實(shí)驗(yàn)一巨噬細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)一 巨噬細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)1、【實(shí)驗(yàn)原理】(1)巨噬細(xì)胞作為單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的主要細(xì)胞，具有活躍的吞噬功能。能清除體內(nèi)抗原物質(zhì)及變性的細(xì)胞，在特異性及非特異性免疫中均起重要作用。M受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明顯增強(qiáng)。(2)此實(shí)驗(yàn)采用體內(nèi)法，即：在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生后，再給小鼠腹腔注射雞紅細(xì)胞30min后處死小鼠，取出腹腔液，以冷美藍(lán)染色，油鏡下計(jì)數(shù)吞噬雞紅細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，及觀察巨噬細(xì)胞中內(nèi)因被殺死而染為藍(lán)色的雞紅細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)目，以判斷巨噬細(xì)胞中的殺傷能力，由此間接地測(cè)定機(jī)體的非特異免疫水平。2、【實(shí)驗(yàn)步驟】（1）試驗(yàn)前3d，小白鼠腹腔注射6無(wú)菌淀粉液1ml，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞滲出至

2、腹腔中。（2）實(shí)驗(yàn)時(shí)，每只小鼠腹腔注射雞紅細(xì)胞液1ml，輕揉腹部，使紅細(xì)胞在腹腔中分布均勻，利于吞噬（3）30min后，將小鼠拉頸處死，固定，打開(kāi)腹腔暴露腸管，用吸管取出腹腔液，均勻涂布于載玻片上，然后再滴一小滴0.03冷美藍(lán)溶液，蓋上蓋玻片。（4）低倍鏡下找到觀察區(qū)域后，換高倍鏡下進(jìn)行觀察，計(jì)數(shù)3、【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】4、【結(jié)果分析】（1）如圖所示，在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生后，再給小鼠注射雞紅細(xì)胞后鏡檢腹腔液，可觀察到巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的現(xiàn)象，并且可以看到部分雞紅細(xì)胞聚集到吞噬細(xì)胞附近。（2）鏡下可見(jiàn)吞噬細(xì)胞核呈藍(lán)色，被吞噬的雞紅細(xì)胞呈橢圓形，其胞漿呈紅色而核被染成藍(lán)色。(3)由于未將腹腔液

3、和冷美藍(lán)溶液充分混合均勻，使得視野中出現(xiàn)大片深染區(qū)域?？傮w實(shí)驗(yàn)結(jié)果較好，視野中央可見(jiàn)清晰的吞噬了雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞。5、【注意事項(xiàng)】 （1）涂片的薄厚要適當(dāng)，否則影響計(jì)數(shù)。（2）小鼠腹腔注射時(shí)不要刺傷內(nèi)臟。 （3）如小鼠腹腔液過(guò)少，可注入適量生理鹽水。 （4）剪開(kāi)小鼠腹腔時(shí)應(yīng)避免出血，否則將影響試驗(yàn)結(jié)果。 （5）被吞噬的雞紅細(xì)胞時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可被消化，時(shí)間過(guò)短未被吞噬，必須掌握好吞噬作用時(shí)間。實(shí)驗(yàn)二 雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)1、【實(shí)驗(yàn)原理】（1）可溶性抗原 與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，兩者比例適當(dāng)并有電解質(zhì)存在及一定的溫度條件下，經(jīng)一定的時(shí)間，可形成肉眼可見(jiàn)的沉淀線/環(huán)的現(xiàn)

4、象，稱(chēng)為沉淀反應(yīng) 。（2）瓊脂擴(kuò)散是指為可溶性抗原與抗體在瓊脂凝膠中所呈現(xiàn)的一種沉淀反應(yīng)。當(dāng)對(duì)應(yīng)的抗原、抗體在半固體瓊脂終相遇，且二者比例適當(dāng)時(shí)，便出現(xiàn)可見(jiàn)的白色沉淀線，這組沉淀線是一組抗原、抗體的特異性復(fù)合物。當(dāng)瓊脂中有多組不同的抗原、抗體存在時(shí)，便各自依其擴(kuò)散速度的差異，再適當(dāng)?shù)牟课恍纬瑟?dú)立的沉淀線。因此，瓊脂擴(kuò)散不僅用于疾病的診斷，更廣泛地用于抗原成分的分析。（3）雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)是定性實(shí)驗(yàn)。將可溶性抗原與相應(yīng)抗體分別加人瓊脂板上的孔內(nèi)，兩者均可擴(kuò)散，在抗原抗體比例適宜處形成可見(jiàn)的沉淀線。如果不是相應(yīng)的抗原與抗體，就不出現(xiàn)沉淀線。本試驗(yàn)常用于分析抗原抗體的純度及相互關(guān)系。2、【實(shí)驗(yàn)步驟】

5、（1）制板：將熔化的1%瓊脂加在玻片上，3ml/板。（2）打孔：待瓊脂凝固后，在板上打孔。（3）加樣：在空中加入相應(yīng)抗原、抗體。（4）結(jié)果觀察 將瓊脂板放入濕盒內(nèi)置 37c 溫箱中 24 小時(shí)后取出觀察結(jié)果。3、【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】4、【結(jié)果分析】 （1）如圖所示，在中央孔與添加抗原1的孔之間出現(xiàn)沉淀線，有抗原抗體反應(yīng)，為陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明抗原1與抗體相對(duì)應(yīng)。中央孔與添加抗原2的孔之間沒(méi)有沉淀線，說(shuō)明抗原2與抗體之間不相對(duì)應(yīng)。 （2）抗體與抗原發(fā)生擴(kuò)散時(shí)，隨擴(kuò)散距離的增大濃度降低，在抗原抗體比例適宜處形成可見(jiàn)的沉淀線。當(dāng)有沉淀線出現(xiàn)時(shí)，說(shuō)明有抗原抗體反應(yīng)。 5、【注意事項(xiàng)】（1）加樣時(shí)不要將瓊脂劃破，以免影響沉淀線的形成。（2）反應(yīng)