(KA)10例，脂溢性角化病 (SK)10例，另設(shè)3例正常皮膚組織為對(duì)照，共計(jì) 33例。所有病例均由有經(jīng)驗(yàn) 的病理醫(yī)師做出診斷。1.2 細(xì)胞DNA含量檢測(cè)的樣品制備：每例石蠟組織塊切取 40卩m左右厚度切片 35片分別放入試管內(nèi)，依次脫蠟、水化、以搓網(wǎng)法制取單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì) 胞數(shù)為1X 106/mL后，用溴化乙啶對(duì)DNA染色，置4C冰箱30min后上機(jī)測(cè)定4。1.3 Bel 2蛋白免疫熒光染色樣品的制備：對(duì) 1X 106/mL的單細(xì)胞懸液進(jìn)行 間接免疫熒光標(biāo)記，一抗應(yīng)用1 : 100倍的鼠抗人Bcl 2蛋白

7、單克隆抗體(美國(guó) Santa Cruz公司)，二抗應(yīng)用1 : 100倍的羊抗鼠FITC IgG。上機(jī)測(cè)定時(shí)，除 設(shè)正常皮膚對(duì)照外，還設(shè)有 PBS陰性對(duì)照，1 : 100倍的FITC IgG及Bcl 2 單抗陽性對(duì)照。操作過程詳 見文獻(xiàn)5 。1.4 流式細(xì)胞檢測(cè)方法：使用FACS42C型(美國(guó)BD公司產(chǎn)品)流式 細(xì)胞儀進(jìn)行 測(cè)定，方法詳見文獻(xiàn) 5 。1.5 測(cè)量資料的分析方法：DNA含量以DI值(DNA Index，DI)作為判定細(xì)胞核 DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)，DI=樣品細(xì)胞的G0/G1峰均道值/正常皮膚組織細(xì)胞 G0/G1峰 均道值。DI=1.0 ± 2CV為二倍體腫瘤，DI工1.0 &#

8、177; 2CV為異倍體腫瘤。Bcl 2基 因蛋白表達(dá)的定量分析按照 Morkve 等6 提出的熒光指數(shù) (fluore scenceindex,FI)表示，計(jì)算公式為：FI=(腫瘤細(xì)胞Bcl 2表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度對(duì) 照樣品的平均熒光強(qiáng)度”正常皮膚組織細(xì)胞Bcl 2表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度。1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法：采用 t 檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2 結(jié)果脂溢性角化病(SK)，角化棘皮瘤(KA)，鱗狀細(xì)胞癌(SCC)及正常皮膚組織對(duì) 照的DI值、FI值及顯著性檢驗(yàn)見表1, 2。表1 各種瘤細(xì)胞DI、Bcl 2的FI值(土 s)組織類型例數(shù) DI FII SK 10 0.993 ± 0.069

9、1.042 ± 0.103n KA 10 0.973 ± 0.034 1.063 ± 0.086 川 SCC 10 1.251 ± 0.158 1.451 ± 0.118IV 對(duì)照 3 1.003 ± 0.012 0.957 ± 0.000表2各組DNA含量、熒光指數(shù)不同均數(shù)的顯著性檢驗(yàn)（t檢驗(yàn)）i n im iv n m n v m wDI t 值 0.727 4.167 0.483 8.732 0.724 2.417P 值 >0.4 <0.001 >0.5 <0.001 >0.4 <0

10、.05FI t 值 0.495 8.254 1.393 9.089 2.078 7.057P 值 >0.5 <0.001 >0.1 <0.001 >0.05 <0.001由上面兩表可以看出，良性腫瘤（SK, KA）及正常皮膚中DNA含量及Bel 2 蛋白相對(duì)含量均低于惡性腫瘤 （SCC）， P<0.001 或<0.05；而良性腫瘤間以及良 性腫瘤與正常皮膚間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。在各10例皮膚腫瘤中，SK無DNA異倍體，KA有2例，而SCCt 9例出現(xiàn)。3 討論腫瘤的發(fā)生被認(rèn)為是一種對(duì)細(xì)胞正常自身穩(wěn)定的破壞，結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞過度 增殖或死亡減少。隨著一些調(diào)控

11、細(xì)胞增殖的致癌基因的發(fā)現(xiàn)和研究，對(duì)腫瘤細(xì) 胞過度增殖的分子機(jī)理日益明晰，而對(duì)細(xì)胞死亡的調(diào)控仍知之較少。近年來， 有關(guān)細(xì)胞凋亡機(jī)制與腫瘤關(guān)系的研究已成為腫瘤分子生物學(xué)研究的一項(xiàng)重要內(nèi) 容。 Bel 2是目前與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切的原癌基因之一，參與了細(xì)胞凋亡的調(diào) 控，其編碼蛋白能抑制細(xì)胞發(fā)生凋亡，并能在生長(zhǎng)因子缺乏時(shí)延長(zhǎng)細(xì)胞存活時(shí) 間1 。人的 Bel2 基因通常位于 18號(hào)染色體 q21.3 著絲點(diǎn)方向的端粒上，由 3 個(gè)外顯子和兩個(gè)潛在的啟動(dòng)子組成。它是一種跨膜蛋白，位于線粒體內(nèi)膜、 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核膜上，含有239個(gè)氨基酸。Bel 2參與14/18染色體易位，易位后 的Bel 2基因表達(dá)增強(qiáng)，Bel

12、 2編碼的蛋白為Bel 2蛋白，可保護(hù)細(xì)胞防止 凋亡的發(fā)生。它能促進(jìn)細(xì)胞增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。Nakagawa等7用免疫組化法研究了幾種表皮角質(zhì)形成細(xì)胞良性及惡性增生疾病，發(fā)現(xiàn)基底細(xì)胞癌和鱗 狀細(xì)胞癌 Bel 2蛋白陽性表達(dá)率分別為 67和 100，光線性角化病的 Bel 2 蛋白陽性表達(dá)率為 25，而且為弱陽性表達(dá)，其余良性增生均為陰性表達(dá)。 本研究支持上述觀點(diǎn)。而國(guó)外學(xué)者8,9認(rèn)為Bel 2在SCC中表達(dá)率很低甚至 幾乎不表達(dá)，這可能與檢測(cè)方法及 標(biāo)本的不同處理有關(guān)。本研究結(jié)果表明：鱗狀細(xì)胞癌的 FI 值與脂溢性角化病、角化棘皮瘤及正常 皮膚的FI值具有非常顯著性差異（PV0.001），而

13、良性增生（SK、KA及正常皮膚） 間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.1或P>0.5） o Bel 2蛋白在鱗狀細(xì)胞癌中過度表達(dá)表明 SCC中存在腫瘤細(xì)胞凋亡抑制機(jī)制，這使得腫瘤細(xì)胞因壽命延長(zhǎng)而過度積聚， 使腫瘤組織不斷發(fā)展、擴(kuò)大。同時(shí)也說明腫瘤的發(fā)生機(jī)制，不僅有細(xì)胞過度增 生所起的作用，細(xì)胞凋亡受阻同樣也起者重要的作用。因此研究下調(diào)Bel 2的機(jī)制，可能成為Bel 2蛋白過度表達(dá)腫瘤 治療的一種途徑。萬力（河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院皮膚科，河北石家莊 050011） 高順強(qiáng) （河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院皮膚科，河北石家莊 050011）參考文獻(xiàn)：1 金順錢. 程序性細(xì)胞死亡和腫瘤發(fā)生 J. 國(guó)外醫(yī)學(xué)腫瘤

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