熒光光度法測定榕樹葉總黃酮含量的研究

1、熒光光度法測定榕樹葉總黃酮含量的研究         08-06-03 11:08:00     編輯：studa20          作者：黃鎖義，龍鳳，梁宇，韋國鋒【關(guān)鍵詞】  熒光光度法；,榕樹葉；,總黃酮；,測定摘要：目的根據(jù)黃酮類化合物能與 Al3+ 形成穩(wěn)定的熒光絡(luò)合物,建立一種測定榕樹葉總黃酮的新方法。方法用60%乙醇加熱回流提取榕樹葉有效成分，以蘆丁為標(biāo)樣,采

2、用熒光分光度法，在波長 =460 nm下，測定榕樹葉中總黃酮含量，并進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性。結(jié)果線性范圍在 020 gml1 之間，線性回歸方程:Y=0.450 0X+17.533 3 ，相關(guān)系數(shù)r=0.997 6 ，平均回收率99.8%100.3% ，相對標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)=1.04% 。結(jié)論該法操作簡便、快速、準(zhǔn)確,具有良好的分析應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞：熒光光度法；  榕樹葉；  總黃酮；  測定Determination of Total Flavanoid in Leaves of Banyan by SpectrofluorimetryAbstrac

3、t：ObjectiveOn the basis of reaction of total flavanoid with alumimum ion to form  fluorescent material，the new method of determining total flavanoid in leaves of banyan was  established.MethodsUsing 60% ethanol by continuous themral reflux to extract the banyan leaves,taking rutin as stand

4、ard sample, selecting wavelength 460 nm with      spectrofluorophotometer,determining content of total flavanoid,then inspect the accuracy by  recovery test.ResultsThe range of linearity with concentration of rutin  was between 020 gml1，linearity relationship Y=0.4

5、50 0X+17.533 3,correlativity was 0.997 6，average rate of recovery was 99.8%100.3%, RSD  was 1.04%.ConclusionThe method was simple ,rapid ,accurate and has bright future on   analysis application.Key words：Spectrofluorimetry；  Leaves of banyan；  Total  flavanoid；  D

6、etermination    黃酮類（flavontes）化合物是植物光合作用產(chǎn)生的一大類天然產(chǎn)物，已知的此類化合物約有2 000多種，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進(jìn)入脂肪組織，進(jìn)而體現(xiàn)出如下功能：消除疲勞、保護(hù)血管、防動脈硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細(xì)胞的功能。黃酮類化合物具有抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治

7、療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化抗衰老、抗輻射等作用15。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點(diǎn)倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目。榕樹（Banyan），是?？崎艑贌o花果類植物，全世界有800多種，主要分布在熱帶亞熱帶地區(qū)。我國榕屬植物約100種，是熱帶雨林中的關(guān)鍵種類。榕樹葉，性涼，主治感冒、風(fēng)熱、腸炎、痢疾、百日咳、咽喉腫痛、濕疹、痔瘡及麻疹不透6。研究表明7，黃酮類化合物是榕樹葉的主要有效成分之一，具有多種生物活性。榕樹葉含三萜苷、黃酮苷、酸性樹脂、鞣質(zhì)、多酚類等，其中黃酮類和內(nèi)酯類等有效成分對治療冠心病、老年性癡呆、腦血栓、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和消除自由基

8、、抑菌、抗癌等方面有顯著效果，無毒副作用，并以此開發(fā)出多種藥品和保健食品。目前對銀杏類黃酮的研究較多，但對于榕樹葉黃酮類化合物的研究還相對缺乏7。近年來，有關(guān)榕樹葉總黃酮含量的檢測采用紫外分光光度(UV)法7，紫外分光光度(UV)法的實(shí)驗(yàn)原理是根據(jù)黃酮類物質(zhì)與鋁離子形成穩(wěn)定的絡(luò)合物，并產(chǎn)生特征吸收光譜而進(jìn)行測定。該方法雖然操作簡便，成本低，但是，由于榕樹葉中成分復(fù)雜，富含多種酚類物質(zhì)，對吸光值產(chǎn)生干擾，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性8。因此，為了尋求操作簡便、成本低、更加準(zhǔn)確的檢測方法，本文根據(jù)黃酮類化合物能與鋁離子形成穩(wěn)定的熒光絡(luò)合物，提出采用熒光光度法測定總黃酮的含量。1  材料與設(shè)備96

9、0MC型熒光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司），SHBIII型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司），F(xiàn)A 1104型電子天平（上海天平儀器廠），索氏提取器，蘆丁對照品（中國生物制品檢定所），榕樹葉（小葉榕），200505采自右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院院內(nèi)，經(jīng)100烘干12 h，粉碎，備用；其他試劑均為分析純。2  原理和方法2.1  原理  紫外分光光度(UV)法的原理是根據(jù)黃酮類物質(zhì)與鋁離子形成穩(wěn)定的絡(luò)合物，并產(chǎn)生特征吸收光譜而進(jìn)行測定。由于榕樹葉中天然成分復(fù)雜，含有多種酚類化合物，可與鋁離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，形成干擾,使測定結(jié)果偏高。為此，本文根據(jù)黃酮類化合物

10、能與鋁離子形成穩(wěn)定的熒光絡(luò)合物，提出采用熒光分析法測定榕樹葉總黃酮含量，并進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)及回收實(shí)驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)原理。2.2  方法2.2.1  樣品溶液的制備  精密稱取榕樹葉樣品0.500 0 g，置索氏提取器中，適量石油醚加熱回流30 min，棄去石油醚提取液，并于溫水浴中揮干殘留的石油醚。然后加50 ml 60%的乙醇加熱回流提取1 h，過濾，用60%乙醇定容至100 ml。吸取樣品溶液0.5 ml，置于10 ml容量瓶中,加入5%的AlCl3溶液3 ml，pH=4的醋酸-醋酸鈉緩沖液1 ml，用60%的乙醇定容，搖勻。2.2.2  蘆丁對照品溶液的準(zhǔn)備

11、 精密稱取蘆丁對照品10 mg，用60%的乙醇溶解，定容為100 ml，即配成濃度為100gml1的對照溶液。準(zhǔn)確吸取對照溶液0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 ml分別置于10 ml容量瓶中，加入5%的AlCl3溶液3 ml，pH=4的醋酸-醋酸鈉緩沖液1 ml，用60%的乙醇定容，搖勻，即配成蘆丁對照品溶液。2.3  測定在波長=460 nm條件下9，測定蘆丁對照工作溶液的熒光強(qiáng)度，以熒光強(qiáng)度對相應(yīng)的濃度作圖，繪制工作曲線，然后在相同的條件下測定樣品中總黃酮的熒光強(qiáng)度，再用回歸方程求出含量。3  結(jié)果3.1  測定條件的選擇3.1.1   三氯化鋁的加入量   黃酮類