大實(shí)驗(yàn)六 檸檬酸搖瓶發(fā)酵及提取

1、大實(shí)驗(yàn)六大實(shí)驗(yàn)六 檸檬酸搖瓶發(fā)酵及提取檸檬酸搖瓶發(fā)酵及提取 1 1、學(xué)習(xí)掌握檸檬酸液體發(fā)酵工藝、學(xué)習(xí)掌握檸檬酸液體發(fā)酵工藝2 2、了解檸檬酸提取工藝、了解檸檬酸提取工藝實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊髮?shí)驗(yàn)?zāi)康囊髮?shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 原原 理理實(shí)驗(yàn)原理 (continued)實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 步步 驟驟1 1、斜面菌種制備、斜面菌種制備（已備好）（已備好）黑曲霉（黑曲霉（Aspergillus niger）；）；PDA培養(yǎng)基；培養(yǎng)基；28，34d實(shí)驗(yàn)步驟 (continued)2、發(fā)酵培養(yǎng)基配制及分裝、發(fā)酵培養(yǎng)基配制及分裝 （以實(shí)驗(yàn)室為單位）（以實(shí)驗(yàn)室為單位） 配方：配方：土豆土豆 200g 煮汁、煮汁、 蔗糖蔗糖100g、NH

2、4NO3 2g，KCl 0.15g，MgSO4 0.25g，水，水1000ml；pH5 分裝：分裝：每小組每小組1瓶，每瓶瓶，每瓶100ml；棉塞或；棉塞或8層紗布；層紗布；0.08Mpa，20min 實(shí)驗(yàn)步驟 (continued)3 3、制備孢子懸液及接種、制備孢子懸液及接種 （以小組為單位）（以小組為單位） 向每支斜面菌種加入向每支斜面菌種加入5ml5ml無菌水，用接種環(huán)刮菌苔表無菌水，用接種環(huán)刮菌苔表面或用無菌面或用無菌tiptip頭輕輕吹打制備孢子懸液；將懸液接頭輕輕吹打制備孢子懸液；將懸液接入滅菌并冷卻至室溫的培養(yǎng)基。入滅菌并冷卻至室溫的培養(yǎng)基。 實(shí)驗(yàn)步驟 (continued)4

3、 4、搖瓶發(fā)酵及參數(shù)檢測、搖瓶發(fā)酵及參數(shù)檢測 200rpm，32；發(fā)酵；發(fā)酵4天天接種后每接種后每24h取樣測定、記錄發(fā)酵液取樣測定、記錄發(fā)酵液pH。 實(shí)驗(yàn)步驟 (continued)下次實(shí)驗(yàn)下次實(shí)驗(yàn) 5 5、酸度測定、酸度測定 酸度酸度是指是指100ml發(fā)酵液所含檸檬酸的克數(shù)。發(fā)酵液所含檸檬酸的克數(shù)。方法：方法：取發(fā)酵液濾液或離心液取發(fā)酵液濾液或離心液1ml，以酚酞為指示劑，以酚酞為指示劑，用用0.14290.1430mol/L標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液滴定至淡溶液滴定至淡粉紅色，所消耗的粉紅色，所消耗的NaOH毫升數(shù)即為發(fā)酵液酸度。毫升數(shù)即為發(fā)酵液酸度。 實(shí)驗(yàn)步驟 (continued)6、檸檬

4、酸提取、檸檬酸提?。ú糠郑ú糠郑?1） 2C6H8O7H2O + CaCO3 Ca3(C6H5O7)24H2O + 3CO2 + H2O 2） Ca3(C6H5O7)24H2O + 3H2SO4 + 4H2O 2C6H8O7H2O + 3CaSO42H2O 3 3）濃縮結(jié)晶）濃縮結(jié)晶 實(shí)驗(yàn)步驟 (continued) 發(fā)酵液經(jīng)發(fā)酵液經(jīng)24層紗布過濾（如需要可再用濾紙過層紗布過濾（如需要可再用濾紙過濾一次）或經(jīng)離心（菌絲球很小的過濾太慢）取濾液；濾一次）或經(jīng)離心（菌絲球很小的過濾太慢）取濾液； 加熱至加熱至70，慢慢加入適量，慢慢加入適量CaCO3，中和至，中和至pH6.06.5； 過濾得檸檬酸鈣。過濾得檸檬酸鈣。 實(shí)驗(yàn)步驟 (continued)實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告1 1、實(shí)驗(yàn)原理、方法步驟、結(jié)果及分析、實(shí)驗(yàn)原理、方法步驟、結(jié)果及分析 2、思考題、思考題準(zhǔn)準(zhǔn) 備：備：1、發(fā)酵培養(yǎng)基：發(fā)酵培養(yǎng)基：（以實(shí)驗(yàn)室為單位配制）（以實(shí)驗(yàn)室為單位配制）2、