《木薯品種鑒定技術(shù)規(guī)程 SSR 分子標(biāo)記法》征求意見稿.docx

1、Q/LB.XXXXX-XXXXICS 65.020.01CCS B 05中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)XX/T XXXXXXXXX代替 XX/T木薯品種鑒定技術(shù)規(guī)程 SSR分子標(biāo)記法Protocol for identification of Cassava varieties verification SSR markers method(點(diǎn)擊此處添加與國際標(biāo)準(zhǔn)一致性程度的標(biāo)識(shí))XXXX - XX - XX發(fā)布XXXX - XX - XX實(shí)施中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布XX/T XXXXXXXXX目次前言II1 范圍12 規(guī)范性引用文件13 術(shù)語和定義14 原理15 儀器設(shè)備及試劑26 溶液配制

2、27 引物28 參照品種及其使用29 操作步驟210 等位變異數(shù)據(jù)采集411 判定方法5附錄A（規(guī)范性附錄） 主要儀器設(shè)備及試劑6附錄B（規(guī)范性附錄） 溶液配制8附錄C（規(guī)范性附錄） 核心引物11附錄D（規(guī)范性附錄） 參照品種17附錄E（資料性附錄） 核心引物分組1919前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部種業(yè)管理局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部熱帶作物及制品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)熱帶經(jīng)濟(jì)作物分技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院

3、熱帶作物品種資源研究所。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王明、肖鑫輝、葉劍秋、王琴飛、張潔、薛茂富、應(yīng)東山、張如蓮、韋卓文、高玲、劉迪發(fā)、徐麗。木薯品種鑒定技術(shù)規(guī)程 SSR分子標(biāo)記法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了利用簡單重復(fù)序列（Simple Sequence Repeats，SSR）分子標(biāo)記進(jìn)行木薯（Manihot esculenta Crantz）品種鑒定的試驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)記錄格式和判定標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于基于SSR分子標(biāo)記的木薯DNA分子數(shù)據(jù)采集和品種鑒定。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件

4、，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T 19557.1 植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測試指南 總則NY/T 3055 植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測試指南 木薯NY/T 2594 植物品種鑒定DNA分子標(biāo)記法 總則3 術(shù)語和定義NY/T 2594 界定的術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1核心引物 core primers指品種DNA鑒定中優(yōu)先選用的一套SSR引物，具有多態(tài)性、穩(wěn)定性、重復(fù)性等綜合特性好，可用于品種DNA指紋數(shù)據(jù)采集和品種鑒定。3.2參照品種 reference

5、 variety指對應(yīng)于特定SSR位點(diǎn)上大小已知的不同等位變異的一組品種。參照品種用于確定待測品種等位變異，校正不同儀器設(shè)備和不同實(shí)驗(yàn)室間檢測數(shù)據(jù)的系統(tǒng)誤差。4 原理SSR廣泛分布于植物基因組中，不同物種或同一物種不同品種間每個(gè)SSR位點(diǎn)重復(fù)單位的數(shù)量可能不同。簡單重復(fù)序列的的兩側(cè)序列高度保守，針對側(cè)翼保守序列設(shè)計(jì)特異引物，利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）技術(shù)進(jìn)行重復(fù)序列擴(kuò)增。由于SSR位點(diǎn)重復(fù)單位的數(shù)量不同導(dǎo)致SSR片段長度不同，可在電泳電場作用下得到分離，經(jīng)硝酸銀或熒光染料加以區(qū)分。因此，根據(jù)SSR位點(diǎn)的多態(tài)性，利用PCR擴(kuò)增和電泳技術(shù)可以鑒

6、定木薯品種。5 儀器設(shè)備及試劑見附錄A。6 溶液配制見附錄B。7 引物見附錄C。8 參照品種及其使用參照品種的名稱及來源見附錄D。 在進(jìn)行等位變異檢測時(shí)，應(yīng)同時(shí)包括相應(yīng)參照品種的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。注：1.多個(gè)品種在某一SSR位點(diǎn)上可能都具有相同的等位變異。在確認(rèn)這些品種該位點(diǎn)等位變異大小與參照品種相同后，這些品種也可以代替附錄D中的參照品種使用。2.同一名稱不同來源的參照品種的某一位點(diǎn)上的等位變異可能不相同，在使用其他來源的參照品種時(shí)，應(yīng)與原參照品種核對，確認(rèn)無誤后使用。3.對于附錄D中未包括的等位變異，應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)方法，確定其大小和對應(yīng)參照品種。9 操作步驟9.1 樣品制備 每個(gè)品種隨機(jī)抽取10

7、個(gè)單株的幼嫩葉片或其它等效物進(jìn)行混合分析。9.2 DNA提取 1）稱取適量幼嫩葉片，液氮下迅速磨成粉末。 2）將粉末轉(zhuǎn)入2.0 mL 離心管中，加入700 L 65預(yù)熱的2% CTAB緩沖液，并使其混勻。 3）65水浴加熱45 min，不斷地輕輕倒轉(zhuǎn)搖動(dòng)。水浴后，取出離心管，冷卻至室溫。 4）通風(fēng)櫥下加入700 L的氯仿:異戊醇（24:1），輕輕倒轉(zhuǎn)搖動(dòng)5-10 min。 5）12000 rpm(室溫)離心10 min，用槍頭將上清液轉(zhuǎn)至一新的2.0 mL 離心管中。 6）重復(fù)4-5步驟。 7）加入-20預(yù)冷的異丙醇（1倍體積）或無水乙醇（2倍體積）于2.0 mL 離心管中，輕輕混勻。-20冰

8、箱靜置一段時(shí)間后，低速離心，至DNA凝集。 8）75乙醇洗滌兩次（其中一次可過夜）。洗滌完畢后，將DNA晾干。 9）加入適量的1×TE (pH 8.0)溶解于試管中，4下保存?zhèn)溆谩?10）加入10 L RNA酶溶液（10 mg/mL），37下溫浴30 min。 11）將DNA原液于0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)量（DL2000為Marker)。-20下保存?zhèn)溆?。注：上述DNA提取方法為標(biāo)準(zhǔn)推薦使用的，在保證DNA提取質(zhì)量的前提下其它DNA提取方法均可采用。9.3 PCR反應(yīng)體系及程序9.3.1 反應(yīng)體系20 µL的反應(yīng)體積，含每種dNTP 0.10 mmol/L，正向、反向引

9、物各0.025 mol/L，Taq DNA聚合酶1U，1×PCR緩沖液（含Mg2+ 2.5 mmol/L），樣品DNA 50 ng，其余以超純水補(bǔ)足至所需體積。如果PCR過程中不采用熱蓋程序，則反應(yīng)液上加蓋15 L 礦物油，以防止反應(yīng)過程中水分蒸發(fā)。9.3.2 反應(yīng)程序94預(yù)變性5 min，1個(gè)循環(huán)；94變性45 s，55退火45 s，72延伸60 s，共36個(gè)循環(huán)；72延伸10 min，4保存。9.4 電泳檢測9.4.1 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測（PAGE）9.4.1.1 灌膠板制作首先嚴(yán)格地將玻璃板洗凈，再用蒸餾水沖洗并擦干，然后用95%酒精擦拭，最后在母板上均勻涂2-3 mL

10、親和硅烷工作液，凹槽板上涂2-3 mL剝離硅烷。放置10 min以上，讓其充分晾干。操作過程中防止兩塊玻璃板相互污染。9.4.1.2 組裝玻璃板待玻璃板徹底干燥后組裝電泳板，并用水平儀調(diào)平。9.4.1.3 灌膠在50 mL 6%PAGE膠中加入TEMED 65 L和新配制的10%的過硫酸銨250 L，迅速混勻后灌膠。待膠液流動(dòng)到下部，在上部輕輕插入梳子，使其凝聚至少1 h以上。灌膠過程中防止出現(xiàn)氣泡。9.4.1.4 預(yù)電泳垂直拔出梳子，在正極槽（下槽）中加入1×TBE緩沖液600 mL，在負(fù)極槽（上槽）中加入1×TBE緩沖液600 mL。80 W恒功率預(yù)電泳30-40 mi

11、n。9.4.1.5 樣品制備2 L PCR擴(kuò)增樣品加入2 L 變性緩沖液，混勻后，在94變性10 min，迅速用冰水浴冷卻10 min 以上。9.4.1.6 電泳用移液器吹吸加樣槽，清除殘膠和氣泡，插入樣品梳子，每一個(gè)加樣孔點(diǎn)入5 L樣品。80 W恒功率電泳至上部的指示帶（二甲苯青）達(dá)到膠板的中部（50-60 min）。電泳結(jié)束后，小心分開兩塊玻璃板，膠會(huì)緊貼在涂有親和硅烷的玻璃平板上。9.4.1.7 銀染固定：將凝膠板置于裝有固定液的塑料盒內(nèi)，輕輕搖蕩10 min。漂洗：雙蒸水漂洗3 min。染色：在新配染色液中，輕輕搖蕩20 min。漂洗：雙蒸水漂洗，時(shí)間不超過10 s。顯影：在顯影液中、

12、輕輕搖蕩，直至出現(xiàn)帶紋。定影：在固定液中定影2 min。漂洗：用1.5 L雙蒸水漂洗2 min。干膠：室溫下自然晾干。觀察：放在膠片觀察燈上觀察記錄結(jié)果，用數(shù)碼相機(jī)或凝膠成像系統(tǒng)拍照保存。9.4.2 毛細(xì)管電泳熒光檢測9.4.2.1 PCR產(chǎn)物的樣品準(zhǔn)備 根據(jù)預(yù)先確定的引物分組（見附錄E），取等體積的同一組合中各引物的擴(kuò)增產(chǎn)物，混勻稀釋，從混合液中吸取1 µL加入到DNA分析儀專用96孔板中。板中各孔分別加入0.1 µL分子量內(nèi)標(biāo)和8.9 µL去離子甲酰胺。將樣品95變性5 min，取出后立即置于冰上，冷卻10 min以上。瞬時(shí)離心10 s后放置于DNA分析儀上。

13、注：熒光標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物的稀釋倍數(shù)通過熒光毛細(xì)管電泳預(yù)實(shí)驗(yàn)確定。 9.4.2.2 等位變異檢測打開DNA分析儀，檢查儀器工作狀態(tài)和試劑狀態(tài)，將裝有樣品的96孔上樣板放置于樣品架基座上，打開數(shù)據(jù)收集軟件，按照儀器使用手冊，編輯樣品表，執(zhí)行運(yùn)行程序，DNA分析儀將自動(dòng)運(yùn)行，并保存電泳原始數(shù)據(jù)。10 等位變異數(shù)據(jù)采集10.1 數(shù)據(jù)表示樣品每個(gè)SSR位點(diǎn)的等位變異采用擴(kuò)增片段大小的形式表示。10.2 普通變性聚丙烯凝膠電泳檢測方法將待測樣品擴(kuò)增片段的帶型和遷移位置與對應(yīng)的參照品種進(jìn)行比較，與待測樣品相同的參照品種的片段大小即為待測樣品該引物位點(diǎn)的等位變異大小。10.3 毛細(xì)管電泳熒光檢測使用毛細(xì)管電泳檢

14、測設(shè)備的片段分析軟件，讀出待測品種與對應(yīng)參照品種的等位變異數(shù)據(jù)。比較參照品種的等位變異大小數(shù)據(jù)與表D.1中參照品種相應(yīng)的數(shù)據(jù)，兩者之間的差值為系統(tǒng)誤差?？赏ㄟ^左右整體位移調(diào)整，使參照品種數(shù)據(jù)讀取與已知結(jié)果相一致，以校正不同電泳板的系統(tǒng)誤差。10.4 結(jié)果記錄純合位點(diǎn)的等位變異大小數(shù)據(jù)記為X/X，其中X為該位點(diǎn)等位變異的大小；雜合位點(diǎn)的等位變異大小數(shù)據(jù)記錄為X/Y，其中X、Y分別為該位點(diǎn)上的兩個(gè)等位變異的大小，小片段數(shù)據(jù)在前，大片段數(shù)據(jù)在后。缺失位點(diǎn)的等位變異大小數(shù)據(jù)記錄為0/0。示例1：樣品在某個(gè)位點(diǎn)上僅出現(xiàn)一個(gè)等位變異，大小為160 bp，則該位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為160/160。示例2：

15、樣品在某個(gè)位點(diǎn)上有兩個(gè)等位變異，分別為160 bp、165 bp，則該位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為160/165。11 判定方法利用附錄C中28對基本核心引物檢測，獲得待測品種在這些引物位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)，利用這些數(shù)據(jù)進(jìn)行品種間比較。(a) 品種間差異位點(diǎn)數(shù)2，判定為不同品種；(b) 品種間差異位點(diǎn)數(shù)1，判定為近似品種；(c) 品種間差異位點(diǎn)數(shù)0，判定為疑同品種。對于(b)和(c)的情況，按植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測試指南 木薯進(jìn)行田間鑒定。附錄 A（規(guī)范性附錄）主要儀器設(shè)備及試劑A.1 主要儀器設(shè)備A.1.1 PCR擴(kuò)增儀；A.1.2 高壓電泳儀：規(guī)格為3000 V、400 mA、400

16、 W，具有恒電壓、恒電流和恒功率功能；A.1.3 垂直電泳槽及配套的制膠附件；A.1.4 普通電泳儀；A.1.5 水平電泳槽及配套的制膠附件；A.1.6 高速冷凍離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速不小于15,000 rpm；A.1.7 水平搖床；A.1.8 膠片觀察燈；A.1.9 電子天平：精確度為0.01 g、0.001 g；A.1.10 微量移液器：規(guī)格分別為10 mL、20 mL、100 mL、200 mL、1000 mL，連續(xù)可調(diào)；A.1.11 磁力攪拌器；A.1.12 紫外分光光度計(jì)：波長260 nm及280 nm；A.1.13 微波爐；A.1.14 高壓滅菌鍋；A.1.15 酸度計(jì)；A.1.16 水

17、浴鍋或金屬?。嚎販鼐?#177;1；A.1.17 冰箱：最低溫度-20；A.1.18 制冰機(jī)；A.1.19 凝膠成像系統(tǒng)或紫外透射儀；A.1.20 其它相關(guān)儀器和設(shè)備A.2 主要試劑除非另有說明，在分析中均使用分析純試劑。A.2.1 十六烷基三乙基溴化銨；A.2.2 三氯甲烷；A.2.3 異丙醇；A.2.4 異戊醇；A.2.5 乙二胺四乙酸二鈉；A.2.6 三羥甲基氨基甲烷；A.2.7 鹽酸：37%；A.2.8 氫氧化鈉；A.2.9 氯化鈉；A.2.10 10×Buffer緩沖液：含Mg2+ 25 mmol/L；A.2.11 四種脫氧核苷三磷酸：dATP、dTTP、dGTP、dCT

18、P（10 mmol/L each）；A.2.12 Taq DNA聚合酶：5 U/ml；A.2.13 礦物油；A.2.14 瓊脂糖；A.2.15 DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)：DL2000；A.2.16 核酸染色劑；A.2.17 去離子甲酰胺；A.2.18 溴酚藍(lán)；A.2.19 二甲苯青FF；A.2.20 甲叉雙丙烯酰胺；A.2.21 丙烯酰胺；A.2.22 硼酸；A.2.23 尿素；A.2.24 親和硅烷：97%；A.2.25 剝離硅烷：2%二甲基二氯硅烷；A.2.26 無水乙醇；A.2.27 四甲基乙二胺；A.2.28 過硫酸銨；A.2.29 冰醋酸；A.2.30 乙酸銨；A.2.31 硝酸銀；A.2.

19、32 甲醛溶液：37%；A.2.33 DNA分析儀用電泳緩沖液。A.2.34 DNA分析儀用光譜校準(zhǔn)基質(zhì)，包括6-FAM、TAMRA、HEX和ROX等四種熒光標(biāo)記。附錄 B（規(guī)范性附錄）溶液配制除另有說明外，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和GB/T 6682規(guī)定的一級水。B.1 DNA提取試劑的配制B.1.1 0.5 mol/L EDTA溶液186.1 g EDTA -Na22H2O溶于800 mL水中，用1 N NaOH調(diào)pH值至8.0，定容至1000 mL，在103.4 kPa滅菌。B.1.2 1 mol/L Tris-HCL溶液60.55 g Tris-base溶于適量水中，加1 N

20、HCl調(diào)pH至8.0，定容至500 mL，103.4 kPa滅菌。B.1.3 0.5 mol/L HCl溶液25 mL濃鹽酸(36-38%)，加水定容至500 mL。B.1.4 DNA提取CTAB緩沖液1 mol/L Tris-HCl 83.5 mL，5 mol/L NaCL 235 mL，0.5 mol/L EDTA 33.4 mL，CTAB固體20 g，定容至1000 mL。其中，292.5 g NaCl (MW=58.44)加 ddH2O至終體積1000 mL，103.4 kPa滅菌，即為5 mol/L NaCl溶液。B.1.5 氯仿-異戊醇(24:1)按24:1的比例（體積比）配制混合

21、液。B.1.6 75%乙醇無水乙醇375 mL，加水定容至500 mL。B.1.7 TE緩沖液1 mol/L Tris-HCl 5 mL，0.5 mol/L EDTA 1 mL，加HCl調(diào)pH至8.0，定容至500 mL。B.2 PCR擴(kuò)增試劑的配制B.2.1 dNTPs用超純水分別配制dATP、dTTP、dCTP、dGTP 4種脫氧核糖核苷酸終濃度為100 mmol/L的儲(chǔ)存液。103.4 kPa滅菌，-20保存。B.2.2 SSR引物引物干粉快速離心，用超純水分別配制前引物和后引物終濃度均為20 mol/L，等體積混合成5 mol/L的工作液。B.3 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳試劑的配制B.3

22、.1 40PAGE膠190 g丙烯酰胺和10 g甲叉雙丙烯酰胺，定容至500 mL，混勻。4貯存?zhèn)溆谩.3.2 6% PAGE膠尿素450 g，10×BTE緩沖液100 mL，40%PAGE膠150 mL，定容至1000 mL。B.3.3 親和硅烷工作液250 L冰醋酸，250 L親和硅烷，加無水乙醇至50 mL，混勻。分裝于1.5 mL離心管中。4貯存?zhèn)溆?。B.3.4 剝離硅烷工作液2%二甲基二氯硅烷。B.3.5 25%過硫酸銨溶液0.25 g過硫酸銨溶于1 mL超純水中。B.3.6 10×TBE緩沖液Tris-base 108 g，硼酸 55 g，EDTA-Na22H

23、2O 7.44 g，定容至1 L。B.3.7 1×TBE緩沖液10×TBE緩沖液500 mL，加水定容至5 L。B.3.8 變性緩沖液去離子甲酰胺（用于DNA變性）49 mL，0.5 mmol/L EDTA 1 mL，溴酚蘭0.125 g，二甲苯青0.125 g。B.4 銀染試劑的配制B.4.1 固定液200 mL冰醋酸，加水定容至2000 mL。B.4.2 染色液3 g硝酸銀，加水定容至2000 mL。B.4.3 顯影液2000 mL蒸餾水中加入25 g氫氧化鈉和7 mL甲醛。銀染溶液的配制可使用符合GB/T 6682規(guī)定的三級水。附錄C（規(guī)范性附錄）核心引物表C.1 核

24、心引物連鎖群引物編號引物序列（53）熒光等位變異bp參照品種1CB18F: AGGATTGTGGTTGACAGGCTR: GAGACAACGGGGACAAAAGA HEX202SC11208SC10212桂熱6號216SC11218SC60682CB26 F: CGGGTCGCAGCTTCAATAAGR: TCTGGGTTGCTCTCATCTTG FAM358SC124364SC6366糯米376IAC380糯米2C91F: TTACAGGTGCCCGATGTGTA R: CGTTCGAGTTGCATTCATTCFAM162SC124166SC11168Ecu84172SC205186SC6H

25、EX156SC122CB33F:GGAAGCATGTTTCTTTGATAATTCR: ATCTGGTTCTCGTGGGAGTG 158SC124160SC15162Bra-home164GR891170桂熱7號172SC6068178SC83CB39F: GCGCTTGCAGTTGCTCTATC R: GCCACAACACACGCATATCT HEX287SC124289SC9291SC10293桂熱4號297桂熱5號3CB41F: AATGGAGCCAAAATCACCAC R: CAAATGCTATCAAGCACAAGG ROX233SC124241巴西9號243桂熱6號245GR89124

26、7SC5253SC7259IAC261SC5263東莞紅尾265SC5269SC9273SC10283桂熱7號285SC2013C516F: ATCTCAGGGTGGTCGACAGA R: TGCCAAAGGAGGAGAAAATG FAM215SC9223桂熱7號225桂熱6號227SC64C24F: GTCTGCGCTGAGCAGTCTC R: GAGTGAGACGACGAAACGTG FAM170SC6172SC5176SC9182SC6068186桂熱7號188SC205194SC105C524F: TAACCTTTCGCCGTCTTCTG R: GAAGGAAGGGGGAATTTGAG

27、 TAMRA219SC11222桂熱9號225GR11227巴西15號231SC205234COL2626237桂熱6號6CB192F: AGTTCAAGTGGGTGGTCAGG R: ACCCCAGACATGTTGCATTT TAMRA201SC10203SC124207SC11211SC12213桂熱10215桂熱6號7CB82F: TGAGAATGCTGAGACGGATGR:AAAAGGGCAAGAAAACAAGAAAFAM298SC15301SC124304SC8013307SC118CB93F: GATCGGATGTCTGAGGAGGA R: TGCTAGTCCTTTTTGGCAGG

28、 TAMRA202SC10204SC13210Bra-home212SC9214GR911226東莞紅尾8C109F: GCAAATTGGGGGAATGTTTT R: AAGACACGAAGACGGTTGCT HEX192GR891194SC6196SC9200R72206SC2059CB220F: CCCACGCTTCTGCTCTTTTA R: AGGCATACCGCCATGATTAG HEX218粉紅220SC6226SC159CB226F: AAATTGGACAGGAGAGGTTGG R: ACGGAGGAGAGTTGGATTTACA HEX123SC12129瑞士517133SC111

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32、AACCGCAACTCFAM114新選048122SC7138SC6140SC12417CB246F: CTGTCTTGATTCCGGCAACTR: GCAAGTCGTTGCCTACCTTGFAM202SC101204SC124206SC7208桂熱6號210SC5212桂熱6號224桂熱9號17C79F: CATCTCTCTGCAGTCCGTCAR: GGTCGATGAGAGGGAAATCAFAM131SC6133SC8135SC10137GR11139GR891141R318CB248F: GGACTGCTTGGATCCATTAAAR: CACCATTCCCTCTGGAGAAAFAM187SC9191SC14193桂熱7號197GR11附錄D（規(guī)范性附錄）參照品種相關(guān)信息表D 參照品種相關(guān)信息序號名稱來源1SC5國家木薯種質(zhì)資源圃2