曲霉菌屬檢驗技術(shù)

1、曲霉菌屬檢驗技術(shù)曲霉菌是絲孢目叢梗孢科的真菌。廣泛分布于自然界，達 900余種，分為18個群，對工 業(yè)和醫(yī)藥的用途很大。釀酒造醬，生產(chǎn)有機酸及酶制劑， 抗生素等。曲霉菌是實驗室經(jīng)常污染的真菌之一?？筛腥緞游铮部稍诩纳娘暳?、糧食中產(chǎn)生毒素，動物食后引致中毒。 人體對曲霉有極強免疫力， 只有在免疫功能降低時才能 致病，如使用免疫抑制劑、腎上腺皮質(zhì)激素，放療化療， 各種惡性腫瘤、糖尿病、AIDS等可誘發(fā)曲霉病。曲霉可侵犯許多部位， 呼吸系統(tǒng)曲霉病主要有三種： 過 敏型、曲霉球和肺炎。全身性曲霉病多發(fā)生敗血癥， 危 及生命。曲霉產(chǎn)生黃曲霉毒素、雜色曲霉毒素與原發(fā)性肝癌有關(guān)。黃曲霉、寄生曲霉、棕曲霉

2、、雜色曲霉等主要以所產(chǎn)毒素而致病。微生物特性 菌絲：有隔，多細胞性，有分枝足細胞（接觸培養(yǎng)基的部分，厚壁而膨大）分生孢子梗：從足細胞直立頂囊：孢子梗頂端膨大，半球形或橢圓形小梗：頂囊上，輻射狀，一層或二層桿狀分生孢子：小梗頂端，成串，球形或柱狀，黃、藍、棕黑八、分生孢子頭：菊花樣的頭狀結(jié)構(gòu)（頂囊，小梗，分生孢子）菌落：絨毛狀或絮狀開始為白色，后菌種不同顏色不同繁殖：多數(shù)：無性少數(shù)：有性1、煙曲霉（A. fumigatus ）煙曲霉廣泛分布于自然界， 在禽舍的地面、墊草、用具及空氣中經(jīng)?？煞蛛x出其孢子。孢子對外界理化因素的作用有較強的抵抗力，煮沸5min，可被殺死；般消毒液要經(jīng)13h才能殺死孢子

3、。對一般的抗生素均 不敏感，制霉菌素、兩性霉素 B、灰黃霉素及碘化鉀對本菌有抑制 作用。煙曲霉菌是曲霉菌屬致病性最強的霉菌。主要引起家禽的曲霉性肺炎及呼吸器官組織炎癥，并形成肉芽腫結(jié)節(jié)。也可感染哺乳動物和人。在混合感染病例中， 除煙曲霉外，亦可見黃曲霉、黑曲霉、構(gòu)巢曲霉、青霉菌 及毛霉菌。本菌引起的霉菌病，世界各國均有報道。本菌在感染組織的過程中， 還產(chǎn)生一種蛋白質(zhì)毒素， 可導(dǎo)致動物組織發(fā)生痙攣、麻痹，直至死亡。毒素的提取物對家兔 、豚鼠、小鼠和雞有毒性，兔和犬尤為敏感，但鴿卻有抵抗力，而鶴對本菌感染十分敏感。微生物檢驗迸行微生物學(xué)檢查時要采取病料， 如肺部結(jié)節(jié)、鼻分泌 物、痰液或病損處刮取物

4、， 進行切片或壓片，鏡檢，在 高倍鏡下觀察，可見分隔菌絲、分生孢子梗及孢子等結(jié) 構(gòu)。必要時進行分離培養(yǎng)，有鑒別意義的主要特征是：頂囊由分生孢子梗逐漸膨大而形成，狀如燒瓶，小梗著生于頂囊的上半部，小梗單層，小梗和分生孢子鏈按與分生 孢子梗平行的方向升起，菌落呈暗綠色至黑褐色。2、黃曲霉(A. flavus )菌落：黃色頂囊：球形或近球形小梗：雙層，第一層長，布滿頂囊表面，放射狀孢子：球形或梨形，有小棘，成鏈排列黃曲霉毒素(Aflatoxin ，簡稱 AFT或AF)黃曲霉菌中有30%60喲菌株產(chǎn)生毒素，而寄生曲霉菌幾乎都能產(chǎn)生黃曲霉毒素。該毒素常見于霉變的花生、玉米等谷物，在魚粉、肉制品、咸干魚、

5、奶和肝臟中也可發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素對多種動物呈現(xiàn)毒性作用，但不同動物的敏感性不同，鴨、兔、貓、豬、犬較敏感，猴、豚鼠、小 鼠、羊敏感性較低。黃曲霉-奉素的種類和結(jié)枸墓本結(jié)構(gòu)是一個磁鼠咲喃和一介華L雜荼鄰萌（香豆素）。目前已發(fā)現(xiàn)的黃曲霉毒素和I關(guān)彳匕令暢有B、B2.G“ B歸.、M比等二十種左右黃曲霉毒素的理化性質(zhì)：一般特性：幾乎是無色，B】的分子量為312, 熔點為268 - 269乜熒光特點：黃曲霉毒素在紫外線照射下可產(chǎn) 生熒光，B族毒素顯藍紫色熒光；G族毒素顯 黃綠色熒光溶解特性：難溶于水.己烷.石油瞇和乙易溶于氯仿、甲醇.丙酮.苯.乙睛等多種有機溶劑黃曲霉毒素的理化生質(zhì)：對熱穩(wěn)定，分解溫度約3

6、009中性和酸性溶液中扌知隱定，在強堿（pH9-10） 溶液中可被迅速分解5 %的次氮酸鈉溶液可瞬時破壞垂素有很高的儲藏穩(wěn)定性根據(jù)黃曲霉毒素的毒性作用，可將中毒分為三類，即急性或亞急性、慢性、致癌性。黃曲霉毒素的產(chǎn)毒條件:產(chǎn)毒微生物:黃曲 霉產(chǎn)毒菌株的 比例在6 0 - 9 4 %之間寄生曲霉的產(chǎn)奉菌株可達100%產(chǎn)毒的基質(zhì):玉米.花生容易滋長黃曲霉和被黃曲霉毒 素污染有時可在田間被黃曲霉毒素汚染毒素檢驗在各種黃曲霉毒素中，B1的毒性和致癌性最強，其次是G1。黃曲霉污染物中，最常見的是黃曲霉毒素Bl，其含量最高。Ml是B1的代謝產(chǎn)物，用含黃曲霉毒素B1的飼料喂牛，奶?？煞置?M1入牛奶，危害人類健康。美國食品藥品管理局（FDA）對牛奶中的Ml檢測含量控制 <0.5mg/kg，而歐盟則為 < 0.05mg/kg 。毒素檢測 從可疑飼料提取毒素，飼喂I日齡鴨，可見肝壞死、出血及膽管上皮增生等3、雜色曲霉(A. versicolor )分生孢子頭呈粗糙的半球形、放射狀，分生孢子梗無色或微黃、壁厚、光滑頂囊半橢圓形至半球形，頂囊生有雙層小梗。分生孢子為球形、有小刺，呈鏈狀雜色曲霉素由雜色曲霉產(chǎn)生，是化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的一類毒素，其中雜色曲霉素W a為重要的一種，呈淡黃色針狀結(jié)晶。雜色曲霉素具有急性、慢性毒性及致癌性，主要損害肝、 腎。微