不同生長期瑞香狼毒和牛心樸子總黃酮含量研究

1、不同生長期瑞香狼毒和牛心樸子總黃酮含量研究        【摘要】     目的分析測定不同生長期瑞香狼毒和牛心樸子的總黃酮含量。方法采用分光光度法分別對不同生長期瑞香狼毒和牛心樸子的總黃酮含量進行分析測定。結(jié)果不同生長期內(nèi)，瑞香狼毒和牛心樸子總黃酮含量變化趨勢不同，但都是9月份總黃酮含量最高。瑞香狼毒總黃酮含量在7、8月份時明顯較低，分別為6.3 mg/g和7.8 mg/g，9月份最高，達到18.5 mg/g; 牛心樸子總黃酮含量在8月份時較低，為12.5 mg/

2、g，9月份最高，為16.3 mg/g。結(jié)論以黃酮類化合物為有效成分的瑞香狼毒和牛心樸子的最佳采收期均為9月份。     【關(guān)鍵詞】  不同生長期;瑞香狼毒;牛心樸子;總黃酮    瑞香狼毒Stellera chamaejasme L.，又名斷腸草、紅狼毒，為瑞香科狼毒屬多年生根莖型草本植物，廣泛分布于東北、華北、西南、西北、內(nèi)蒙古、黑龍江等地的干草原、沙質(zhì)草原和典型草原的退化草地上1。牛心樸子Cynanchum komarovii Al.Ijirski為蘿科鵝絨藤屬多年生草本植物，俗稱老瓜頭、蘆心草，主要

3、分布于內(nèi)蒙古、寧夏、甘肅、青海、陜西等地2。瑞香狼毒和牛心樸子均為草原退化植物，在內(nèi)蒙古地區(qū)的一些退化草場，瑞香狼毒或牛心樸子大面積連片生長，已成為退化草場的建群種植物，導(dǎo)致草原質(zhì)量和經(jīng)濟生產(chǎn)力嚴重下降。瑞香狼毒和牛心樸子雖然具有一定毒性，牲畜不宜采食，但二者同時又是具有不同藥用價值的中草藥。如瑞香狼毒具有逐水、破積、祛痰、殺蟲、止痛的功能1，35，在抗腫瘤、抗菌、抗病毒(尤其是艾滋病毒)、抗癲癇等方面有獨到之處1，6。牛心樸子具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抑菌功效，對呼吸系統(tǒng)常見病的咳、痰、喘癥狀可有緩解治療作用79，此外，牛心樸子還是一種很好的蜜源植物10，在西北草原養(yǎng)蜂業(yè)中占有重要地位。黃酮類化合物是

4、瑞香狼毒和牛心樸子的主要有效成分之一，對其在兩種植物中的含量測定雖曾有報道1115，但不同生長期黃酮含量的動態(tài)研究尚未見報道。為此，本文對內(nèi)蒙古鄂爾多斯草原不同生長期的瑞香狼毒和牛心樸子總黃酮含量分別進行了分析測定并加以比較研究，以期為瑞香狼毒和牛心樸子的綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。1材料與儀器1.1材料瑞香狼毒和牛心樸子試樣分別于2008-0509每月上旬采自內(nèi)蒙古自治區(qū)鄂爾多斯草原，經(jīng)鄂爾多斯市林業(yè)工作站鑒定。所有實驗材料取地上部分，去除花、果實，去雜，自然晾干后備用。1.2試劑 蘆丁標準品，BR，國藥集團化學(xué)試劑有限公司;95%乙醇、氫氧化鈉、硝酸鋁、石油醚、正丁醇，AR，北京化工廠;亞硝

5、酸鈉，AR，國藥集團化學(xué)試劑有限公司。1.3儀器SP-2000型分光光度計，上海光譜儀器有限公司。2方法2.1定性檢驗稱取粉碎20目的瑞香狼毒和牛心樸子各5 g，分別用95%乙醇于索氏提取器中回流提取2 h，提取液濃縮近干，用30%乙醇溶解。各取溶液1 ml于試管中，加適量鎂粉，再逐滴加入鹽酸，兩者反應(yīng)均呈現(xiàn)桃紅色，為黃酮類化合物正反應(yīng)。2.2標準曲線的繪制精密稱取120干燥恒重的無水蘆丁(黃酮標準對照品)20 mg，用60%乙醇定容于100 ml容量瓶中，搖勻。精密量取25.0ml置于50 ml容量瓶中，加水稀釋至刻度(0.1 mg蘆丁/m1)。精密量取上述溶液0.0，1.0，2.0，3.0

6、，4.0，5.0 ml分別置于10 ml容量瓶中，分別精密加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 ml，搖勻，靜置6 min，加10%硝酸鋁溶液0.3 ml，搖勻，再靜置6 min，加1 mol/l氫氧化鈉溶液4 ml，分別用30%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min，置于比色皿中，用SP-2000型分光光度計，在510 nm波長處測定吸光度。以溶液濃度C(mg/ml)為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線圖，并作線性回歸，求出回歸方程。2.3樣品總黃酮含量的測定精密稱取粉碎20目的材料(不同生長期的瑞香狼毒及牛心樸子)各5 g，分別用95%乙醇于索氏提取器中提取，至提取液無黃酮反應(yīng)為止。將提取液

7、濃縮近干，加10 ml蒸餾水溶解后，用石油醚萃取脫脂，棄去石油醚層。水層用正丁醇萃取，至水溶液無黃酮反應(yīng)為止。減壓回收正丁醇至近干，加適量30%乙醇溶液溶解，分別移至50 ml容量瓶中，用30%乙醇溶液稀釋至刻度。精密量取此溶液4.0 ml，分置于100 ml容量瓶中，用30%乙醇稀釋至刻度。精密量取上述樣品液3.0，4.0，5.0 ml，按照上述標準曲線的繪制方法，將樣品溶液顯色后測定吸光度，根據(jù)回歸方程求出相應(yīng)的濃度，用下述公式分別計算瑞香狼毒及牛心樸子的總黃酮含量：總黃酮提取率(%)=c×10×100×504m×1 000×取樣毫升數(shù)&#

8、215;100%式中：m為樣品材料粉末的重量(g);c為樣品材料總黃酮的濃度(g/ml)。2.4穩(wěn)定性實驗分別取瑞香狼毒和牛心樸子樣品液，在不同時間內(nèi)按標準曲線方法分別測定其吸光度。2.5精密度實驗精密吸取蘆丁對照品溶液1.0ml，5份，置于10 ml容量瓶中，分別測定其吸光度。2.6重復(fù)性實驗分別精密稱取20目的樣品材料5份，每份5克，按樣品總黃酮含量的測定方法做平行試驗，進行樣品總黃酮含量的測定。2.7加樣回收率實驗精密稱取粉碎20目樣品材料5 g，5份，分別加一定量的標準蘆丁。按樣品總黃酮含量測定方法提取后測定其含量，用以下公式計算回收率：回收率(%)=混合后總黃酮量-樣品總黃酮量蘆丁加

9、入量×100%3結(jié)果3.1蘆丁標準曲線標準曲線如圖1所示，用最小二乘法作線性回歸，得蘆丁的回歸方程為：Y=9.531 4X-0.002 6，r=0.999 8結(jié)果表明在00.06 mg/ml的范圍內(nèi)，吸光度與濃度呈良好的線性關(guān)系。圖1蘆丁標準曲線3.2不同生長期瑞香狼毒和牛心樸子總黃酮含量的比較分析3.2.1瑞香狼毒總黃酮含量測定59月份瑞香狼毒總黃酮含量測定結(jié)果(各月份總黃酮含量均為5次平行試驗的平均值)見圖2所示。結(jié)果表明，不同生長期瑞香狼毒總黃酮含量不同，9月份含量最高，達1.85%(即18.5mg/g)，7、8月份含量明顯較低，分別為0.63%(即6.3mg/g)和0.78%

10、(即7.8mg/g);各月份含量高低順序為：9月份>6月份>5月份>8月份>7月份。圖2不同生長期瑞香狼毒總黃酮含量比較3.2.2牛心樸子總黃酮含量測定59月份牛心樸子總黃酮含量測定結(jié)果(各月份總黃酮含量均為5次平行試驗的平均值)見圖3。結(jié)果表明，整個生長期內(nèi)牛心樸子總黃酮含量變化趨勢與瑞香狼毒不同，但仍是9月份總黃酮含量最高，達1.63%(即16.3 mg/g)，7月份含量與9月份接近，為1.61%(即16.1 mg/g);各月份含量高低順序為：9月份>7月份>5月份>6月份>8月份。圖3不同生長期牛心樸子總黃酮含量比較實驗結(jié)果表明，整個生長期

11、內(nèi)，瑞香狼毒和牛心樸子總黃酮含量均是9月份含量最高，說明瑞香狼毒和牛心樸子在9月份收獲，其有效成分黃酮類化合物的含量較高，應(yīng)具有較強的藥效，若對其加以開發(fā)利用將能獲得更好的利用價值。3.2.3穩(wěn)定性實驗結(jié)果瑞香狼毒和牛心樸子樣品穩(wěn)定性實驗(以9月份樣品為例)結(jié)果見圖4。樣品乙醇提取液加入顯色劑顯色后，顯色溶液在40 min內(nèi)穩(wěn)定，40 min后吸光度明顯下降。這是因為天然黃酮類化合物在結(jié)構(gòu)上往往存在有多個酚羥基，在強堿性條件下，黃酮母核上的酚羥基易被氧化而褪色。故顯色一定時間后，由于黃酮類化合物被氧化，致使吸光度嚴重下降。因此，當(dāng)樣品溶液加入硝酸鋁顯色后，應(yīng)在40 min內(nèi)測定吸光度，否則顯色

12、時間過長，溶液顏色變淡甚至消失，吸光度值減小至喪失。圖4顯色液的穩(wěn)定性曲線3.2.4精密度實驗結(jié)果見表1。由表1可知，RSD為2.85%，小于5%，表明實驗結(jié)果的精密度良好。表1精密度實驗結(jié)果3.2.5重復(fù)性實驗結(jié)果見表2。表2重復(fù)性實驗結(jié)果3.2.6加樣回收率實驗結(jié)果見表3。結(jié)果表明，瑞香狼毒和牛心樸子各月份平均回收率均在97%以上，且RSD值均小于5%，說明瑞香狼毒和牛心樸子試驗的回收率均較高，試驗相對標準偏差較小，說明應(yīng)用此工藝提取、測定瑞香狼毒和牛心樸子總黃酮含量是可取的。表3加樣回收率實驗結(jié)果本研究以乙醇為溶劑用索氏提取法提取不同生長期瑞香狼毒和牛心樸子總黃酮，采用分光光度法進行含量

13、測定。從實驗的精密度、回收率、穩(wěn)定性和重復(fù)性等試驗數(shù)據(jù)表明，該項研究方法穩(wěn)定可靠，測定數(shù)據(jù)重復(fù)可信，且操作簡便易行，不僅可以用于研究瑞香狼毒和牛心樸子的總黃酮含量，也為與之相似的草本植物總黃酮含量的測定提供借鑒。4結(jié)論實驗結(jié)果表明，9月份瑞香狼毒和牛心樸子的總黃酮含量均高于其他月份。黃酮類化合物是植物生長過程中產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，植物體內(nèi)次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生和積累與植物的生長發(fā)育程度以及外界環(huán)境因素密切相關(guān)。9月鄂爾多斯草原已是仲秋時節(jié)，植物生長進入生長末期，植物經(jīng)過一個生長季的發(fā)育生長，一些次生代謝產(chǎn)物有了較多的積累，這可能是兩種植物中黃酮類化合物含量9月份要高于其他月份的原因。所以若作為藥用

14、或者在研究和利用瑞香狼毒和牛心樸子的黃酮類化合物時，9月份是樣品采集的較好時期。本實驗結(jié)果為草原退化有毒植物瑞香狼毒和牛心樸子的開發(fā)和利用提供了一定的科學(xué)依據(jù)。黃酮類化合物是藥用植物中主要活性成分之一，此類化合物具有多種藥理作用。目前對牛心樸子的研究報道中，多為對其生物堿成分的研究。而實驗研究表明，牛心樸子中總黃酮含量也較高，這為其開發(fā)利用提供了新的理論依據(jù)。瑞香狼毒和牛心樸子在我國干旱沙質(zhì)草原、退化草場分布廣泛，資源豐富，除具有一定的經(jīng)濟效益外，在沙質(zhì)草原和嚴重退化草地上也具有一定的生態(tài)作用，應(yīng)加強和完善對其各部分的科學(xué)研究，以更好地實現(xiàn)綜合利用。   

15、0;【參考文獻】  1卓兆蓮，高英，李衛(wèi)民. 蒙藥瑞香狼毒化學(xué)成分研究進展J.中國藥房，2007，18(27)：2152.2米海莉，張曦燕，李越鯤，等. 牛心樸子總生物堿提取及精制方法研究初報J.中國農(nóng)學(xué)通報，2006，22(6)：464.3趙奎君，徐國鈞，金蓉鸞，等.常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究(南方協(xié)助組第2冊)M.福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1997：184.4金賢蘭.中藥狼毒的藥理作用及臨床應(yīng)用J.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2008，24(20)：3101.5張國洲，王亞維. 瑞香狼毒殺蟲活性成分的提取與分離(I)J.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2000，27(4)：340.6魏春雁. 瑞香狼毒化學(xué)成分與生物活性研究的回顧與展望J.中國中藥學(xué)雜志，2001，36(9)：577.7張永康，何生虎，李勇. 牛心樸子生物堿的鎮(zhèn)痛抗炎作用試驗J.動物醫(yī)學(xué)進展，2006，27(11)：99.8祁利民，楊潔. 寧夏老瓜頭生物總堿的藥理活性初步研究J.寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2002，24 (6)：398.9呂燕萍，梁資福，宋京都，等. 老瓜頭的止咳、祛痰及平喘作用J.中國中藥雜志，1997，22(4)：242.10謝鶴. 談老瓜頭蜜源在西北地區(qū)養(yǎng)蜂業(yè)中的地位J.養(yǎng)蜂科技，2001，5：36.11曲玲，曹