中藥注射液局部用藥安全性評(píng)價(jià)課件

1、中藥注射劑局部用藥安全性中藥注射劑局部用藥安全性評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)l過敏性試驗(yàn)過敏性試驗(yàn)l刺激性試驗(yàn)刺激性試驗(yàn)l溶血性試驗(yàn)溶血性試驗(yàn)一、過敏反應(yīng)一、過敏反應(yīng)過敏反應(yīng)是一種變態(tài)反應(yīng)過敏反應(yīng)是一種變態(tài)反應(yīng), ,即一型超敏反應(yīng)即一型超敏反應(yīng). .當(dāng)過敏原當(dāng)過敏原( (包括抗原與半抗原包括抗原與半抗原, ,如異種血清如異種血清, ,微微生物代謝產(chǎn)物生物代謝產(chǎn)物, ,花粉花粉, ,某些藥物或食物等某些藥物或食物等) )進(jìn)入進(jìn)入機(jī)體時(shí)機(jī)體時(shí), ,可以通過特殊機(jī)制可以通過特殊機(jī)制, ,刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體. .這種抗體附著在肥大細(xì)胞上這種抗體附著在肥大細(xì)胞上, ,此后當(dāng)又有同樣此后當(dāng)又有同樣抗原進(jìn)入機(jī)體時(shí)

2、抗原進(jìn)入機(jī)體時(shí), ,即與抗體相反應(yīng)即與抗體相反應(yīng), ,使肥大細(xì)胞使肥大細(xì)胞釋放出組胺等物質(zhì)釋放出組胺等物質(zhì). .過敏原過敏原刺激刺激機(jī)體機(jī)體產(chǎn)生產(chǎn)生IgEIgEIgE與肥大細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞結(jié)合與肥大細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞結(jié)合致敏靶細(xì)胞致敏靶細(xì)胞脫顆粒釋放活性介質(zhì)（如組胺，白三烯等）脫顆粒釋放活性介質(zhì)（如組胺，白三烯等）毛細(xì)血管擴(kuò)張，通透性增加等毛細(xì)血管擴(kuò)張，通透性增加等全身反應(yīng)，呼吸道反應(yīng)，皮膚反應(yīng)全身反應(yīng)，呼吸道反應(yīng)，皮膚反應(yīng)致敏階段致敏階段發(fā)敏階段發(fā)敏階段蘆丁提取物過敏性試驗(yàn)蘆丁提取物過敏性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康? :觀察動(dòng)物重復(fù)接觸受試藥物后所產(chǎn)生的觀察動(dòng)物重復(fù)接觸受試藥物后所產(chǎn)生的過敏反應(yīng)情況過敏

3、反應(yīng)情況. .動(dòng)物：豚鼠（動(dòng)物：豚鼠（250300g)250300g)分組分組: :陰性對(duì)照組陰性對(duì)照組( (生理鹽水生理鹽水) ) 陽(yáng)性對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組(5%(5%新鮮蛋清新鮮蛋清) ) 蘆丁提取物組蘆丁提取物組( (供試品供試品) ) 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟致敏反應(yīng)：致敏反應(yīng)：取豚鼠取豚鼠2 2只，隔天肌內(nèi)注射蘆丁提只，隔天肌內(nèi)注射蘆丁提取物取物0.5ml0.5ml，連續(xù)，連續(xù)3 3次，并行陰性對(duì)照組和陽(yáng)性次，并行陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組各為對(duì)照組各為2 2只只豚鼠豚鼠。激發(fā)反應(yīng)：于首次注射后的第激發(fā)反應(yīng)：于首次注射后的第1414天，腹腔注射天，腹腔注射蘆丁提取物蘆丁提取物2-3ml2-3ml，觀

4、察注射后有無用爪搔鼻、，觀察注射后有無用爪搔鼻、噴嚏、豎毛、抽搐、呼吸困難、大小便失禁、噴嚏、豎毛、抽搐、呼吸困難、大小便失禁、休克和死亡等反應(yīng)。休克和死亡等反應(yīng)。 1010分鐘內(nèi)先后出現(xiàn)上述分鐘內(nèi)先后出現(xiàn)上述體征，體征，3030分鐘內(nèi)死亡。分鐘內(nèi)死亡。過敏性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)過敏性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)二、二、蘆丁提取物蘆丁提取物刺激性反應(yīng)刺激性反應(yīng)化學(xué)刺激化學(xué)刺激物理刺激物理刺激炎癥等其它刺激炎癥等其它刺激刺激性實(shí)驗(yàn)刺激性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康? :觀察動(dòng)物接觸觀察動(dòng)物接觸蘆丁蘆丁提取物后所產(chǎn)生提取物后所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況的刺激反應(yīng)情況. .動(dòng)物動(dòng)物: :首選成年健康家兔首選成年健康家兔(2Kg)(2Kg)

5、分組分組: :陰性對(duì)照組陰性對(duì)照組( (生理鹽水生理鹽水) ) 陽(yáng)性對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組(1%(1%酒石酸銻鉀注射液酒石酸銻鉀注射液) ) 蘆丁蘆丁提取物給藥組提取物給藥組 股四頭肌股四頭肌法法 股四頭肌在后肢大腿的前面，正中為股股四頭肌在后肢大腿的前面，正中為股直肌，股直肌之下為股中間肌，股直肌之外為直肌，股直肌之下為股中間肌，股直肌之外為股外側(cè)肌，股直肌之內(nèi)側(cè)為股內(nèi)側(cè)肌，四塊肌股外側(cè)肌，股直肌之內(nèi)側(cè)為股內(nèi)側(cè)肌，四塊肌肉合稱股四頭肌肉合稱股四頭肌。實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟取健康家兔兩只，分別于一側(cè)后肢的股四頭肌取健康家兔兩只，分別于一側(cè)后肢的股四頭肌處注射處注射蘆丁蘆丁提取物提取物提取物提取物3 3ml

6、ml，于另一側(cè)后肢，于另一側(cè)后肢的對(duì)應(yīng)部位注射同容積的滅菌生理鹽水作為對(duì)的對(duì)應(yīng)部位注射同容積的滅菌生理鹽水作為對(duì)照。進(jìn)針角度照。進(jìn)針角度30-4530-45度為宜。度為宜。48h48h后試驗(yàn)家兔健后試驗(yàn)家兔健康如常。將家兔由耳緣靜脈注射空氣處死，解康如常。將家兔由耳緣靜脈注射空氣處死，解剖取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌剖取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉組織的反應(yīng)。肉組織的反應(yīng)。并行陽(yáng)性對(duì)照組：并行陽(yáng)性對(duì)照組： 1%1%酒石酸銻鉀注射液酒石酸銻鉀注射液刺激性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)刺激性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)將肌肉組織的反應(yīng)分為六級(jí)：將肌肉組織的反應(yīng)分為六級(jí)：0 0級(jí)（級(jí)（- -）：注射供試品部位的肌

7、肉組織與對(duì)照部位肌肉組織任何差）：注射供試品部位的肌肉組織與對(duì)照部位肌肉組織任何差異。異。1 1級(jí)（級(jí)（+ +）：注射供試品部位的肌肉組織有充血，直徑在）：注射供試品部位的肌肉組織有充血，直徑在0.5cm0.5cm以下。以下。2 2級(jí)（級(jí)（+）：注射供試品部位的肌肉組織有紅腫充血，直徑在）：注射供試品部位的肌肉組織有紅腫充血，直徑在1cm1cm左左右。右。3 3級(jí)（級(jí)（+）：注射供試品部位的肌肉組織有紅腫、發(fā)紫、光澤消失、）：注射供試品部位的肌肉組織有紅腫、發(fā)紫、光澤消失、可見壞死點(diǎn)?？梢妷乃傈c(diǎn)。4 4級(jí)（級(jí)（+）：注射供試品部位的肌肉組織有紅腫、發(fā)紫、光澤消）：注射供試品部位的肌肉組織有紅腫

8、、發(fā)紫、光澤消失、壞死范圍直徑達(dá)失、壞死范圍直徑達(dá)0.5cm0.5cm左右。左右。5 5級(jí)（級(jí)（+）：注射供試品部位肌肉的各項(xiàng)反應(yīng)更重，有大片壞死。）：注射供試品部位肌肉的各項(xiàng)反應(yīng)更重，有大片壞死。刺激性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)刺激性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)凡兩只家兔的平均反應(yīng)級(jí)數(shù)在凡兩只家兔的平均反應(yīng)級(jí)數(shù)在2 2以下者可供肌以下者可供肌肉注射之用；平均反應(yīng)級(jí)數(shù)超過肉注射之用；平均反應(yīng)級(jí)數(shù)超過3 3者不能供肌者不能供肌肉注射之用；平均反應(yīng)級(jí)數(shù)在肉注射之用；平均反應(yīng)級(jí)數(shù)在2-32-3之間者可進(jìn)之間者可進(jìn)行復(fù)試或結(jié)合其他項(xiàng)目考慮其臨床試用問題。行復(fù)試或結(jié)合其他項(xiàng)目考慮其臨床試用問題。凡刺激性試驗(yàn)不能達(dá)到肌肉注射要求的知己

9、制凡刺激性試驗(yàn)不能達(dá)到肌肉注射要求的知己制劑一般也不宜供皮下注射之用。劑一般也不宜供皮下注射之用。靜脈注射制劑的安全性評(píng)價(jià)靜脈注射制劑的安全性評(píng)價(jià) 靜脈注射制劑根據(jù)我國(guó)藥政部門的規(guī)定，要必靜脈注射制劑根據(jù)我國(guó)藥政部門的規(guī)定，要必須進(jìn)行常規(guī)安全性評(píng)價(jià)，主要包括血管刺激性須進(jìn)行常規(guī)安全性評(píng)價(jià)，主要包括血管刺激性試驗(yàn)、體外溶血性試驗(yàn)、過敏性試驗(yàn)、熱原試試驗(yàn)、體外溶血性試驗(yàn)、過敏性試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)等。驗(yàn)等。血管刺激性試驗(yàn)血管刺激性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康? :為確保注射液制劑安全性，檢查制為確保注射液制劑安全性，檢查制劑經(jīng)多次靜脈注射后對(duì)血管刺激性反應(yīng)。劑經(jīng)多次靜脈注射后對(duì)血管刺激性反應(yīng)。 動(dòng)物動(dòng)物: :家

10、兔家兔分組分組: :供試品組供試品組 生理鹽水對(duì)照組生理鹽水對(duì)照組實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟家兔家兔8 8只，禁食只，禁食1616小時(shí)，隨機(jī)分成小時(shí)，隨機(jī)分成2 2組，每組組，每組4 4只。設(shè)供只。設(shè)供試品組與生理鹽水對(duì)照組。兔固定于兔箱，試品組與生理鹽水對(duì)照組。兔固定于兔箱， 藥液通過藥液通過消毒恒速注射器與小兒頭皮針注入耳緣靜脈內(nèi)。每天消毒恒速注射器與小兒頭皮針注入耳緣靜脈內(nèi)。每天給藥給藥1 1次，連續(xù)次，連續(xù)3 3天。天。 實(shí)驗(yàn)給藥期間，觀察動(dòng)物全身反應(yīng)、血管及周圍組織實(shí)驗(yàn)給藥期間，觀察動(dòng)物全身反應(yīng)、血管及周圍組織的刺激性反應(yīng)。的刺激性反應(yīng)。組織病理學(xué)檢查組織病理學(xué)檢查 于末次給藥完畢后兩天，剪下

11、各于末次給藥完畢后兩天，剪下各兔進(jìn)針點(diǎn)前方的耳靜脈及其周圍組織一段（長(zhǎng)約兔進(jìn)針點(diǎn)前方的耳靜脈及其周圍組織一段（長(zhǎng)約1.5cm1.5cm）固定于福爾馬林生理鹽水溶液中，送病理學(xué)檢查。固定于福爾馬林生理鹽水溶液中，送病理學(xué)檢查。 圖圖1 0.9%氯化鈉注射液氯化鈉注射液對(duì)照組兔耳靜脈血管對(duì)照組兔耳靜脈血管（HE 3.310） 圖圖2 銀杏葉提取物注射液組兔耳靜脈血管與對(duì)照組比較無明顯改變（HE 3.310）三、體外溶血試驗(yàn)體外溶血試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康? :為確保注射液制劑安全性，檢查制為確保注射液制劑安全性，檢查制劑劑, ,有無溶血和紅細(xì)胞凝集等反應(yīng)。有無溶血和紅細(xì)胞凝集等反應(yīng)。動(dòng)物動(dòng)物: :家兔

12、家兔供試品：蘆丁提取物供試品：蘆丁提取物 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟2% %兔紅細(xì)胞生理鹽水混懸液制備：兔紅細(xì)胞生理鹽水混懸液制備： 取兔取兔1 1只，只，頸動(dòng)脈放血，將血盛于放有玻璃珠的燒杯內(nèi)，頸動(dòng)脈放血，將血盛于放有玻璃珠的燒杯內(nèi)，輕輕搖蕩約輕輕搖蕩約1010分鐘，除去纖維蛋白，分鐘，除去纖維蛋白， 用生理用生理鹽水反復(fù)洗鹽水反復(fù)洗3-43-4次，將所得紅細(xì)胞按其容積，次，將所得紅細(xì)胞按其容積，用生理鹽水稀釋成用生理鹽水稀釋成2%2%的混懸液。的混懸液。實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟試管試管7 7支，編號(hào)后依次排列于試管架上，按表支，編號(hào)后依次排列于試管架上，按表格分別加入格分別加入2%2%兔紅細(xì)胞混懸液和生理鹽

13、水，混兔紅細(xì)胞混懸液和生理鹽水，混勻后置于勻后置于3737 C C水浴中水浴中30min30min，然后向各管內(nèi)加，然后向各管內(nèi)加入不同量的蘆丁提取物注射液，入不同量的蘆丁提取物注射液，第第6 6管為陰性管為陰性對(duì)照對(duì)照，第第7 7管加入蒸餾水作為陽(yáng)性對(duì)照管加入蒸餾水作為陽(yáng)性對(duì)照。各管。各管輕輕搖勻后，置輕輕搖勻后，置3737 C C恒溫水浴中。開始每隔恒溫水浴中。開始每隔1515分鐘觀察分鐘觀察1 1次，次，1 1小時(shí)后每隔小時(shí)后每隔1 1小時(shí)觀察小時(shí)觀察1 1次，共次，共觀 察觀 察 4 4 小 時(shí) （ 雙 管 法 測(cè) 定 ） 。小 時(shí) （ 雙 管 法 測(cè) 定 ） 。試管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 2%兔紅細(xì)胞混懸液(ml) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 生理鹽水(ml) 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.5(蒸餾水)蘆丁提取物注射液(ml) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 結(jié)果 +注：“”表示陰性反應(yīng)；“+”表示陽(yáng)性反應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)全溶血全溶血: :溶液澄明溶液澄明, ,紅色紅色, ,管底無紅細(xì)胞殘留。管底無紅