牛血清蛋白的提取與鑒定

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、掌握血清蛋白的提取與鑒定方法。2、掌握電泳法，鹽析法、透析法以及正確的點(diǎn)樣方法。3、了解設(shè)計(jì)性試驗(yàn)的基本構(gòu)架，方便今后創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行實(shí)驗(yàn)原理 ：（會(huì)用到的幾種試驗(yàn)方法）1、利用蛋白質(zhì)的顯色反應(yīng)，對(duì)牛血清蛋白進(jìn)行定性染色，從而對(duì)分離的物質(zhì)進(jìn)行鑒定。2、鹽析：鹽析一般是指溶液中加入無(wú)機(jī)鹽類（本次試驗(yàn)就采用“飽和的硫酸銨”）而使溶解的物質(zhì)（本次試驗(yàn)提取的是“牛血清蛋白”）析出的過(guò)程 。3、透析：穿過(guò)膜的選擇性擴(kuò)散過(guò)程?？捎糜诜蛛x分子量大小不同的溶質(zhì)，低于膜所截留閾值分子量的物質(zhì)可擴(kuò)散穿過(guò)膜，高于膜截留閾值分子量的物質(zhì)則被保留在半透膜的另一側(cè)。4、電泳：帶電物質(zhì)或細(xì)胞在電場(chǎng)中的泳動(dòng)。根

2、據(jù)大分子或顆粒的電荷、大小和形狀不同，使其在通過(guò)電場(chǎng)中的凝膠或介質(zhì)時(shí)發(fā)生分離的方法。實(shí)驗(yàn)試劑與器材：牛血清、PBS緩沖液、飽和硫酸銨、離心機(jī)、試管、小燒杯、離心管、天平、電泳所需的物件等操作流程：取小 牛血清0.5毫升、PBS液0.5毫升、飽和硫酸銨2.3毫升充分混勻，靜止20分鐘，2500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。 取玻璃紙一張，折成袋形，將離心后的上清液倒入袋內(nèi)，用線扎緊上口（注意要留有空隙），放入裝有自來(lái)水的小燒杯中透析，要不斷振動(dòng)，每隔2分鐘換一次水，共換水15次。 用兩支毛細(xì)管分別將標(biāo)準(zhǔn)液及測(cè)定液點(diǎn)在同一張醋酸纖維素薄膜的無(wú)光澤面上（劃好點(diǎn)樣線并作好標(biāo)記），標(biāo)準(zhǔn)液點(diǎn)一次，測(cè)定液點(diǎn)三次。 鹽析鹽析透析透析點(diǎn)樣點(diǎn)樣將點(diǎn)樣后的膜條置于電泳槽架上，放置時(shí)無(wú)光澤面向下，點(diǎn)樣端置于陰極，平衡5分鐘，開(kāi)電源160伏60分鐘，關(guān)閉電源后用鑷子將膜條取出。 將膜條直接浸于盛有氨基黑10B（萘酚藍(lán)黑）的染料中，染2分鐘取出，立即浸于漂洗液中，分別在漂洗液、中各漂洗5分鐘，直至背景漂洗干凈為止。 電泳電泳染色染色附：PBS（磷酸鹽緩沖液）：是磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉組成，其中磷酸二氫鈉酸性較強(qiáng)。如果血液中的ph值過(guò)高的話，多余的堿就會(huì)與酸磷酸二氫鈉結(jié)合生成磷酸氫二