實(shí)驗(yàn)五 熒光顯微鏡的使用和細(xì)胞的熒光染色_第1頁
實(shí)驗(yàn)五 熒光顯微鏡的使用和細(xì)胞的熒光染色_第2頁
實(shí)驗(yàn)五 熒光顯微鏡的使用和細(xì)胞的熒光染色_第3頁
全文預(yù)覽已結(jié)束

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、實(shí)驗(yàn)五 熒光顯微鏡的使用和細(xì)胞的熒光染色【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹空莆諢晒怙@微鏡的原理和使用；掌握生物材料熒光染色的原理和應(yīng)用?！緦?shí)驗(yàn)原理】吖啶橙（acridine orange，AO）是最經(jīng)典的極靈敏的熒光染料，它可對(duì)細(xì)胞中的DNA和RNA同時(shí)染色而顯示不同顏色的熒光。其激發(fā)峰為492nm，熒光發(fā)射峰為530nm（DNA）、640（RNA），它與雙鏈DNA的結(jié)合方式是嵌入雙鏈之間，而與單鏈DNA和RNA則由靜電吸引堆積在其磷酸根上。在藍(lán)光（502nm）激發(fā)下，細(xì)胞核發(fā)亮綠色熒光（約530nm），核仁和胞質(zhì)RNA發(fā)橘紅色熒光（>580nm）。吖啶橙的陽離子也可以結(jié)合在蛋白質(zhì)、多糖和膜上而發(fā)熒光，但細(xì)胞

2、固定阻抑了這種結(jié)合，從而主要顯示DNA、RNA兩種核酸。【實(shí)驗(yàn)用品】1、 器材熒光顯微鏡、牙簽、載玻片、蓋玻片、滴管、吸水紙。2、 試劑（1）0.1mol/l pH7.0 PBS液A液：NaH2PO4·H2O 2.76g，加蒸餾水至100ml；B液：Na2HPO4·7H2O 5.36g，加蒸餾水至100ml；取A液16.5mlB液33.5mlNaCl 8.5g，用蒸餾水稀釋至100ml。（2）1%吖啶橙原液取0.1g吖啶橙加蒸餾水稀釋至100ml（臨用時(shí)配制0.01%吖啶橙染液：將1%吖啶橙原液用pH7.0 PBS溶液稀釋10倍）。3、 材料口腔黏膜上皮細(xì)胞臨時(shí)制片或人肝癌BEL-7402細(xì)胞爬片?！痉椒ㄅc步驟】（1）取口腔上皮細(xì)胞涂在干凈載玻片上。（2）95%乙醇溶液固定5min。（3）滴加0.01%吖啶橙染液5min。（4）蓋上蓋玻片，吸水紙吸去蓋玻片周圍多余液體，鏡下觀察。【結(jié)果與觀察】熒光顯微鏡下（選用藍(lán)色激發(fā)濾片），可見含DNA的細(xì)胞核顯示黃綠色熒光，含RNA的細(xì)胞質(zhì)及核仁顯示橘紅色熒光體外培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞吖啶橙熒光染色【注意事項(xiàng)】（1）制片后一定要晾干玻片，在進(jìn)行后續(xù)步驟，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落。（2）每種熒光染料，均有自己的最適pH，此時(shí)熒光最強(qiáng)。當(dāng)pH

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論