特異性轉(zhuǎn)移因子對(duì)胃癌患者淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響

1、特異性轉(zhuǎn)移因子對(duì)胃癌患者淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響摘要：目的觀察胃癌特異性轉(zhuǎn)移因子對(duì)胃癌患者外周血淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響。方法用胃癌抗原免疫小鼠，取其脾臟經(jīng)勻漿-透析法制備胃癌特異性轉(zhuǎn)移因子，用MTT-比色法檢測(cè)胃癌和消化道其它腫瘤患者外周血淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。結(jié)果胃癌特異性轉(zhuǎn)移因子確有特異促進(jìn)胃癌患者淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的免疫活性(P0.001)，而對(duì)消化道其它腫瘤患者淋巴細(xì)胞無(wú)明顯促進(jìn)增殖作用。特異性轉(zhuǎn)移因子促淋巴細(xì)胞增殖作用明顯優(yōu)于正常轉(zhuǎn)移因子(P0.05)。結(jié)論小鼠來(lái)源的特異性轉(zhuǎn)移因子在體外可特異促進(jìn)胃癌患者淋巴細(xì)胞增殖，提高細(xì)胞免疫功能。關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)移因子；胃腫瘤；MTT；淋巴細(xì)胞中分類(lèi)號(hào)：R7

2、35.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1000-7431(2000)03-0198-03 EFFECT OF SPECIFIC TRANSFER FACTOR ON PROLIFERATION RESPONSE IN VITRO OF PERIPHERAL BLOOD LYMPHOCYTES FROM GASTRIC CANCER PATIENTSMA Xing-ming,ZHAO Jin-chang,GOU Chang-zheng.Department of Microbiology and Immunology,Lanzhou Medical College，Lanzhou 730000,Chi

3、naAbstract：ObjectiveTo observe the effect of specific transter factor (STF) on proliferation response in vitro of peripheral blood lymphocytes from gastric cancer patients. MethodsSTF was extracted by homogenizerdialyzing method from the spleen of mice, which was immunized with human gastric cancer

4、antigen.The MTT-colorimetric assay was used in vitro to test the proliferative response of lymphocytes from gastric cancer patients and from other digestive tract tumor patients. ResultsSTF showed a definite immune activity specifically promoting the proliferative response of lymphocytes from gastri

5、c cancer patients (P0.001), but not to those lymphocytes from other digestive tract tumor patients. This function of this particular STF is better obviously than normal transfer factor (NTF,P0.05). ConclusionSTF obtained from mice promoted specifically in vitro the proliferation of gastric cancer pa

6、tients lymphocytes and improves the cellular immune function. Key words：Transfer factor;MTT；Gastric neoplasms；Lymphocytes特異性轉(zhuǎn)移因子(Specific Transfer Factor STF)具有增強(qiáng)和調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能的作用，能將供者特異性細(xì)胞免疫轉(zhuǎn)給受者，增強(qiáng)受者細(xì)胞免疫功能1。Fudenberg2認(rèn)為轉(zhuǎn)移因子至少有200種以上不同物質(zhì)，本室曾用MIT、MTT-比色法對(duì)胃癌特異性轉(zhuǎn)移因子進(jìn)行活性檢測(cè)，具有增強(qiáng)動(dòng)物細(xì)胞免疫功能的作用，并顯示抗原特異活性3。本實(shí)驗(yàn)用人胃癌抗

7、原免疫動(dòng)物制備特異性轉(zhuǎn)移因子。用MTT-比色法4檢測(cè)胃癌和消化道其它腫瘤患者外周血淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，STF對(duì)胃癌患者淋巴細(xì)胞有特異地激活作用，對(duì)消化道其它腫瘤患者淋巴細(xì)胞無(wú)明顯增殖作用，以期為臨床應(yīng)用STF提供實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。材料和方法1.主要儀器及試劑DG3022型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀：國(guó)營(yíng)華東電子管廠(chǎng)；島津UV120-02型分光光度計(jì)：日本；GZS01型外吸收分光儀：北京分析儀器廠(chǎng)；3164型CO2孵箱：Forma Scientive USA;MTT:為Fluka分裝；胃癌抗原：本室自制3，批號(hào)920610，-20 備用。2.被測(cè)淋巴細(xì)胞患者外周血淋巴細(xì)胞胃癌44例，食管癌9例，直腸癌7例，年齡和

8、性別構(gòu)成無(wú)明顯差別。3.胃癌特異性轉(zhuǎn)移因子制備3用胃癌抗原加福氏完全佐劑免疫小鼠兩月后，皮試抗原反應(yīng)陽(yáng)性即取脾臟，經(jīng)勻漿-透析法，過(guò)凝膠柱(Sephadex G25 150200目)，在紫外吸收分析儀(280 nm)監(jiān)控下制備STF。同時(shí)取未免疫的健康小鼠脾臟制備正常轉(zhuǎn)移因子(Normal Transfer Factor NTF)，規(guī)定紫外吸收最高峰處(215 nm)8.0 ABS為1個(gè)單位U)，測(cè)定E250 nm，1 cm2.0者用于實(shí)驗(yàn)，STF、NTF使用濃度均為10-2U/ml。4.MTT-比色法4取肝素抗凝血5 ml采用Ficoll-Hypague密度梯度離心法分離腫瘤患者外周血淋巴細(xì)

9、胞，1640液洗滌3次，用細(xì)胞完全培養(yǎng)液(含10 %小牛血清、雙抗、谷氨酰胺的1640液)調(diào)淋巴細(xì)胞數(shù)至2109/L，設(shè)實(shí)驗(yàn)組STF和NTF(10-2U/ml)及對(duì)照組(Control group,不加轉(zhuǎn)移因子)，于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置5 % CO2溫箱37 培養(yǎng)68 h，離心后棄上清液，加等量不完全細(xì)胞培養(yǎng)液(無(wú)小牛血清的完全培養(yǎng)液)轉(zhuǎn)入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，加入MTT試劑，培養(yǎng)46 h，酶標(biāo)儀(570 nm)測(cè)定OD值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。表1STF對(duì)消化道腫瘤患者淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響分組例數(shù)STF(OD，s)NTF(OD，s)對(duì)照(OD，s)胃癌441.0910.5210.8

10、160.4530.7150.362其它消化道腫瘤160.7460.1880.8040.1700.7800.215t檢驗(yàn)：與對(duì)照組比P0.001；與NTF比P0.05；與其它消化道腫瘤比P0.01。 表2TF轉(zhuǎn)化指數(shù)(實(shí)驗(yàn)組/對(duì)照組)分組例數(shù)STF-TI(s)NTF-TI(s)t-test胃癌441.0810.2260.9040.187P0.001其它消化道腫瘤160.9130.1580.9280.251P0.05t-testP0.01P0.05結(jié)果 STF對(duì)胃癌、消化道其它腫瘤患者外周血淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響結(jié)果(見(jiàn)表1)胃癌淋巴細(xì)胞加STF組的OD值大于NTF組(P0.05)及對(duì)照組(P0.

11、001)。STF對(duì)胃癌患者淋巴細(xì)胞有明顯促進(jìn)增殖作用，而對(duì)消化道其它腫瘤患者淋巴細(xì)胞無(wú)明顯促進(jìn)增殖反應(yīng)作用，兩者差異顯著(P0.01)。表明STF具有明顯的特異免疫活性，加NTF對(duì)消化道腫瘤患者淋巴細(xì)胞無(wú)明顯促進(jìn)增殖作用(P0.05)，表2顯示淋轉(zhuǎn)指數(shù)(實(shí)驗(yàn)組/對(duì)照組)。討論STF是免疫淋巴細(xì)胞內(nèi)的一種可透析小分子物質(zhì)，即多肽和多核苷酸，對(duì)免疫功能失調(diào)具有雙向調(diào)節(jié)作用5，可以激發(fā)非致敏淋巴細(xì)胞為致敏淋巴細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞免疫效應(yīng)，即抗腫瘤作用6。文獻(xiàn)報(bào)道5以對(duì)癌抗原反應(yīng)陽(yáng)性的人作為制備STF的供者，制備相應(yīng)癌瘤的透析物，對(duì)18名胃腸道癌患者進(jìn)行抗癌治療，發(fā)現(xiàn)有80 %胃腸道癌組患者臨床癥狀得到改善，

12、存活期延長(zhǎng)。本研究證明STF在體外有明顯的促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，顯示出特異性的免疫促進(jìn)活性，使胃癌患者細(xì)胞免疫得以恢復(fù)。NTF未表現(xiàn)出明顯促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的作用。提示胃癌特異性轉(zhuǎn)移因子應(yīng)用于體內(nèi)可能有特異抗腫瘤作用，尚需一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。轉(zhuǎn)移因子其最大吸收波長(zhǎng)(251 nm)，及該波長(zhǎng)下的吸收值(A251)作為質(zhì)控指標(biāo)之一，本研究所用STF于1992年制備(4以下貯存?zhèn)溆?，1995年3及1999年用MTT-比色法檢測(cè)4以下貯存均有穩(wěn)定活性，4以上貯存的STF其活性明顯下降，但其最大吸收波長(zhǎng)(251 m)，及該波長(zhǎng)下的吸收值(A251)這兩項(xiàng)質(zhì)控指標(biāo)并無(wú)改變。因此對(duì)STF的質(zhì)控必須建立在測(cè)定其

13、特異性免疫活性的基礎(chǔ)上，這一點(diǎn)與王芳等7報(bào)道結(jié)果一致。用胃癌患者外周血淋巴細(xì)胞檢測(cè)小鼠脾制備的STF，表現(xiàn)出STF對(duì)淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)有明顯的加強(qiáng)，顯示STF作用無(wú)種屬特異性。在體外實(shí)驗(yàn)中，可使人淋巴細(xì)胞發(fā)生增殖，提高細(xì)胞免疫力。STF亦能促進(jìn)化療期胃癌患者外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化(P0.05)。表明STF可緩解或解除細(xì)胞免疫抑制狀態(tài)。作者簡(jiǎn)介：馬興銘，男，本科，講師。作者單位：馬興銘（蘭州醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)免疫學(xué)教研室 蘭州 730000）趙進(jìn)昌（蘭州醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)免疫學(xué)教研室 蘭州 730000）茍長(zhǎng)征(蘭州醫(yī)學(xué)院一附院腫瘤科)參考文獻(xiàn)1王立人.免疫應(yīng)答M.見(jiàn)：畢愛(ài)華主編.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)M.第2版.北京：

14、人民醫(yī)出版社，1997：1202Fudenberg HH. Transfer factorM. In: Mayer V and Borvak J, eds. Leukocyte dialysates and transfer factorM. Bratislava,Czechoslovakia:Institude of Virology,Slovak Academy of Sciences, 1987:23趙進(jìn)昌，馬興銘，王雪梅，等.胃癌特異性轉(zhuǎn)移因子研制及活性檢測(cè)J.腫瘤防治研究，1997，24(6)：3614周道洪，沈元珊，趙曼瑞，測(cè)定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和鼠IL-2活性的新方法-MTT比色分析法J.中國(guó)免疫學(xué)雜志，1986，2(1)：395李叢壁，方天祺.特異性轉(zhuǎn)移因子的免疫活性及臨床應(yīng)用J.中國(guó)生化藥物雜志，1994，15(1)：706Lawrence HS, Borkowsy W. A new