硝酸甘油注射液含量檢驗(yàn)方法驗(yàn)證

1、驗(yàn)證方案編號(hào)：Z-V-AQ004-03硝酸甘油注射液含量檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案目 錄1、起草、審核與批準(zhǔn) 2.2、目的2.3、范圍2.4、職責(zé)2.5、概述3.6、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范3.7、驗(yàn)證前的支持性確認(rèn) 3.&驗(yàn)證內(nèi)容5.9、數(shù)據(jù)分析9.10、偏差9.11、確認(rèn)結(jié)果評(píng)定與結(jié)論 9.12、再驗(yàn)證周期9.1、起草、審核與批準(zhǔn):所屬部門(mén)職務(wù)簽名日期起草年 月曰審核年 月曰審核年 月曰批準(zhǔn)年 月曰2、目的:硝酸甘油注射液在產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中，需用高效液相色譜法測(cè)定其含量，為確定其對(duì)含量測(cè) 定檢驗(yàn)方法的適用性，特制定本驗(yàn)證方案。3、范圍:本方案適用于硝酸甘油注射液含量檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。4、職責(zé):組長(zhǎng)姓名職務(wù)

2、/職稱(chēng)部門(mén)職責(zé)QC主管質(zhì)量檢驗(yàn)室1負(fù)責(zé)組織起草確認(rèn)方案。2負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)、組織確認(rèn)工作。成員經(jīng)理質(zhì)量管理部1. 負(fù)責(zé)確認(rèn)方案的審核和監(jiān)督。2. 負(fù)責(zé)確認(rèn)方案的審核與批準(zhǔn)。主管質(zhì)量管理部1. 負(fù)責(zé)確認(rèn)方案、報(bào)告的審核。2. 負(fù)責(zé)起草確認(rèn)合格證書(shū)。主管設(shè)備工程部1. 負(fù)責(zé)儀器儀表均已校準(zhǔn)合格，且在有效期內(nèi)。2. 執(zhí)行安裝、運(yùn)行和性能確認(rèn)。確認(rèn)專(zhuān)員質(zhì)量管理部1. 負(fù)責(zé)相關(guān)確認(rèn)項(xiàng)目的測(cè)試。2. 保證測(cè)試數(shù)據(jù)的真實(shí)性。確認(rèn)專(zhuān)員質(zhì)量管理部1. 負(fù)責(zé)相關(guān)確認(rèn)項(xiàng)目的測(cè)試。2. 保證測(cè)試數(shù)據(jù)的真實(shí)性。5、概述:高效液相色譜法(High Performanee Liquid Chromatography, HPLC)系

3、采用高壓輸液泵將流動(dòng)相泵入到裝有填充劑的色譜柱，對(duì)供試品進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。注入的供試品，由流 動(dòng)相帶入注內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并依次進(jìn)入檢測(cè)器，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色 譜圖并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到測(cè)定結(jié)果。由于應(yīng)用了各種特性的微粒填料和加壓的液體流動(dòng) 相，本法具有分離性能高、分析速度快的特點(diǎn)。硝酸甘油注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，在產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程半成品和成品檢驗(yàn)，需用高效液相 色譜法測(cè)定其含量。6、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范：本方案以L(fǎng)C-20A高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 、PC-2001高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn) 操作規(guī)程、硝酸甘油注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，制定了硝酸甘油注射液驗(yàn)證方案。7、驗(yàn)證前的支持性確認(rèn)：儀

4、器確認(rèn)前應(yīng)確認(rèn)與本次確認(rèn)相關(guān)聯(lián)的完成情況。7.1 文件的檢查確認(rèn)：序號(hào)文件名稱(chēng)文件編號(hào)檢查結(jié)果1硝酸甘油注射液含量檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案Z-V-AQ004-03合格不合格2硝酸甘油注射液檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-3505合格不合格3LC-20A型高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP- Q6115合格不合格4PC-2001型高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP- Q6041合格不合格5高效液相色譜儀日常清潔維護(hù)與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作SOP- Q6044合格不合格6玻璃儀器清洗與貯存標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-Q0064合格不合格7電子天平標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-Q6017合格不合格8電子天平日常清潔維護(hù)與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-Q

5、6018合格不合格檢查人/日期：復(fù)核人/日期：7.2 儀器儀表的檢查確認(rèn)：儀器儀表量程、規(guī)格必須符合測(cè)試及設(shè)計(jì)規(guī)范要求。722儀器儀表使用前必須經(jīng)具有相應(yīng)資質(zhì)機(jī)構(gòu)校驗(yàn)，且在有效期內(nèi)7.3 公用工程系統(tǒng)的檢查確認(rèn)：系統(tǒng)名稱(chēng)文件編號(hào)檢杳人檢查結(jié)果合格不合格合格不合格合格不合格7.4相關(guān)人員的培訓(xùn):文件培訓(xùn)文件培訓(xùn)表序號(hào)文件名稱(chēng)文件編碼檢查結(jié)果1硝酸甘油注射液含量檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案Z-V-AQ004-03是口否口2硝酸甘油注射液檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-3505是口否口3LC-20A型高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP- Q6115是口否口4PC-2001型高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP- Q6041是

6、口否口5高效液相色譜儀日常清潔維護(hù)與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP- Q6044是口否口6玻璃儀器清洗與貯存標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-Q0064是口否口7電子天平標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-Q6017是口否口8電子天平日常清潔維護(hù)與保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP-Q6018是口否口偏差說(shuō)明/結(jié)論：檢杳人日期復(fù)核人日期人員培訓(xùn)人員培訓(xùn)表序號(hào)姓名是否培訓(xùn)健康狀況1是口否口是口否口2是口否口是口否口3是口否口是口否口4是口否口是口否口偏差說(shuō)明/結(jié)論：檢杳人日期復(fù)核人日期8驗(yàn)證內(nèi)容：8.1硝酸甘油注射液含量測(cè)定方法儀器與用具：電子天平、高效液相色譜儀、容量瓶、移液管。試劑與試液： 乙腈-水（ 50： 50）、硝酸甘油對(duì)照品。條件：

7、照高效液相色譜法測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（50： 50）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為215 nm。取硝酸甘油對(duì)照品約1.25g,置25ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，即得（每1ml中約含0.5mg的溶液）。置水浴中加熱10分鐘，放冷，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，取20 pl，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，在相對(duì)保留時(shí)間約0.4處應(yīng)出現(xiàn)兩個(gè)降解產(chǎn)物峰（1,2-二硝酸甘油和1,3-二硝酸甘油峰），兩峰之間的分離度應(yīng)大 于1.0。理論板數(shù)按硝酸甘油峰計(jì)算不低于 2000。樣品溶液制備：精密量取本品1ml，置50ml量

8、瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中約含硝酸甘油0.1mg的溶液）。對(duì)照溶液制備：取硝酸甘油對(duì)照品約 0.5g，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖 勻，即得。測(cè)定方法：精密量取樣品溶液與對(duì)照溶液各20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。Ax Cr hO 1000/計(jì)算公式：含量（）= AR 1/50 5 100/式中：Ax表示供試品溶液所得色譜圖中主成分的峰面積；AR表示對(duì)照品溶液的峰面積；Cr表示對(duì)照品的濃度。判定標(biāo)準(zhǔn)：本品含硝酸甘油（C3H5N3O9）應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%110.0%。8.2重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批硝酸甘油注射液樣品，按硝酸甘油注射液

9、含量測(cè)定方法同一人共制備6份供試液測(cè)定，所得結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差w2.0%。重復(fù)性試驗(yàn)記錄名稱(chēng)硝酸甘油注射液批號(hào)：儀器型號(hào)：對(duì)照品批號(hào)來(lái)源含量：配制日期年 月曰有效期至年月日系統(tǒng)性試驗(yàn)分離度：理論板數(shù)：對(duì)照品稱(chēng)樣量對(duì)1:對(duì)2：樣品取樣量樣品 1:1 50ml樣品 2:1 50ml對(duì)照1峰面積平均值：對(duì)照2峰面積平均值：樣品序號(hào)1 23456峰面積含量%RSD%（應(yīng)w 2.0%）結(jié)論檢驗(yàn)人日期復(fù)核人日期8.3中間精密度試驗(yàn)同一批硝酸甘油注射液，由2個(gè)不同的人在不同時(shí)間不同儀器分別測(cè)定2次的結(jié)果,所得結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差w 2.0%。表1中間精密度試驗(yàn)記錄名稱(chēng)硝酸甘油注射液批號(hào)：儀器型號(hào)：對(duì)照品批號(hào)來(lái)

10、源含量：配制日期年 月曰有效期至年月日系統(tǒng)性試驗(yàn)分離度：理論板數(shù)：對(duì)照品稱(chēng)樣量對(duì)1：對(duì)2：樣品取樣量樣品 1: 1 50ml樣品 2:1 50ml對(duì)照1峰面積平均值：對(duì)照2峰面積平均值：樣品序號(hào)1-11-2平均值含量1含量2峰面積樣品序號(hào)2-12-2平均值含量1含量2峰面積平均含量RSD%（應(yīng)w 2.0%）檢驗(yàn)人日期復(fù)核人日期表2中間精密度試驗(yàn)記錄名稱(chēng)硝酸甘油注射液批號(hào)：儀器型號(hào)：對(duì)照品批號(hào)來(lái)源含量：配制日期年 月曰有效期至年月日系統(tǒng)性試驗(yàn)分離度：理論板數(shù)：對(duì)照品稱(chēng)樣量對(duì)1：對(duì)2：樣品取樣量樣品 1: 1 50ml樣品 2:1 50ml對(duì)照1峰面積平均值：對(duì)照2峰面積平均值：樣品序號(hào)1-11-

11、2平均值含量1含量2峰面積樣品序號(hào)2-12-2平均值含量1含量2峰面積平均含量RSD%（應(yīng)w 2.0%）檢驗(yàn)人日期復(fù)核人日期表3中間精密度驗(yàn)證結(jié)果（兩人）名稱(chēng)硝酸甘油注射液批號(hào)含量測(cè)定結(jié)果結(jié)果% % %RSD%（應(yīng)w 2.0%）結(jié)論檢驗(yàn)人日期復(fù)核人日期84定量限確認(rèn)841.定義定量限是指樣品中被測(cè)物質(zhì)能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。8.42方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（50： 50）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm。取硝酸甘油對(duì)照品約1.25g,置25ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，即得（每1ml中約含

12、0.5mg的溶液）。置水浴中加熱10分鐘，放冷，用0.1mol/L氫氧 化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，取20 pl，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，在相對(duì)保留時(shí)間約 0.4處應(yīng)出現(xiàn)兩個(gè)降解產(chǎn)物峰（1，2-二硝酸甘油和1，3-二硝酸甘油峰），兩峰之間的分離 度應(yīng)大于1.0。理論板數(shù)按硝酸甘油峰計(jì)算不低于 2000。對(duì)照品溶液制備：取硝酸甘油對(duì)照品約0.5g,置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液制備：精密量取硝酸甘油對(duì)照品g,置ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中約含硝酸甘油0.1mg的溶液）。測(cè)定法：精密量取上述兩種溶液各 20 p，分別注入液相色譜儀，記錄色

13、譜圖，按外標(biāo)法 以峰面積計(jì)算，即得。A x Cr 1.0 “小/計(jì)算公式：含量（）= Ar 1/50 5 弘式中：Ax表示供試品溶液所得色譜圖中主成分的峰面積；AR表示對(duì)照品溶液的峰面積；Cr表示對(duì)照品的濃度。8.4.3. 可接受標(biāo)準(zhǔn)以S / N = 10時(shí)的相應(yīng)濃度作為本品含量檢測(cè)的定量限。8.4.4. 定量限確認(rèn)記錄見(jiàn)附表5。附表5定量限確認(rèn)記錄色譜條件使用儀器對(duì)照品批號(hào)來(lái)源色譜柱型號(hào)品牌流動(dòng)相試劑名稱(chēng)批號(hào)生產(chǎn)廠(chǎng)家檢測(cè)波長(zhǎng)流速柱溫進(jìn)樣量初始濃度(mg/ml)信噪比(X)稀釋濃度(mg/ml) (初始濃度*X/10 )信噪比稀釋濃度(mg/ml) (初始濃度 *X/10 )標(biāo)準(zhǔn)要求以信噪比S

14、 / N = 10時(shí)的相應(yīng)濃度作為本品含量檢測(cè)的定量限。結(jié)論確認(rèn)人日期復(fù)核人日期9、數(shù)據(jù)分析:通過(guò)對(duì)硝酸甘油注射液含量檢驗(yàn)方法學(xué)試驗(yàn)，重復(fù)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差< 2.% ;中間精密度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD) .0% ;以上試驗(yàn)均應(yīng)符合驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)。10、偏差：10.1在確認(rèn)過(guò)程中有無(wú)偏差，如有偏差應(yīng)找出原因，并通知被檢測(cè)部門(mén)進(jìn)行調(diào)查處理。10.2偏差調(diào)查記錄應(yīng)由質(zhì)量管理部存檔。11、驗(yàn)證結(jié)果評(píng)定與結(jié)論：質(zhì)量管理部負(fù)責(zé)收集各項(xiàng)確認(rèn)、試驗(yàn)結(jié)果記錄，根據(jù)確認(rèn)、試驗(yàn)結(jié)果起草驗(yàn)證報(bào)告，報(bào) 驗(yàn)證委員會(huì)。驗(yàn)證委員會(huì)負(fù)責(zé)對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)審，作出確認(rèn)結(jié)論，發(fā)放證書(shū)，確認(rèn)硝酸甘 油注射液含量檢驗(yàn)方法的各項(xiàng)結(jié)果達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)。并對(duì)確認(rèn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)審，內(nèi)容包括：確認(rèn)結(jié)果評(píng)審表評(píng)審項(xiàng)目評(píng)審結(jié)果試驗(yàn)是否有遺漏？是否 N/A實(shí)施過(guò)程中對(duì)驗(yàn)證方案有無(wú)修改？是否 N/A修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)？是否 N/A記錄是否完整？是否 N/A試驗(yàn)結(jié)果