槐花藥材中總黃酮的質(zhì)量分析試驗(yàn)設(shè)計(jì)1

1、槐花藥材中總黃酮的質(zhì)量分析【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、掌握比色法測定槐花藥材中總黃酮含量的方法及原理。2 、熟悉槐花藥材的含量測定的方法學(xué)驗(yàn)證。【實(shí)驗(yàn)原理】槐花為豆科植物槐Sophora japonica L 的干燥花及花蕾。夏季花開放或花蕾 系形成時(shí)采收，及時(shí)干燥，除去枝、梗及雜質(zhì)。前者習(xí)稱“槐花”，后者習(xí)稱“槐米”0槐花藥材的主要有效成份是黃酮類化合物，其中產(chǎn)丁的含量最高，所以槐花藥材 的鑒別及含量測定均以產(chǎn)丁為指標(biāo)成分。0H0H產(chǎn)丁 ( C27H30。6,610.51 )黃酮類化合物在堿性條件下與鋁鹽發(fā)生配位反應(yīng)，生成紅色的配位化合物，使得最 大吸收波長紅移至可見光區(qū)，且具有較高的吸收系數(shù)。黃酮類與

2、鋁鹽的配位反應(yīng)是 定量完成的，因此可采用比色法測定槐花藥材中總黃酮的含量，避免其他非黃酮成 分對(duì)測定準(zhǔn)確度的影響?！緝x器與試藥】儀器：紫外一可見分光光度計(jì)、100ml容量瓶、25ml容量瓶、10ml移液管，超聲 波清洗器、漏斗、玻璃棒、燒杯、膠頭滴管、洗耳球等。試劑：槐花藥材、產(chǎn)丁對(duì)照品、5%!硝酸鈉溶液、10%肖酸鋁溶液，氫氧化鈉試 液、甲醇、乙醇等?！緦?shí)驗(yàn)步驟】1線性范圍考察1.1 供試品溶液的制備將槐花研碎，取粗粉約1g,精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加 60% (V/V)乙 醇100ml,稱定重量，超聲30分鐘，用60% (V/V)乙醇補(bǔ)足失重，搖勻，過濾， 取續(xù)濾液10ml,置100m

3、l量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。(中國藥典2015版：將槐花研碎，取粗粉約1g,精密稱定，置索氏提取 器中，加乙醴適量，加熱回流至提取液無色，放冷，棄去乙醴液。再加甲醇 90ml,加熱回流至提取液無色，轉(zhuǎn)移至 100ml量瓶中，用甲醇少量洗滌容器，洗液 并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取 10ml,置100ml量瓶中，加水 至刻度，搖勻。)1.2 線性關(guān)系的考察分別取供試品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml與6ml于25ml容量瓶中，各加 水使成6.0ml,精密加5%H肖酸鈉溶液1.0ml,搖勻，放置6分鐘，再加10%肖酸 鋁溶液1.0ml,搖勻，放置6分鐘，

4、加氫氧化鈉試液10.0ml,加水稀釋至刻度，搖 勻，放置15分鐘，不加對(duì)照品溶液同法配制空白溶液，按照紫外可見分光光度 法，在500nm波長處測定各溶液的吸光度。根據(jù)響應(yīng)信號(hào)選擇最佳的供試品溶度。2總黃酮含量測定2.1 對(duì)照品溶液的制備取產(chǎn)丁對(duì)照品50mg精密稱定，置于25ml量瓶中，加60%L醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，力口 60叱醇至刻度，搖勻。精密量取10ml,置于100ml量瓶 中，力口水至刻度，搖勻，即得濃度為 0.2mg/ml的產(chǎn)丁對(duì)照品溶液。2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液1ml,2ml,3ml,4ml,5ml 與6ml,分別置于6個(gè)25ml量瓶 中，各加水使成6.

5、0ml,精密加5%!硝酸鈉溶液1.0ml,搖勻，放置6分鐘，再加 10%肖酸鋁溶液1.0ml,搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10.0ml,加水稀釋至 刻度，搖勻，放置15分鐘，不加對(duì)照品溶液同法配制空白溶液，按照紫外可見分 光光度法，在500nm波長處測定各溶液的吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐 標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。濃度 C (mg/ml)0.000 0.008 0.016 0.024 0.032 0.040 0.048吸光度A2.3 測定法精密量取供試品溶液3ml,置25ml量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法，自 “加水使成6.0ml”起同法測定吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出供試品溶液中含產(chǎn)丁的

6、重量?；被ò锤稍锲酚?jì)算，含總黃酮以產(chǎn)丁( G7H0。6)計(jì)，槐花不得少于8.0%,槐米不得少于20.0%。樣品濃度C (mg/ml)123平均值吸光度AZ濃度 C (mg/ml)一百分含量(%3方法學(xué)驗(yàn)證考察3.1 精密度試驗(yàn)指用相同方法對(duì)同一樣品溶液進(jìn)行多次測定，考察各測定值彼此接近的程度。具體如下：取同一樣品，連續(xù)測定五次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RS陰不得大于2.1 %。具體如下：精密度試驗(yàn)操作方法：取同一槐花樣品溶液 5 ml ,在500 nm處測吸光度, 重復(fù)測定5次，算出RSD測試次數(shù)12345吸光度A2.2 重復(fù)性試驗(yàn)每份供試品液再分別進(jìn)行測定，測定所得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)算其含 量的

7、平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%。具體如下：同一批號(hào)樣品，分別取低、中、 高三個(gè)樣品量，每個(gè)樣品量3份，按樣品測定方法操作?；蛟谝?guī)定范圍內(nèi)，取同一 濃度的供試品，用6個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RS陰不得大于2.0%。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)操作方法：精密稱取藥材樣品1g,精密稱定，共6份，按供試品制備方法制成供試品溶液按測定法分別在 500nm波長處測定各溶液的吸光度。由 標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出供試品溶液中含產(chǎn)丁的重量（ug）并求RSDfio樣品 123456吸光度A含量（ug）2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)考察不同時(shí)間點(diǎn)是否對(duì)測定方法和測定結(jié)果有影響，用同一被測樣品的供試液在不同間隔時(shí)間用同一測定方法所得到的測定結(jié)果。

8、一般考察36小時(shí)，這里考察60min計(jì)算RSD嘛得大于3.0%。對(duì)照和樣品均要做。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)操作方法：取產(chǎn)丁對(duì)照品和樣品溶液 5ml,于0, 15, 30, 45, 60 m in ,測定吸光值，計(jì)算吸光度平均值，求出 RSD判斷樣品的穩(wěn)定性。""時(shí)間（min）015304560平均值吸光度A2.4 加樣回收試驗(yàn)一般回收率要求在 95.0105.0 %。詳解：加樣回收試驗(yàn)即于已知被測成分含量的成藥中再精密加入一定量的被測 成分純品，依法測定。用實(shí)測值與原樣品中含測成分之差，除以加入純品量計(jì)算回 收率。此法不用制備空白對(duì)照，模擬真實(shí)性好。加樣回收試驗(yàn)操作方法：取樣品6份精密稱定每份0.5g,精密加入產(chǎn)丁對(duì)照品 適，同按照供試品溶液的制備法和測定法步驟在500nm波長處測定各濃度的吸光度，計(jì)算含量?；厥章? =實(shí)驗(yàn)測得量-實(shí)驗(yàn)前樣品含量加入對(duì)照品含量100%注意事項(xiàng)：純品的加人量與取樣量中被測成分之和必須在標(biāo)淮曲線線性關(guān)系范圍之內(nèi)；外加純品的量要適當(dāng)，過小則引起較大的相對(duì)誤差，過大則干擾成分相對(duì)減 少，真實(shí)性差。一般加入量與所取樣品含量之比控制在1: 1左右做加樣試驗(yàn)時(shí)，有人將對(duì)照品加至制