乳與乳制品非常規(guī)理化指標(biāo)檢驗(yàn)磷的檢測(cè)

1、乳與乳制品非常規(guī)理化指標(biāo)檢驗(yàn)磷的檢測(cè)YLNB 5.61. 依據(jù):GB/T5413.22 19972. 原理樣品經(jīng)濕法消化后定容，在硝酸溶液中，磷與釩鉬酸銨 生成黃色的絡(luò)合物(P2Q.V2Q.22MoQ.3H2O),其黃色的深淺 可用比色法比色測(cè)定，其測(cè)定范圍為磷的濃度在2-20ug/ml之間。3. 試劑3.1、硝酸：優(yōu)級(jí)純。3.2、硫酸：優(yōu)級(jí)純。3.3、高氯酸：優(yōu)級(jí)純。3.4、釩鉬酸銨試劑：A 液:25g 鉬酸銨(NH4)6MoQ4.4H 2O水中,溶于 400ml 水 中。B 液:1.25g 偏釩酸銨(NH4VO)溶于300ml水中，冷卻后加 250ml濃硝酸，然后將A液緩緩傾入B液中，不斷

2、攪拌，并用水 稀釋至1L,貯存在棕色瓶中。3.5、氫氧化鈉:6mol/L3.6、二硝基酚指示劑:2g/L.稱取0.2g 2,6- 二硝基酚或 2,4二硝基酚C6fOH(NG)2 溶于100mL水中。3.7、磷的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：50ug/mL稱取0.2197g經(jīng)烘干的磷酸二氫鉀（優(yōu)級(jí)純）,溶于約400ml 水中，加25mLA濃度為12mol/L的硫酸，定容至1L,可長(zhǎng)久貯 存.3.8、氫氧化鈉：0.1mol/L（作調(diào)節(jié)顏色用）3.9、硝酸：0.1mol/L（作調(diào)節(jié)顏色用）4. 儀器4.1分光光度計(jì)4.2電熱板或可調(diào)電爐（帶石棉網(wǎng)）5. 方法5.1樣品處理，精密稱取0.5000g固體樣品或2.5g （

3、或mL）液體乳（可 根據(jù)磷的含量確定稱樣量）樣品于100mL或150mL三角瓶中， 加入幾粒玻璃珠，加10mL濃硝酸（4.1）,然后放在電熱板上加 熱反應(yīng).待劇烈反映結(jié)束后取下，冷卻，再加入5mL硝酸，5mL 硫酸（4.2 ）和5mL高氯酸（4.3），重新放置在電爐上加熱 反應(yīng)，此時(shí)應(yīng)把溫度調(diào)低些，若消化液變黑，需取下在加5mL硝酸后繼續(xù)加熱，直到消化液變成無(wú)色或淡黃色，在消化液 剩下3-5mL時(shí)取下，冷卻，定量地移入50mL容量瓶中，冷卻后用水定容至刻度，為待測(cè)液，同時(shí)作空白實(shí)驗(yàn)。5.2樣品測(cè)定；精確吸取樣液10 mL （含磷0.2-0.75mg ）加少量水，加 2滴二硝基酚指示劑（7）,用

4、氫氧化鈉（6）調(diào)至微黃色，再 分別加入lO.OOmL釩鉬酸銨試劑（混合后的 B液），冷卻， 加水待冷卻后用水定容。在 25-30 C下顯色15min。5. 3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：5.3.1 精確吸取磷的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 0, 2.5 , 7.5 , 10, 15, 20 ml分別放入50ml容量瓶中，磷的濃度分別為0,2.5, 7.5 ,10, 15, 20ug/ml（也可以將磷的濃度在曲線內(nèi)設(shè)的點(diǎn)適當(dāng)增加，如 1, 1.5 , 2, 3, 4, 12.5 , 20, 25ug/ml）5.3.2 分別加少量水后，加2滴二硝基酚指示劑，用6mol/l氫氧化鈉調(diào)至微黃色，再分別加入10.00ml釩鉬酸銨試劑

5、，定容。在25 30° C下顯色15分鐘。5.3.3 用1cm比色皿，波長(zhǎng)440nm,在分光光度計(jì)上測(cè)定吸 光值，以吸光值為縱坐標(biāo)，磷含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算回歸方程。6. 結(jié)果計(jì)算磷的含量（mg/100g）= C V A卩。m“000c:從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查的比色液的濃度，ug/ml;A:樣液的稀釋倍數(shù)；V:樣液定容體積；50 mLm:樣品的質(zhì)量，g允許差：同一樣品兩次測(cè)定值之差不超過(guò)兩次測(cè)定平均值的5%7. 注意事項(xiàng)7.1樣品處理必須采用濕法處理，可采用HNO H 2SO4-HCLO4和HNO-HCLO4,兩種方法，但都必須在通風(fēng)櫥中進(jìn) 行.7.2實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意安全。硝酸和高氯酸加入的量不能太多，測(cè)定液體樣品時(shí)要在水上蒸干