加味四逆散防治肝損傷的實驗研究

1、加味四逆散防治肝損傷的實驗研究*摘要本實驗旨在觀察加味四逆散抗急性肝損傷的作用。一是采用四氯化碳一次性皮下注射造成急性肝損傷大鼠模型，檢測血清ALT、AST、SOD、MDA、GSH水平及肝組織MDA、GSH水平。二是采用D-氨基半乳糖造成急性大鼠肝損傷模型，檢測血清SOD、MDA、GSH水平，并作病理學(xué)觀察。三是觀察加味四逆散對小鼠的急性毒性作用。結(jié)果表明：加味四逆散能降低CCl4所致的急性肝損傷大鼠模型血清升高的ALT、AST及MDA值，并使降低的SOD及GSH值升高；加味四逆散能降低CCl4所致的急性肝損傷大鼠模型肝組織中升高的MDA值，并使降低的GSH值升高；加味四逆散能降低D-GalN

2、所致的急性肝損傷大鼠模型血清中升高的MDA值，并使降低的SOD及GSH值升高；加味四逆散能使D-GlaN所致的急性肝損傷大鼠模型肝臟的病變程度明顯減輕，尤以變性、壞死的程度減輕明顯；加味四逆散對小鼠的半數(shù)致死量LD50為305.8032.55g/kg。研究表明，加味四逆散具有防治CCl4、D-GalN所致急性肝損傷作用，其抗肝損傷的作用機制與其降酶、抗過氧化作用有關(guān)，且該制劑口服安全無毒。關(guān)鍵詞加味四逆散肝損傷實驗研究中國書分類號R28 Effects of jia Wei Si Ni San (JWSNS) on Liver InjuryPeng Hanguang, et al(Union

3、Hosptial, Tongji Medical University,Wuhan,430022)Abstract：To investigate the protective effects of JWSNS on acute liver injury and the acute toxic effect.Two kinds of liver injury models were employed by ip injection of carbon tetrachloride(CCl4) and D-galac tosamise(D-GalN) respectively. Serum alan

4、ine aminotransferase(ALT),asparate aminotransferase(AST) and superoxide dismutase(SOD),glutathioe(GSH) activites,malondialdehyde(MDA) content in serum,GSH activity and MDA content in liver tissue were measured.The histopathological effects of JWSNS was observed.The results suggested:JWSNS could decr

5、ease ALT,AST activities and MDA content,but improve SOD and GSH activities in acute liver injury induced by CCl4-intoxication;JWSNS could decrease MDA content in liver tissue,but improve its GSH activity in acute liver injury induced by CCl4;JWSNS could decrease serum MDA content,but improve serum S

6、OD and GSH activities in acute liver injury induced by D-GalN;JWSNS could lessen steatois degree,especially inhibit the hepatocytes degeneration and necrosis;The median lethal dose of JWSNS (LD50) was 305.8032.55 g/kg.JWSNS had the marked effects of preventing liver injury,which related to its effec

7、ts of decreasing ALT,AST activities and anti-lipid peroxidation in liver injury.And JWSNS was safe.近年來，國內(nèi)外肝損傷的發(fā)病率有明顯上升趨勢。市場上護肝降酶的藥物并不少見，臨床上相對有效的聯(lián)苯雙脂、甘利欣等藥，停藥后反跳嚴重，且對相當數(shù)量患者無效。因而迫切需要尋求無毒、護肝療效可靠且無反跳的中藥制劑，以適應(yīng)臨床需求。筆者用加味四逆散進行防治肝損傷的動物試驗和臨床實踐研究均取得了滿意效果。為開創(chuàng)新的保肝、護肝、抗肝損傷的有效中藥復(fù)方，提供了先進的科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)對“加味四逆散防治肝損傷的實驗研究”課題

8、介紹于下：1加味四逆散防治CCl4致大鼠急性肝損傷的實驗研究取大鼠60只，隨機分成加味四逆散合劑大、中、小劑量組(72g/kg體重、36g/kg體重、18g/kg體重)，模型組、正常對照組及聯(lián)苯雙脂滴丸組(20.25mg/kg體重)，每組有實驗動物10只。加味四逆散合劑大、中、小劑量組及聯(lián)苯雙脂滴丸組預(yù)防給藥5天，模型組和正常對照組分別給同體積蒸餾水。于末次給藥后2小時，一次性皮下注射CCl40.5ml/100g體重，造成大鼠急性肝損傷模型，造模48小時后處死大鼠，取血及肝組織標本待檢。1.1加味四逆散對CCl4所致急性肝損傷大鼠血清ALT、AST的影響模型組大鼠血清ALT、AST明顯升高(5

9、1.5818.57U/L，56.5014.93U/L)，與正常對照組比較有顯著性差異(正常對照組ALT、AST分別為23.8311.37U/L、27.0010.21U/L，P均0.01)。加味四逆散大、中劑量組ALT值明顯降低(29.1710.95U/L，34.586.73U/L)，與模型組比較有顯著性差異(P0.01)；加味四逆散大、中、小劑量組AST明顯降低，與模型組比較有顯著性差異(P0.01，P0.01，P0.05)。1.2加味四逆散對CCl4所致急性肝損傷大鼠血清中SOD、MDA及GSH的影響造模組大鼠血清SOD值明顯降低(276.6235.05NU/ml)，與正常組比較(458.5

10、284.72NU/ml)有顯著性差異(P0.01)；加味四逆散大劑量組SOD值(429.5055.23NU/ml)明顯升高，與模型組比較，有顯著性差異(P0.01)；中、小劑量組亦有不同程度的升高，但與模型組比較無顯著性差異(P均0.05)。模型組MDA值明顯升高(16.014.33nmol/ml)，與正常組(7.281.06nmol/ml)相比均有顯著性差異(P0.01)；中、小劑量組均有不同程度的降低，但與模型組比較無顯著性差異(P均0.05)。模型組GSH值(17.285.19mg/L)明顯降低，與正常組(51.934.45mg/L)比較有顯著性差異(P0.01)；加味四逆散大、中、小劑

11、量組GSH值(42.933.80mg/L、40.556.13mg/L、27.537.70mg/L)均明顯升高，與模型組比較均有顯著性差異(P0.01，P0.01，P0.05)。1.3加味四逆散對CCl4所致急性肝損傷大鼠肝組織MDA、GSH的影響模型組MDA(12.063.26mmol/ml)明顯升高，與正常組(6.412.59mmol/ml)比較有顯著性差異(P0.05)；加味四逆散大、中、小劑量組MDA值(6.802.35nmol/ml，7.774.67nmol/ml，7.773.19nmol/ml)都明顯降低，與模型組比較有顯著性差異(P0.05，P0.05，P0.05)。模型組肝組織中

12、GSH值(107.811.96mg/L)明顯降低，與正常組比較(138.6130.54mg/L)比較有顯著性差異(P0.05)；加味四逆散大劑量組肝組織GSH值(140.2723.41mg/L)明顯升高，與模型組比較有顯著性差異(P0.05)；中、小劑量組亦有不同程度的增高，但與模型組比較無顯著性差異。2加味四逆散防治D-GalN所致大鼠急性肝損傷的實驗研究實驗方法同CCl4所致急性大鼠肝損傷實驗，用D-GalN取代CCl4，劑量為600mg/kg體重。2.1加味四逆散對D-GalN所致急性肝損傷大鼠血清SOD、GSH、MDA的影響模型組SOD值、GSH值(264.9885.79NU/ml，6

13、.785.30mg/L)均明顯降低，與正常組(450.6124.04NU/ml，20.035.83mg/L)比較，有顯著性差異(P0.01)；加味四逆散大、中、小劑量組SOD、GSH均明顯上升，與模型組比較均具有顯著性差異(P0.05，P0.01)。模型組MDA(14.564.38nmol/ml)比正常組MDA(9.042.87nmol/ml)明顯升高，兩者相比有顯著性差異(P0.05)；加味四逆散大劑量組血清MDA值(9.382.93nmol/ml)則明顯降低，與模型組比較有顯著性差異(P0.05)；中、小劑量組亦有不同程度的降低，但與模型組比較無顯著差異(P0.05)。2.2加味四逆散對D

14、-GalN所致急性肝損傷大鼠肝組織病理學(xué)的改變D-GalN所致急性肝損傷大鼠肝細胞發(fā)生廣泛的水樣變性，胞漿疏松化及混濁腫脹，肝細胞可見點狀和灶狀壞死，可見核碎裂、嗜酸小體及脂肪變，匯合區(qū)炎性細胞浸潤。加味四逆散各防治組的病變程度明顯減輕，尤以變性壞死程度明顯減輕。其中加味四逆散大劑量防治組僅個別肝細胞出現(xiàn)濁腫，基本接近正常組，中、小劑量組肝細胞濁腫、變性程度有所減輕，匯合區(qū)見少量炎性細胞浸潤。3加味四逆散對小鼠的急性毒性試驗取小鼠50只，雌雄各異，隨機分成5組，每組10只，通過預(yù)試驗找出最大致死量為480g/kg(生藥)，最小致死量為196.6g/kg(生藥)，由480g/kg(生藥)開始，按10.80比例用蒸餾水等比稀釋，灌胃給藥，給藥體積為0.4ml/kg體重，2次/d(間隔3小時)，后連續(xù)觀察7天，記錄小鼠毒性反應(yīng)，用Bliss法計算小鼠的半數(shù)致死量LD50為305.832.55g/kg，相當于成人(70kg體重)每日口服生藥劑量的192214倍以上，表明該劑口服安全性較大。本實驗研究表明，加味四逆散能明顯升高CCl4中毒大鼠血清SOD含量，及血清和肝組