糖尿病大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白與頸動脈病變的關系

1、糖尿病大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白與頸動脈病變的關系         10-02-02 15:17:00     編輯：studa20【摘要】  目的：探討血栓調(diào)節(jié)蛋白在糖尿病大鼠頸動脈病變中的作用。方法：Wistar大鼠48只隨機分為A組24只和B組24只，B組注射鏈脲佐菌素制造糖尿病模型。成模后6、10和14周每組處死8只，測定頸動脈內(nèi)中膜厚度、血糖、體重、血栓調(diào)節(jié)蛋白、空腹胰島素、C肽及血脂水平。結果：隨病程延長，B組空腹血糖、血栓調(diào)節(jié)蛋白、總膽固醇、甘油三酯及低密度脂蛋

2、白顯著高于A組，胰島素、C肽及高密度脂蛋白顯著低于A組；B組右頸動脈內(nèi)中膜厚度在10，14周時較A組厚度明顯增加；B組頸動脈內(nèi)中膜厚度與血栓調(diào)節(jié)蛋白呈顯著正相關。結論：糖尿病大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白升高與頸動脈病變顯著相關，血栓調(diào)節(jié)蛋白升高先于頸動脈病理改變的發(fā)生，可能成為糖尿病頸動脈病變發(fā)生的重要早期預測指標。 【關鍵詞】  糖尿?。谎ㄕ{(diào)節(jié)蛋白；頸動脈病變；大鼠    Abstract   Objective: To explore the role and relationship of thrombomodulin（TM） in th

3、e development of carotid artery lesion in DM and  provide the foundation in early stage of carotid artery lesion occurred in DM. Methods: 48 Wistar rats were randomly divided into two groups. There were 24 in both groups respectively. The subjects in group B were injected with streptozotocin (5

4、0 mg/kg). After six, ten and fourteen weeks, their blood samples were obtained to measure the levels of TM，F(xiàn)INS，C-peptide，TG, TC, HDL and LDL, and the carotid artery intima-media thickness (IMT) was also measured.  These data were compared between two groups. Results: There were differences in

5、the levels of FINS , C-peptide, TG, TC, HDL and LDL between group A and group B .The level of TM in group B was much higher than that in group A. The IMT of group B was higher than that of group A. Conclusion:  The increase of TM occurred before visible and measurable carotid artery pathologica

6、l changes. TM could be used as an early index to predict DM carotid artery lesion.    Key words   Diabetes；Thrombomodulin；Carotid artery lesion；Rat    糖尿病心腦血管疾病發(fā)病率高，發(fā)生早、病情重，因此早期診斷、治療十分重要。近年研究表明1，作為血栓前狀態(tài)分子標志物的血栓調(diào)節(jié)蛋白在大血管發(fā)生動脈粥樣硬化的早期就有所增加，可能在加速糖尿病大血管病變方面起著潛在作用，因此日

7、益引起關注。本研究通過測定各階段糖尿病大鼠血漿中血栓調(diào)節(jié)蛋白變化及頸動脈的病理變化，探討在糖尿病動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的各階段血栓調(diào)節(jié)蛋白所起的重要作用，為防治糖尿病動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展尋找一條新的途徑。    1   材料與方法    1.1   材料   （1）實驗動物：選用近交、清潔級Wistar 大鼠48只（山西醫(yī)科大學動物中心提供），12周齡，雄性，體重220250 g；（2）藥物及試劑：鏈脲佐菌素（STZ）購自美國Sigma公司；血糖采用羅氏公司ACCU-CHE

8、K優(yōu)越血糖儀測定；血栓調(diào)節(jié)蛋白、空腹胰島素、C肽、血脂用酶聯(lián)免疫方法測定（Rat）試劑盒購于大連泛邦生物制劑公司，批內(nèi)差異10%；頸動脈內(nèi)中膜厚度的測定。    1.2   實驗方法    1.2.1   分組及劑量   隨機分為正常對照組24只（A組），實驗組24只 （B組），兩組再分為6周、10周和14周組，共計6組。均自由進食進水，12 h光照周期。A組腹腔注射50 mg/kg體重的枸櫞酸緩沖液以pH4.2的0.1 mmol/L作對照。B 組腹腔一次性注射STZ 50

9、mg/kg體重 （以pH4.2的0.1 mmol/L枸櫞酸緩沖液配成0.1%濃度）。72 h測空腹血糖>16.7 mmol/L為造模成功。    1.2.2   標本的采集和處理   造模成功后6、10、14周時兩組各取8只大鼠稱重、剪尾測空腹血糖，腹腔麻醉，分離右頸動脈，心內(nèi)采血6 ml分別置于于含有枸櫞酸鈉抗凝劑的試管和普通試管中各3 ml，離心2500 r/m×15 min，用所分離的血漿測定血栓調(diào)節(jié)蛋白，血清測定空腹胰島素、C肽及血脂。    1.2.3 

10、60; 光鏡、電鏡觀察   取下右頸動脈，置入10%甲醛液，常規(guī)梯度乙醇脫水，石蠟包埋，制備載玻片，光鏡下觀察病理變化。在同上位置連續(xù)切下23個1 mm寬環(huán)，2%戊二醛固定2 h，二甲胂酸鈉緩沖液內(nèi)放置若干天后，1%鋨酸固定2 h，丙酮梯度脫水，618環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，鉛鈾染色，透射電鏡（JEM-100EX Japan）下觀察。    1.2.4   頸動脈內(nèi)中膜厚度的測定   使用四川大學智勝軟件股份有限公司Mias-2000真彩色病理顯微圖像分析系統(tǒng)進行分析。每例標本的病理切片上隨機選取5個不同

11、位置，對頸動脈內(nèi)中膜厚度進行測定，取其均值作為每例標本內(nèi)中膜的厚度。    1.3   統(tǒng)計學方法   所有數(shù)據(jù)采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件處理，結果以±s表示，影響因素的比較采用兩因素析因設計的方差分析，組間比較采用t檢驗和方差分析，兩變量間的相關關系用Pearson直線相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。    2.1.1   由表1、2可見B組大鼠體重在6周時與A組無明顯差別，10、14周時較A組有顯著降低（分別為P<0.05，P<0.

12、01）。B組空腹血糖均值達26.72 ±4.02 mmol/L較A組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），達到糖尿病診斷標準，而A組大鼠空腹血糖變化不明顯?？崭挂葝u素（INS）及C肽、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）在第6、10、14周時較A組均有顯著差異（P<0.01），高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）在6周時兩組間差異無統(tǒng)計學意義。在10周時分別有降低、增高的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義；在14周時HDL、LDL分別明顯低于、高于A組（P<0.05）。    2.1.2   由表3可見B組大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白

13、在第6、10、14周時始終保持上升趨勢，與A組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05，P<0.01）；右頸動脈內(nèi)中膜厚度在6周時較A組增加但不顯著，在10、14周時較A組厚度明顯增加（P<0.01）。    2.1.3   由表3兩因素線性相關分析結果表明，B組頸動脈內(nèi)中膜厚度與血栓調(diào)節(jié)蛋白呈顯著正相關（r=0.876，P<0.01），而A組大鼠頸動脈內(nèi)中膜厚度與血栓調(diào)節(jié)蛋白無相關性。    2.2   組織病理學特征比較    2.2.1   光鏡下組織病理學特征   與A組頸動脈內(nèi)皮細胞和中膜平滑肌細胞排列規(guī)則相比（圖1），B組大鼠在6周時頸動脈內(nèi)膜內(nèi)皮細胞規(guī)則，中膜輕度平滑肌增生（圖2）；隨病程延長，10周、14周時內(nèi)皮細胞排列逐漸紊亂，中膜平滑肌細胞明顯增生