液相檢定考試題及答案

1、、填充題:1 .液相色譜儀的流動相常用的脫氣方法有：超聲波脫氣法、加熱回流法、抽真空脫氣法、吹氨脫氣法、和在線真空脫氣法幾種。2 . JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，用重銘酸鉀高氯酸溶液檢定紫外-可見光檢測器的波長示 值誤差和重復性，用 泰、甲醇溶液檢定熒光檢測器的波長示值誤差和重復性。3 .JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，檢定可調波長熒光檢測器的波長示值誤差和波長重復性時， 激發(fā)波長為345nm ,發(fā)射波長為455nm。4 .液相色譜儀是利用試樣中各組分在色譜柱內固定相和流動相間分配或吸附特性的差異，將試樣中各組份進行分離的。5 .在反相鍵合色譜體系中，鍵合 固定相的極性小于流動相的

2、極性。6 .JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，熒光檢測器波長示值誤差優(yōu)于 5nm,波長重復性誤差優(yōu) 于 2nm 。 7.色譜柱柱效下降，則色譜峰保留時間變長，色譜峰峰寬變大 。8 .當被分析的樣品濃度足夠低時，熒光強度與入射光強度、量子效率及樣品濃度呈線性關系。9 .示差折光率檢測器受溫度和流量波動影響較大，一般不能進行梯度洗脫。10 .JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，用蔡/甲醇溶液檢定紫外-可見光檢測器的最小檢測濃度， 用丙甲醇/水溶液 檢定示差折光率檢測器的最小檢測濃度。11 .JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，檢定熒光檢測器的最小檢測濃度時，激發(fā)波長為345nm,發(fā)射波長為455

3、nm 。12 .JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，紫外-可見光檢測器波長示值誤差不超過土2nm,波長重復性誤差優(yōu)于2nm 。13 .反相色譜體系中，常用的流動相有水、甲醇、乙睛 。14 .液相色譜儀是依據被測樣品中各組份的保留時間和響應值（峰面積或峰高）進行定性 和定量分析的。15 . JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，示差折光檢測器的基線噪聲應不超過5X 10 7RID,基線漂移應不超過 5X 10 6RIU/h。摩爾濃度16 .在線性范圍內，紫外-可見光檢測器測得的吸光度與被測組分的摩爾吸收系數、及樣品池光路長度成正比。17 . JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，紫外-可見光檢測器的

4、基線噪聲應不超過5X 10 4A14基線漂移應不超過5 X10 3AU/ho18 .JJG705-2002檢定規(guī)程適用于配有紫外-可見光檢測器、二極管陣列檢測器、熒光檢測器 和示差折光率檢測器的液相色譜儀。19 .用作液相色譜儀流動相的溶劑，在進入色譜系統(tǒng)前，必須經過過濾和脫氣。20 .液相色譜儀由輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器和數據記錄處理裝置等幾部分組成。二、選擇題：1 .JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，紫外可見光檢測器的基線噪聲應不超過A 。A.5 X 10-4 AU B.5 X 10-3 AU C.5 X 10-5AU2 .JJG705-2002檢定規(guī)程中線性范圍的檢定的條款中，

5、檢測下限cl的測量方法為 A 。A.采用最小檢測濃度的測量方法，用丙酮的最小檢測濃度為檢測下限CloB.在測量線性范圍工作曲線中，取響應值為兩彳噪聲處相對應的濃度為檢測下限ClC.在測量線性范圍工作曲線中，取響應值與噪聲相等處相對應的濃度為檢測下限Cl3 .熒光檢測器屬于 B 。A.通用型檢測器B.選擇性檢測器C. 兩者都不是4 .對多組份混合物的分離，色譜柱越長分離B 。A.越差 B. 越好C.越快5 .檢定可調波長熒光檢測器波長示值誤差和波長重復性時，所用的波長標準為：A 。A.蔡的甲醇溶液B.硫酸奎寧溶液C.重銘酸鉀溶液6 .檢定紫外-可見光檢測器的最小檢測濃度時，流動相為B 。A.90

6、%乙睛B.100% 甲醇 C.HPLC 水7 .JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，流量為1.00mi/min時，泵流量設定值誤差 Ss應小于：BA.2%B.3%C.5%8 .JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，示差折光率檢測器的基線噪聲應不超過B 。A.5X10-6RIU B.5X10-7RIUC.5 X 10-8RIU9 .JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，熒光檢測器的波長示值誤差應不超過C 。A. 2nm B. 3nm C. 5nm10 .JJG705-2002檢定規(guī)程中，檢定紫外-可見光檢測器波長示值誤差和重復性的標準波長為C 。A.257nm 和 320nmB.254nm 和 30

7、0nmC.257nm 和 350nm11 .JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，用硫酸奎寧硫酸水溶液測得的熒光檢測器的最小檢測濃度應不超過 B 。A.1 X 10-8 g/mlB.1X 10-9 g/mlC.1 X 10-10g/ml12 .檢定液相色譜儀的環(huán)境條件為：室溫 A 。A.15 30 c B.1535 c C. 1030 c13 .檢定紫外-可見光檢測器波長示值誤差和波長重復性時，所用的波長標準為：CA.蔡的甲醇溶液 B.硫酸奎寧溶液 C.重銘酸鉀溶液14 .液相色譜儀除按檢定周期檢定外，有下列情況的應隨時檢定：A 。A.儀器經修理后B.更換色譜柱后 C.更換記錄儀后15 .JJG

8、705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，流量為 0.5mi/min時，泵流量設定值誤差 Ss應小于：CA.2%B.3%C.5%16 .配有 C的液相色譜儀不能采用梯度洗脫。A.紫外-可見光檢測器B.熒光檢測器 C.示差折光率檢測器17 .熒光檢測器的工作原理是：A 。A.化合物分子的光致發(fā)光現象B.某些合物分子會發(fā)熒光C.化合物分子對光有吸收18 .目前使用的液相色譜儀的流動相含有pH緩沖鹽，要將流動相轉換為純甲醇，應當BA.直接將貯液瓶內的流動相換成甲醇B.先用水沖洗輸液系統(tǒng)，將管路沖凈后再將流動相換為甲醇C.以上方法都可以19 .十八烷基鍵合相屬于B 固定相。A.液-液分配色譜B.液-固吸附色譜C.

9、 離子交換色譜的方法:20 .為了使未完全分開的色譜峰更好地分離，一般采用A.改變流動相極性B.改變流速C. 改變柱溫三、問答題：1 .梯度洗脫的作用是什么？試述梯度誤差的檢定方法及計算公式？答：梯度洗脫的作用是使溶劑強度在色譜過程中逐漸增加。梯度誤差的檢定方法： 由梯度控制裝置設置階梯式的梯度洗脫程序，A溶劑為水，B溶劑為含0.1%丙酮的水溶液，B經由五個階梯從0變到100%,輸液泵和檢測器連接（不接色譜柱）開機后用啊溶劑沖洗系統(tǒng)，基 線平穩(wěn)后開始執(zhí)行梯度程序，畫出梯度變化曲線。求出阿A、B溶劑不同比例時的輸出信號值（或記錄儀讀數），重復測量二次，計算平均值。從B溶劑的含量及對應的輸出信號值

10、（或記錄儀讀數）計算梯度誤差 Gci,取Gci最大者作為儀器梯度誤差。其公式是：Gci=( LT - Lm)/ Tnt 100%2 .為什么用作液相色譜儀流動相的溶劑，在使用前必須經過脫氣？常用的脫氣方法有哪些？答：流動相進行脫氣是為了除去其中溶解的氣體（如C2）,以防止洗脫過程中流動相由色譜柱流至檢測器時因壓力降低而產生氣泡。在低死體積檢測池中，存在氣泡會增加基線噪聲， 甚至造成分析靈敏度下降。此外，溶解在流動相中的氧氣，會造成熒光猝滅，影響檢測，還 會導致樣品中某些組分氧化使柱中固定相降解而改變柱的分離性能。常用脫氣方法有五種：1、加熱回流法；2、抽真空脫氣法；3、吹氨脫氣法；4、超聲波

11、脫氣法；5、在線真空脫氣法。3 .檢定液相色譜儀的計量性能應做的檢定項目包括哪些？答：液相色譜儀計量性能檢定項目包括四部分：1 、泵耐壓、泵流量設定值誤差、泵流量穩(wěn)定性誤差和梯度誤差；2 、柱箱溫度設定誤差、柱箱溫度穩(wěn)定性；3 、檢測器基線噪聲、基線漂移、最小檢測濃度、波長示值誤差和重復性、線性范圍和 換擋誤差；4、整機定性定量重復性。4 .敘述紫外-可見光檢測器的工作原理，最小檢測濃度的檢定方法步驟及計算公式。A、答：紫外-可見光檢測器的原理是基于郎伯-比爾定律，通過測定樣品在檢測池中吸收紫外一可見光的大小來確定樣品的含量。最小檢測濃度的檢定：采用測量基線噪聲的色譜條件、方法測量基線噪聲。然

12、后，在相同色譜條件下用微量注射器從進樣口注入10-20”標樣，記錄色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰-峰高，計算最小檢測濃度。公式：CL=2NdCX V/H X 20日答：物質分子吸收紫外輻射是由于分子體系中外層電子激發(fā)到較高能態(tài)引起的，這一過程遵從郎伯一比爾定律，紫外檢測器是利用上述原理。以恰當光路、電路設計，輸出與樣品濃度成正比的光吸收值信號。在樣品池光路長度一定時，樣品摩爾吸收系數越大，靈敏度越高。摩爾吸收系數大小與波長和樣品的性質有關，它表明物質分子對特定波長輻射的吸收能力。在波長一定時，樣品摩爾吸收系數由分子截面和躍遷幾率決定。最小檢測濃度的檢定：選用C18色譜柱，以100%甲醇為流動相

13、，流量為 1.0ml/min ,檢測器波長為254nm，開機預熱，待儀器穩(wěn)定后記錄基線 30min,然后，在相同色譜條件下用 微量注射器從進樣口注入 10 206標樣，記錄色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰峰高， 計算最小檢測濃度。公式：CL=2NdCX V/H X 205 .簡述熒光檢測器的工作原理，及熒光檢測器的線性范圍的檢定方法。答：因為許多化合物存在光致發(fā)光現象， 相同的共振輻射或波長較長的特征輻射。 的強度。當被分析的樣品濃度足夠低時, 性關系。即它們可被入射光（激發(fā)光）所激發(fā)并再發(fā)出波長 熒光檢測器就是基于測量這種波長較長的特征輻射 熒光強度與入射光強度，量子效率及樣品濃度呈線檢測熒光

14、檢測器的線性范圍日檢測器的激發(fā)波長為345,發(fā)射波長為455，。儀器穩(wěn)定后,用注射器向檢測池中注入0.05mol/L的高氯酸水溶液，沖洗檢測池至儀器讀數不變，記下讀數。然后依次注入 1X105, 2X105, 3X105, 1X10 4g/ml的硫酸奎寧/高氯酸 水溶液，記下對應讀數，重復測量三遍，取平均值。取含量 1X 105g/mL5X 105g/mL 的五個樣品的讀數作標準曲線，在曲線上找出樣品含量大于1 x 10 5g/mL的各點讀數與測量值比較，測量值與曲線讀數差 5%時的樣品含量為檢測上限。檢測上限與最小檢測濃度 （即檢測下限之比值即為檢測器的線性范圍。流量波動等要求較嚴，故一般不

15、能用梯度洗脫6 .使用配有示差折光率檢測器應注意什么？ 答：因為示差折光檢測器對環(huán)境條件如溫度、操作。四、計算題：1 .檢定某一臺島津公司生產的 SPD-10A液相色譜儀紫外檢測器，使用滿量程為1mV勺積分儀, 在測量基線時，信號從 10mVFSO俞出，檢測器的測量范圍（RANGE為0.0005AUFS,積分儀的 衰減ATT=H,從積分儀上測得基線噪聲為 0.16mV,1小時內基線漂移為 0.40mV/h，測量最小 檢測濃度時，用微量注射器從進樣口注入10 M濃度為1.00 x 10-7g/ml的蔡/甲醇溶液，信號從1V端輸出，且1V =0.5AU,RANGE為0.1AUFS,積分儀的衰減為

16、ATT=2從積分儀上測得 樣品峰的峰高為 0.42mV（測量前已校零），求：基線噪聲，基線漂移和最小檢測濃度。解：基線噪聲 N d=KB最小檢測濃度 C L=2NdCX V/H X 20ATT= 20 10mm 0.0005AU 1mv = 0.00005AU = 5 X 10-5AU基線噪聲 Nd =0.16 X 5X 10-5= 1.6 X 5X 10-6 = 8X 10-6AU基線漂移 D = 0.40 X 5 X 10-5 = 2 X 10-5AU/hATT= 20 1V=0.5AU 0.42MV = 0.00042V = 4.2 X 10-4V峰高 H= 4.2 X 10-4 X0.

17、5 = 2.1 X 10-4AU最小檢測濃度 CL =2NdCXV/HX20 = 2X8X 10-6x 1X 10-7x 10/2.1 乂 10-4x 20=3.81 x 10-9g/ml2 .檢定某一臺 WATER我司生產的2410型液相色譜儀示差折光率檢測器，色譜條件按檢定 規(guī)程設定，信號從 Recorder Out端輸出，用滿量程為 1 mV的積分儀記錄信號（積分儀衰減 為2）。此時輸出信號（mV與檢測器折光率的變化 A n （ RIU）的關系為：輸出彳t號（mV）=2000 XSFX SX A n （RIU）先將檢測器參數設為 S=64 SF=80,記錄基線，測彳#基線噪聲為0.205

18、 mV,半小時內基線漂移為0.755 mV。再將檢測器參數設為 S=16、SF=20,用微量注射器從進樣器注入10“1.00 x 10-5g/ml的丙三醇標準溶液，從積分儀上得到相應的色譜峰峰高為203785 V。求：基線噪聲，基線漂移和最小檢測濃度。解：基線噪聲 N d=KB最小檢測濃度 C L=2NdCX V/H X 20ATT= 20 1MV=2000 X80X64X An基線噪聲：Nd = 0.205/2000 X 80X 64=2X 10-8RIU基線漂移：D =2X 0.755/2000 X 80X64= 1.5 X 10-7RIU/h203785 科 V= 203.785mv峰高

19、：H = 203.785/2000 X 20X 16= 3.2 X 10-4RIU最小檢測濃度：CL= 2NdCX V/HX 20= 2X 2X10-8X 1 X 10-5X 10/3.2 X10-4X20=0.629 X 10-9g/ml =6.3 X 10-10g/ml3.按照JJG705-2002檢定規(guī)程用丙三醇標準溶液對某臺配有示差折光率檢測器進行的液相 色譜儀進行線性范圍檢定。用靜態(tài)法重復測量三次，取平均值，得到與丙三醇濃度(g/ml) 相應的檢測器讀數(RIU)(見表)：內二醇濃度X x 10-3 (g/ml)1.02.03.04.05.06.07.08.09.010.0讀數平均值

20、X 10-3(RIU)4.18.913.716.921.724.928.131.334.539.3用動態(tài)法測得該檢測器丙三醇的最小檢測濃度Q為5.0 x 10-8g/ml ,求該檢測器的線性范圍。解：最小檢測濃度 C L=2NdCX V/H X 20按照檢定規(guī)程的計算方法，取其前 5組數據，用最小二乘法計算:設方程為：Y=a+bX匕二 2(x幻工(X-X)2X=S X/5=3 Y=S Y/5=13.06 n=52 (Xi-X)(Yi- Y)=(1-3)*(4.1-13.06)+(2-3)*(8.9-13.06)+(3-3)*(13.7-13.06)+(4-3)*(16.9-13.06)+ (5

21、-3)*(21.7-13.06)=17.92+4.16+3.84+17.28=43.2S(Xi-X) 2=(1-3) 2+(2-3) 2+(3-3) 2+(4-3) 2+(5-3) 2=10b=4.32 a= Y-bX=13.06-12.96=0.1得到一線性方程：Y = 4.32X + 0.1。將第6點至第10點的濃度代入線性方程，計算理論響應值Ys及測得值與理論值的偏差：第 6 點 Ys= 4.32 X 6.0+ 0.1=26.02(Y-Ys)/ YsX 100% =(24.9-26.02)/26.02X 100%=-4.3%-5%.檢測上限C h=7.0 X 10-3g/ml,該檢測器的線性范圍 =C h/ C l=7.0 X 10-3/5.0 X 10-8=1.4X1054.檢定某一液相色譜儀的泵T能，設定泵流量為 1ml/min ,連續(xù)測量泵流量 Fm三次，測得數據為：1.0075ml/min,1.0087ml/min,1.0091ml/min。求：泵流量設定值誤差Ss和泵流量穩(wěn)定性誤差Sr：解：Ss=(Fm-Fs)/Fs X 100%SR=(Fmax-Fmin)/Fm x 100%Fm=(1.0075+1.0087+1.0091)/3=1.008