菌落總數(shù)實(shí)驗(yàn)報(bào)告1

1、檢驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)名稱： 菌落總數(shù)的檢驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)方法：平板計(jì)數(shù)法 商品名稱：夸夸唔、有友、奇爽、樂棒棒、香豬脆、香脆肚。參照標(biāo)準(zhǔn)：GB4789-17 2011總負(fù)責(zé)人：熊經(jīng)理檢驗(yàn)人員:徐恒琴、崔艷霞、游惠檢驗(yàn)時(shí)間： 2011年7月268月6號(hào) 2011年8月8日 菌落總數(shù)的檢測(cè)平板計(jì)數(shù)法1、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?為了進(jìn)一步了解與熟悉我們產(chǎn)品的操作規(guī)范和關(guān)鍵點(diǎn)的控制，掌握菌落總數(shù)的檢驗(yàn)方法和了解超凈工作臺(tái)的操作規(guī)范。2、 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備和所需試劑及試劑的配制。 1、實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備 殺菌鍋YXQLSSU 編號(hào)5090、無菌超凈工作臺(tái)SWCJIC 編號(hào)24、JJ-Z型組織搗碎機(jī)、隔水或智能恒溫培養(yǎng)箱GHP9080、 出

2、廠編號(hào)13475、烘箱ZFD5040(全自動(dòng)型鼓風(fēng)干燥箱）、蒸餾水制備機(jī)、滅菌過的250ml錐形瓶、1ml吸量管、10ml的吸量管、酒精燈、錐形瓶1000ml、培養(yǎng)皿、電子天平AL104、電磁爐、鍋、鍋鏟、PH試紙、恒溫水浴鍋HH4 出廠標(biāo)號(hào)160.53。2、試驗(yàn)試劑及配制2.1主要試劑：瓊脂、無菌生理鹽水、無菌水、75%的酒精、1moL/L氫氧化鈉、1moL/L的鹽酸。2.2藥品試劑2.21瓊脂：準(zhǔn)確稱取12.5g胰蛋白胨、酵母浸膏7.5g、葡萄糖3.0g、瓊脂37.5g、蒸餾水2500ml，加入至鍋中煮沸溶解，先加入瓊脂將其熬化，在加入其它樣品，直至樣品熬化即可關(guān)掉火，冷卻后調(diào)解PH值（7

3、.0左右即可）。酸性用氫氧化鈉調(diào)節(jié)、堿性用鹽酸進(jìn)行調(diào)節(jié)，將在1200C高壓滅菌15min即可。2.22無菌生理鹽水：準(zhǔn)確稱取8.5g氯化鈉溶于1000ml蒸餾水中。2.23無菌水：吸取1000ml的蒸餾水，將在1200C高壓滅菌15min即可。2.24 1moL/L氫氧化鈉：稱取40g的氫氧化鈉溶于1000ml的蒸餾水中在1200C高壓滅菌15min即可。2.45 75%的酒精：分別吸取400ml的95%的無水乙醇和100ml的蒸餾水與500ml的容量瓶中。2.46 1moL/LDE 鹽酸：移取濃鹽酸90ml，用蒸餾水稀釋至1000ml，在1200C高壓滅菌15min即可。3 試驗(yàn)步驟1 、樣

4、品的稀釋1.1固體和半固體樣品：稱取25 g 樣品置盛有225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min10000 r/min 均質(zhì)1 min2 min，或放入盛有225 ml 稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min，制成1:10 的樣品勻液。1.2液體樣品：以無菌吸管吸取25 ml樣品置盛有225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。36 1 48 h2 h.2、 檢樣與接種：25 g(ml)樣品+225 ml稀釋液，均質(zhì)，10 倍系列稀釋選擇2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品

5、勻液，各取1 ml 分別加入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)。2.1 用1 ml 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1 ml，沿管壁緩慢注于盛有9 ml 稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1 支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。 2.2.按上述操作程序，制備10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1 次1 ml無菌吸管或吸頭。 12.2. 根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10 倍遞增稀釋時(shí)，吸取1 ml 樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1 ml空白稀釋液

6、加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。 3、倒平板：在酒精燈開著的條件下進(jìn)行到培養(yǎng)皿的3分之一即可，而其中瓊脂的溫度需要在46即可倒入瓊脂，不然會(huì)影響其細(xì)菌的生長繁殖。平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，混勻.4、培養(yǎng)：待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 1 培養(yǎng)48 h2 h。水產(chǎn)品30 1 培養(yǎng)72 h3 h。如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4 ml），凝固后翻轉(zhuǎn)平板， 5、報(bào) 告 6.菌落計(jì)數(shù) 可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（colony-forming units，CFU）表示。6. 1

7、 選取菌落數(shù)在30 CFU300 CFU 之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30 CFU 的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300 CFU 的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。6. 2 其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。6. 3 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。7 結(jié)果與報(bào)告7.1 菌落總數(shù)的計(jì)算方法7.1.1 若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)

8、平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（ml）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。7.1.2 若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式（1）計(jì)算： N=C/(N1+0.1n2)d （1）式中：N樣品中菌落數(shù)；C平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n1第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；n2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；d稀釋因子（第一稀釋度）。上述數(shù)據(jù)按7.2.2數(shù)字修約后，表示為25000或2.5104。7.1.3 若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300 CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。7.1.4

9、 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30 CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。7.1.5 若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。7.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30 CFU300 CFU 之間，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 時(shí)，則以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。7.2 菌落總數(shù)的報(bào)告7.2.1 菌落數(shù)小于100 CFU 時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報(bào)告。7.2.2 菌落數(shù)大于或等于100 CFU 時(shí)，第3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2 位數(shù)字，后面用0

10、 代替位數(shù)；也可用10 的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。7.2.3 若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。7.2.4 若空白對(duì)照上有菌落生長，則此次檢測(cè)結(jié)果無效。7.2.5 稱重取樣以CFU/g 為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL 為單位報(bào)告。4、 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果計(jì)算1、 樂棒棒菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白1細(xì)菌菌落數(shù)2細(xì)菌菌落數(shù)3細(xì)菌菌落數(shù)100373938100058010000000若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（ml）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。所以： N=37

11、+38+39/310 N=380個(gè)/g2、 奇爽菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白123100267281295100044342910000406若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式（1）計(jì)算： N=C/(N1+0.1n2)d （1）式中：N樣品中菌落數(shù)；C平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n1第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；n2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；d稀釋因子（第一稀釋度）。 N=267+281+295+44+34+29/(3+0.13）10 N=2879個(gè)/g3、 香豬脆菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析結(jié)果1稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白12310057603410

12、0012感雜410000001若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（ml）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。 所以： N=57+60+34/310 N= 503個(gè)/g結(jié)果2稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白123100576034100012感雜410000001若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（ml）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。 所以： N=36+35+12/310 N=243個(gè)/g4、 夸夸唔菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白123100452336650100053

13、11884100001587若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（ml）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。所以： N=53+118+84/3100 N= 85005、 有友菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白1231001721000感雜感雜010000000只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（ml）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。所以： N=1+7+3/310 N=33個(gè)/g6、 香脆肚菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析 稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白123100131444376100015812113610000434755若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式（1）計(jì)算： N=C/(N1+0.1n2)d （1）式中：N樣品中菌落數(shù)；C平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n1第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；n2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；d稀釋因子（第一稀釋度）。 N=158+121+136+43+4