血清肌酸激酶CKDGKC推薦方法測(cè)定

1、血清肌酸激酶CKDGK雅薦方法測(cè)定1 .實(shí)驗(yàn)原理德國(guó)臨床化學(xué)學(xué)會(huì)（DGKC和國(guó)際臨床化學(xué)學(xué)會(huì)（IFCC）推薦 的連續(xù)監(jiān)測(cè)法。ADP +磷酸肌酸CK; 肌酸+ ATP己糖激酶（HK）ATP +葡萄糖ADP +葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-6-磷酸+NADPDH） -6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+HNADPH在340nm處有特異吸收，通過(guò)測(cè)定NADPH生 成 速率計(jì)算出CK活性。2 .標(biāo)本：2.1 病人準(zhǔn)備：無(wú)特殊要求。2.2 類型：血清，肝素或EDTA血漿。3 .標(biāo)本存放：穩(wěn)定性：28c保存穩(wěn)定7天；1525c 保存穩(wěn)定1天;-20 C保存穩(wěn)定4周（避光保存）。3天內(nèi) 的活性損失：28c保存24小時(shí)或

2、1822 c保存1小時(shí)至少損失10%.4,標(biāo)本運(yùn)輸：常溫條件下保存運(yùn)輸。5 .標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染的標(biāo)本。6 .實(shí)驗(yàn)材料6.1 試劑 奧林巴斯CK測(cè)定試劑盒（試齊IJ1 +試齊（J2）6.1.1 試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。6.1.2 試劑穩(wěn)定性與貯存：試劑避光保存于28C,若 無(wú)污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑不可冰凍。6.1.3 變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有看得見(jiàn)的微生物生長(zhǎng)，有濁 度，或者未開(kāi)蓋的液體有沉淀時(shí)，表明試劑已變質(zhì)，不 能繼續(xù)使用。6.1.4 注意事項(xiàng)：試劑中含疊氮鈉（0.95g/L ）為防腐齊八 不可入口！避免接觸皮膚及粘膜。應(yīng)采取必要的預(yù)防措 施使用試劑。6.2 校準(zhǔn)品：使用奧林巴斯公司提供

3、的校準(zhǔn)品對(duì)自動(dòng)分 析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，具體參見(jiàn)生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP 文件。6.3 質(zhì)控品：具體參見(jiàn)生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文7 .儀器：奧林巴斯AU2700生化分析儀8 .操作步驟8.1 項(xiàng)目基本參數(shù)：參見(jiàn)AU2700生化分析儀項(xiàng)目測(cè)定參 數(shù).SOP文件8.2 儀器操作步驟：參見(jiàn) AU2700生化分析儀操作規(guī) 程.SOP文件9 .檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析10 .質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I 與II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2s為質(zhì)控警告限， 3s為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參 見(jiàn)室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11 .計(jì)算方法：以TruCal U 復(fù)合校

4、準(zhǔn)品CK校準(zhǔn)值校準(zhǔn) 儀器后，在病人結(jié)果可報(bào)告范圍內(nèi)，儀器直接報(bào)告可靠 的檢測(cè)結(jié)果。不使用校準(zhǔn)品進(jìn)行CK活力檢測(cè)，可以直接 使用A A/min均值乘以計(jì)算因子得到結(jié)果，但是這樣所 得結(jié)果的可靠性不如使用校準(zhǔn)品。計(jì)算CK活力的計(jì)算因 子見(jiàn)下表：A A/min X因子 =CK活力U/L計(jì)算因子（37 C ） ：340nm41274207334nm365nm472912 .參考值范圍1: （ U/L ）成人：女性24167男性24190參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù) 好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。13 .臨床意義"2：肌酸激酶（CK）主要由存在于肌肉中

5、的同工酶（CK-M）和存在于腦中的同工酶（CK-B）組成。 在血清中CK形式為CK-MM CK-MB, CK-BB和巨酶等的二 聚物。在心肌損傷或骨骼肌疾病時(shí)可以觀測(cè)到CK活力的 升高。CK和CK-MB 一起檢測(cè)有助于心肌梗死的診斷和監(jiān) 視。14 .操作性能14.1 線性范圍 V 1200U/L14.2 精密度：精密度的評(píng)估是根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方 法，AU2700批內(nèi)精密度小于3%,總精密度小于3%。用于 分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內(nèi)精密度n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)批間精密度n=20X(U/L)s(U/L)CV(%)樣品11593.182.00

6、樣品149.51.052.12樣品22201.540.70樣品21571.631.04樣品35083.690.73樣品32282.311.0114.3 方法學(xué)比較：本公司的試劑盒(y)與某商品化試劑 盒(x),同時(shí)對(duì)71個(gè)樣品進(jìn)行CK活力檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果 作方法學(xué)比較，其 統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下：y=0.98x+0.02( U/L );r=1.000。14.4 靈敏度:本試劑的檢測(cè)限為5U/L。14.5 病人結(jié)果可報(bào)告范圍：5-1200U/L 。16 .病危報(bào)警值的處理：無(wú)。17 .方法局限性17.1 本法對(duì)CK活力的線性上限為1200U/L ,當(dāng)測(cè)定值超 過(guò)上限時(shí)，應(yīng)將樣品用9g/L氯化鈉溶液作1+1

7、0稀釋， 重新測(cè)定，結(jié)果乘以11。17.2 干擾物質(zhì)：當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度£1704Nmol/L , 膽紅素濃度684Nmol/L ,血紅蛋白w2.00g/L ,甘油三酯濃度22.6mmol/L 時(shí)沒(méi)有觀察到干擾。18 .補(bǔ)救措施：當(dāng)儀器發(fā)生故障時(shí)，迅速聯(lián)系儀器廠家 進(jìn)行維修。19 . 參考文獻(xiàn)1. Stein W. Creatine kinase (total activity) , creatine kinase isoenzymes and variants. In: ThomasL ed. Clinical laboratory diagnostics. Frankfurt:

8、TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.71-80.2. MOss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In:Burtis CA , Ashwood ER. editors. Tietz Textbook ofClinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia:W. B.Saunders Company; 1999. P.617-721.3. Recommendations of the German Society forClinical Chemistry. Standardization of methods forthe estimation of enzyme activities in biologicalfluids:Standard method for the determination of creatine kinase activity. J Clin Chem Clin Biochem1977;15:255-60.4. Lorentz K , Rohle G , Siekmann L. Introductionof new standard methods 1994 for the determ