紫外可見分光光度法-實驗技術（學習指南）

1、項目7紫外可見分光光度法7.5 紫外可見分光光度法實驗技術內(nèi)容提要：（本章的主要內(nèi)容及知識結構）紫外-分光光度計的的操作步驟1. 開啟電源進行初始化開啟主機電源，分光光度計將按屏幕所顯示的項目進行自檢和初始化，如下圖所示。所有項目檢測完畢，初始化結束，整個過程大約需要4min（若使用多池檢測需5min）。每個項目進行初始化操作時將被加亮顯示，當初始化完成后，該項右邊的星標也將加亮顯示。但是，如果檢測到任何異常，初始化過程將立即中止，星標也不會加亮顯示。2屏幕顯示和觸摸鍵盤UV-1700的觸摸鍵盤圖可用數(shù)字鍵09和功能鍵F1F4選擇不同屏幕中的模式和設置。選擇時，按下相應的數(shù)字鍵或功能鍵即可，無

2、START/STOP 鍵一旦參數(shù)設置完成，可用該鍵開始和停止測量過程。AUTO ZERO 鍵按該鍵，當前波長的吸光度自動調(diào)整為0（100%T）。測量前，必須確保在樣品側和參比側中都放有盛有空白的比色池。GOTOWL 鍵該鍵可用來改變當前的波長。ENTER 鍵輸入數(shù)值后，按該鍵確認。Cursor 光標鍵（-），）這組鍵可控制液晶顯示屏幕中光標的左右移動。輸入數(shù)值時，左光標鍵還可以用來輸入負值（-）。Function 功能鍵（F1F4）這組鍵的功能與液晶顯示屏幕下方所顯示的功能相對應。RETURN 鍵按下該鍵可返回當前屏幕的前一屏。MODE 鍵用該鍵可從每種測量模式的參數(shù)設置屏返回到主模式屏。需按

3、ENTER 鍵確認。此外，輸入數(shù)值時，如波長設置或顯示模式等，必須按ENTER 鍵確認輸入值。下面介紹每個鍵的基本功能，在不同屏幕下有一些鍵可能被賦予特殊的功能。Print 打印鍵用該鍵可輸出當前屏幕顯示的硬拷貝。Numeric 數(shù)字鍵用該鍵可輸入數(shù)值？CE 鍵用該鍵可清除數(shù)值輸入錯誤。按該鍵，已輸入的數(shù)值將被清除，可重新輸入正確的數(shù)值。模式選擇和共享操作初始化完成后即顯示模式選擇屏幕。注意事項1、比色皿使用時注意不要沾污或?qū)⒈壬蟮耐腹饷婺p，應手持比色皿的毛面。2、待測液制備好后應盡快測量，避免有色物質(zhì)分解，影響測量結果。3、測得的吸光度A 最好控制在0.20.8之間，超過1.0時要做適當

4、稀釋。4、開關試樣室蓋時動作要輕緩。5、不要在儀器上方傾倒測試樣品，以免樣品污染儀器表面，損壞儀器。6、比色皿在盛裝樣品前，應用所盛裝樣品沖洗兩次，測量結束后比色皿應用蒸餾水清洗干凈后倒置晾干。若比色皿內(nèi)有顏色掛壁，可用無水乙醇浸泡清洗。7、向比色皿中加樣時，若樣品流到比色皿外壁時，應以濾紙點干，鏡頭紙擦凈后測量，切忌用濾紙擦拭，以免比色皿出現(xiàn)劃痕。8、測定紫外波長時，需選用石英比色皿。9、測量過程中不可打開測量室的窗門，否則會影響測量結果的準確性。維護和保養(yǎng)1、儀器使用一定周期后內(nèi)部會積累一定量的塵埃最好由維修工程師或工程師指導下定期開啟儀器外罩對內(nèi)部進行除塵工作同時將各發(fā)熱元件的散熱器重新

5、緊固對光學盒的密封窗口進行清潔必要時對光路進行校準對機械部分進行清潔和必要的潤滑最后恢復原狀再進行一些必要的檢測、調(diào)校與記錄。2、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學部件鋁膜銹蝕的原因之一因此必須定期清潔保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件防塵。3、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素他們可以引起機械部件的銹蝕使金屬鏡面的光潔度下降引起儀器機械部分的誤差或性能下降造成光學部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等甚至儀器停止工作從而影響儀器壽命維護保養(yǎng)時應定期加以校正應具備四季恒濕的儀器室配置恒溫設備特別是地

6、處南方地區(qū)的實驗室。本節(jié)習題：（不少于5題）1某物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)越大，則表明該物質(zhì)的濃度越大。2在紫外光譜中，同一物質(zhì)，濃度不同，入射光波長相同，則摩爾吸光系數(shù)相同；同一濃度，不同物質(zhì)，入射光波長相同，則摩爾吸光系數(shù)一般不同。3有色溶液的透光率隨著溶液濃度的增大而減小，所以透光率與溶液的濃度成反比關系；有色溶液的吸光度隨著溶液濃度的增大而增大，所以吸光度與溶液的濃度成正比關系。4朗伯特-比耳定律中，濃度C與吸光度A之間的關系是通過原點的一條直線。5朗伯特-比耳定律適用于所有均勻非散射的有色溶液。1。吸光系數(shù)是指在一定波長下，溶液中吸光物質(zhì)濃度為1，液層厚度為1cm的吸光度。常用摩爾吸光系數(shù)和

7、百分吸光系數(shù)表示。吸光系數(shù)是吸光物質(zhì)的特性參數(shù)，是吸光物質(zhì)定性的重要參數(shù)，與吸光物質(zhì)的濃度無關。2。摩爾吸光系數(shù)與吸光物質(zhì)的結構特性、吸收光的波長有關。同一物質(zhì)，入射光波長不同，摩爾吸光系數(shù)不同。但紫外光譜反映的是分子母體的性質(zhì)，母體相同而取代基不同摩爾吸光系數(shù)可能相同也可能不同。所以同一物質(zhì)，濃度不同，入射光波長相同，則摩爾吸光系數(shù)相同；同一濃度，不同物質(zhì)，入射光波長相同，則摩爾吸光系數(shù)一般不同。3。有色溶液的透光率與溶液濃度之間的關系為： 或 由此可見：有色溶液的吸光度隨著溶液濃度的增大而增大，所以吸光度與溶液的濃度成正比關系。透光率隨著溶液濃度的增大而減小，有色溶液的透光率與溶液濃度之間成指數(shù)關系，但不成反比關系。4。朗伯特-比耳定律表明在一定條件下，當一束平行的單色光通過均勻的非散射樣品時，樣品對光的吸光度與樣品濃度及液層厚度成正比。即： 所以，從理論上講符合朗伯特-比耳定律吸光物質(zhì)濃度C與吸