生物多肽工藝流程

1、精選文本生物多肽工藝流程一、固相肽合成(1)投料：樹(shù)脂加入固相合成儀，加入DCM溶脹，抽干后加入DMF洗滌，洗滌結(jié)束抽干備用。(2)縮合：將氨基酸用一定體積的DMF溶解，加入縮合劑活化后投入固相合成儀，補(bǔ)充DMF至反應(yīng)濃度，攪拌反應(yīng)。(3)脫除保護(hù)基：以Kaiser試劑檢測(cè)反應(yīng)程度，反應(yīng)結(jié)束后抽干溶劑，DMF洗滌，加入PIP/DMF溶液脫除保護(hù)基，以Kaiser試劑檢測(cè)反應(yīng)程度，反應(yīng)完畢抽干溶劑，DMF洗滌，準(zhǔn)備加入下一個(gè)氨基酸。(4)縮合循環(huán)：按照樹(shù)脂序列依次連接氨基酸，按照“脫保護(hù)洗滌活化氨基酸投料縮合洗滌”步驟進(jìn)行縮合循環(huán)操作，按照氨基酸序列完成剩余n個(gè)氨基酸的縮合。(5)出料：合成結(jié)束

2、之后用IPA和DCM交叉洗滌樹(shù)脂，完成樹(shù)脂收縮收縮，出料至不銹鋼托盤(pán)。(6)樹(shù)脂干燥：樹(shù)脂在真空干燥箱中室溫干燥，干燥完畢稱重，計(jì)算收率。(7)有機(jī)廢液回收，集中處理。(8)清場(chǎng)：操作結(jié)束后操作人員及時(shí)清場(chǎng)。二、樹(shù)脂裂解(1)配液：按照裂解液成分比例配置裂解液，并提前置冰柜中冷藏保存。(2)投料：肽樹(shù)脂加入反應(yīng)釜中，加入預(yù)冷的裂解液，攪拌反應(yīng)。(3)出料：裂解結(jié)束后放出反應(yīng)液，抽濾除去樹(shù)脂并以TFA洗滌。(4)濃縮：裂解液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀室溫濃縮至小體積。(5)析出：濃縮后的反應(yīng)液傾入預(yù)冷的甲基叔丁基醚(簡(jiǎn)稱醚)中，攪拌使析出大量固體。(6)離心：濁液離心，并用預(yù)冷的醚洗滌。(7)粗肽干燥：滌完

3、成的粗肽轉(zhuǎn)至真空干燥箱中室溫干燥。(8)有機(jī)廢液回收，集中處理。(9)清場(chǎng)：操作結(jié)束后操作人員及時(shí)清場(chǎng)。三、多肽HPLC純化(1)溶解：操作人員將粗肽溶解，調(diào)節(jié)PH至工藝規(guī)定范圍。(2)過(guò)濾：濾去粗肽溶液中不溶物，過(guò)濾ACN和純化水。(3)配制純化液：根據(jù)工藝內(nèi)容配制A相(乙腈)和B相(水)。(4)純化：在制備型液相上進(jìn)行純化，分別接收流份。(5)檢驗(yàn)及返工：對(duì)制備流份進(jìn)行檢查，合并合格流份，其他部分根據(jù)需要再次純化。(6)廢棄流動(dòng)相按有機(jī)廢液回收，集中處理。四、濃縮過(guò)濾凍干(1)濃縮：合并濾液旋蒸除去有機(jī)溶劑，有機(jī)廢液回收，集中處理。(2)過(guò)濾：濃縮后水相無(wú)菌過(guò)濾。(3)凍干：濾液置凍干機(jī)中，設(shè)定升溫程序凍干。(4)出箱：出料、加內(nèi)包。五、質(zhì)量檢查、入庫(kù)工藝流程圖如下所示多肽合成儀樹(shù)脂以此三步為一周期按多肽序列重復(fù)直至連接完成樹(shù)脂裂解沉淀固相肽合