結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

1、結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（第一次征求意見稿）一、前言本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。本指導(dǎo)原則是對結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證

2、資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。二、適用范圍中國是結(jié)核病高負擔(dān)國家之一，結(jié)核病患者人數(shù)居世界第二位。結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌、牛結(jié)核分枝桿菌和非洲分枝桿菌等引起的慢性傳染性疾病，可累及全身各個器官，以肺結(jié)核最為多見。其1中，結(jié)核病的病原菌主要是結(jié)核分枝桿菌，牛結(jié)核分枝桿菌次之。結(jié)核分枝桿菌主要是經(jīng)空氣傳播，大多數(shù)人在感染結(jié)核分枝桿菌后并無癥狀，稱為潛伏感染。潛伏感染可持續(xù)幾十年，僅有5-10% 的潛伏感染者發(fā)展為活動性肺結(jié)核1 ，2

3、 。在結(jié)核病的細菌學(xué)檢驗中，通常將分枝桿菌分為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（ Mycobacteriumtuberculosiscomplex ）和非結(jié)核分枝桿菌（ Nontuberculosis mycobacteria, NTM）。結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群包括結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis）、牛結(jié)核分枝桿菌( M.bovis ) 、 非 洲 分 枝 桿 菌 （ M.africanum） 和 田 鼠 分 枝 桿 菌（ M. microti ）。在結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群內(nèi)各種中，除田鼠分枝桿菌對人無致病力外，其他三種菌均可對人致病，產(chǎn)生大致相同的臨床表現(xiàn)。因此，臨床上往往只做結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的鑒定而

4、不進行亞種水平的鑒定 1 ，用于結(jié)核輔助診斷的核酸檢測試劑也常采用結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群共有的基因序列作為靶標來進行檢測。核酸檢測是肺結(jié)核病原學(xué)診斷的重要參考。 2009 年，美國 CDC 更新了肺結(jié)核的診療指南，將核酸檢測作為肺結(jié)核的輔助診斷方法，明確：對所有疑似肺結(jié)核患者，應(yīng)至少進行一個呼吸道樣本的核酸檢測。我國臨床診療指南- 結(jié)核病分冊也明確：結(jié)核分枝桿菌的DNA 檢測可作為肺結(jié)核診斷的參考。與其他實驗室檢查方法比較，核酸檢測的價值在于： （1 ）可快速鑒別結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群與非結(jié)核分枝桿菌，提高涂片陽性肺結(jié)核的診斷特異性； （ 2）與涂片比較，靈敏度較高，可提高涂片陰性肺結(jié)核的檢出率； （

5、 3）與培養(yǎng)相比，操作快速，可及早進行正確的醫(yī)療處置。2結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測試劑是指：利用分子生物學(xué)檢測技術(shù)，如聚合酶鏈式反應(yīng)（ PCR）等，以特定的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群共有的基因序列為檢測靶標，對源于人呼吸道的臨床樣本（痰、支氣管肺泡灌洗液）中的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群進行體外定性檢測的試劑，用于肺結(jié)核的輔助診斷。本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于熒光探針 PCR 方法建立的，對于其他分子生物學(xué)檢測技術(shù)，可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進行修訂或補充其他的評價和驗證，但需闡述不適用的理由，并驗證替代方法的科學(xué)合理性。本指導(dǎo)原則適用于以結(jié)核分枝桿菌復(fù)合

6、群共有的基因序列作為靶標進行檢測的試劑，對于某些以結(jié)核分枝桿菌特有的基因序列為靶標進行檢測的試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進行修訂或補充其他的評價和驗證，但需闡述不適用的理由，并驗證替代方法的科學(xué)合理性。本指導(dǎo)原則適用于預(yù)期用途為肺結(jié)核輔助診斷的、以痰或支氣管肺泡灌洗液作為適用樣本類型的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測試劑。對于用途相同的其他呼吸道樣本類型，或者預(yù)期用途為肺外結(jié)核輔助診斷的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進行修訂或補充其他的評價和驗證。本指導(dǎo)

7、原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。3三、注冊申報資料要求（一）綜述資料綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及國內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗原理、最低檢測限及被測靶基因序列的特性等方面寫明申報試劑與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。若被測物為新的靶基因序列，則應(yīng)詳細論述作為檢測靶標的基因序列的臨床意義，即其與臨床應(yīng)用（可用于肺結(jié)核輔助診斷）的相關(guān)性，并提供充分的支持資料。綜述資料應(yīng)符合體外診斷試劑注冊管理辦法（以下簡稱辦法）和體外診斷試劑注冊申報資料要求及說明的相關(guān)要求

8、。（二）產(chǎn)品說明書產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書一致，翻譯力求準確且符合中文表達習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨列明文獻的相關(guān)信息。結(jié)合體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的要求，下面對結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地編制說明書。【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：41試劑盒用于體外定性檢測人xx 樣本中的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸。2簡單介紹結(jié)

9、核分枝桿菌復(fù)合群包括哪些種的細菌、致病性、感染后的臨床表現(xiàn)，靶基因序列的特征（靶基因在結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群中的存在情況、基因位置、拷貝數(shù)等）及選擇依據(jù)，其他病原體（如：非結(jié)核分枝桿菌NTM ）中是否存在靶基因。3待測人群特征介紹：具有結(jié)核病相關(guān)體征/ 癥狀和 X 線檢查結(jié)果的疑似結(jié)核病患者、地域要求或年齡限制（如有）等。4強調(diào)：實驗操作人員應(yīng)接受過基因擴增或分子生物學(xué)方法檢測的專業(yè)培訓(xùn)，具備相關(guān)的實驗操作資格，實驗室應(yīng)具備相關(guān)的生物安全防備設(shè)施及防護程序。【主要組成成份】1說明試劑盒包含組份的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。2. 試劑盒中不包含但對該項檢測必

10、須的組份，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/ 耗材的名稱、貨號及其他相關(guān)信息。3. 如果試劑盒中不包含用于核酸提取 / 純化的試劑組份， 則應(yīng)在此注明經(jīng)過驗證后推薦配合使用的商品化核酸提取/ 純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以及產(chǎn)品貨號等詳細信息。【檢驗原理】1. 對試劑盒檢測的靶基因進行詳細描述（長度、基因位置及拷貝數(shù)等），對引物及探針設(shè)計、不同樣品反應(yīng)管組合、對照設(shè)置及熒光信號檢測原理等進行逐項介紹。2. 核酸提取 / 純化方法、原理等。53. 試劑盒技術(shù)原理的詳細介紹，建議結(jié)合適當圖示進行說明?！緝Υ鏃l件及有效期】說明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、復(fù)融穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)明確具體的儲

11、存條件及有效期?！緲颖疽蟆恐攸c明確以下內(nèi)容：1. 樣本的收集：應(yīng)參照臨床技術(shù)操作規(guī)范（結(jié)核病分冊）（中華醫(yī)學(xué)會編著）或者結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程（中國防癆協(xié)會基礎(chǔ)專業(yè)委員會編著）現(xiàn)行有效版本推薦的采樣要求，并詳細描述采樣步驟和注意事項。2. 臨床樣本的前處理 （如適用） ：應(yīng)參考臨床技術(shù)操作規(guī)范 （結(jié)核病分冊）（中華醫(yī)學(xué)會編著）或者結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程（中國防癆協(xié)會基礎(chǔ)專業(yè)委員會編著）現(xiàn)行有效版本推薦的前處理方法，尤其是痰標本，如堿處理 - 直接法、N- 乙酰 -L- 半胱氨酸（NALC ）-NaOH法等，詳細描述具體的前處理方法。3. 樣本的其他處理、 運送和保存： 明確核酸提取 /

12、純化前的其他處理（如離心、洗滌等）、保存條件及期限（短期、長期）、運送條件等。冷藏 / 冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)至室溫， 凍融次數(shù)的限制。【適用儀器】所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作?！緳z驗方法】詳細說明實驗操作的各個步驟，包括：1. 實驗條件：實驗室分區(qū)、實驗環(huán)境的溫度、濕度、空調(diào)氣流方向控制等注意事項。2. 試劑配制方法、注意事項。3. 詳述待測樣本及相關(guān)對照（如適用） 核酸提取 / 純化的條件、步6驟及注意事項。4. 擴增反應(yīng)前準備：加樣體積、順序等。5. PCR 各階段的溫度、時間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置及相關(guān)注意事項。6. 儀器設(shè)置：特殊參數(shù)、結(jié)合探針的熒光素標

13、記情況、對待測基因及內(nèi)標的熒光通道選擇。7. 基線、循環(huán)閾值（ Ct 值）的選擇方法?！緳z驗結(jié)果的解釋】結(jié)合陽性對照、陰性對照、內(nèi)對照（內(nèi)標）、核酸提取/ 純化對照（如適用）以及樣本管檢測結(jié)果的 Ct 值，以列表的形式對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進行詳述。如存在檢測灰區(qū)，應(yīng)詳述對于灰區(qū)結(jié)果的處理方式?！緳z驗方法的局限性】1. 本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀 / 體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。2. 有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析（1 ）不合理的樣本采集、運送及處理、樣本中細菌含量過低均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。（2 ）待測靶基因的變異或其他原因

14、導(dǎo)致的序列改變可能會導(dǎo)致假陰性結(jié)果。（ 3）未經(jīng)驗證的其他干擾或 PCR 抑制因子等可能會導(dǎo)致假陰性結(jié)果（如有）。3有關(guān)假陽性結(jié)果的可能性分析（如適用）除結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群外，其他病原體可能含有待測基因，因而導(dǎo)致假陽性，列出可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果的病原體目錄。7【產(chǎn)品性能指標】詳述以下性能指標：1. 對國家參考品檢測的符合情況，簡要描述采用國家參考品進行檢測的結(jié)果（如適用）。2. 最低檢測限：說明試劑的最低檢出濃度，簡單介紹最低檢測限的試驗方法及結(jié)果。3. 企業(yè)陽性、陰性參考品的檢測符合情況，簡單介紹陰陽性參考品的組成、濃度和符合率結(jié)果等信息。4. 精密度：精密度參考品的組成、濃度及結(jié)果。5. 分

15、析特異性（1）交叉反應(yīng)：對出現(xiàn)在相應(yīng)臨床標本中可能產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體的驗證情況，建議以列表的方式明確經(jīng)過交叉反應(yīng)驗證的病原體名稱、菌株特性、濃度等信息；（ 2）干擾物質(zhì)： 樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響， 如血液、粘液或藥物等；6. 對比試驗研究（如有） ：簡要介紹對比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計學(xué)方法及統(tǒng)計分析結(jié)果。7. 境外（如適用）和境內(nèi)臨床試驗數(shù)據(jù)總結(jié)?！咀⒁馐马棥繎?yīng)至少包括以下內(nèi)容：1. 有關(guān)人源組份（如有）的警告，如：試劑盒內(nèi) xx 組份可能含有人源物質(zhì)，雖已經(jīng)通過了 HBs-Ag 、 HIV1/2-Ab 、 HCV-Ab 等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可

16、以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。2. 臨床實驗室應(yīng)嚴格按照醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增實驗室管理辦法（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā) 2010 194 號或現(xiàn)行有效版本）等有關(guān)分子生物8學(xué)實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。（三）產(chǎn)品技術(shù)要求產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合辦法和體外診斷試劑注冊申報資料要求及說明的相關(guān)規(guī)定。申請人應(yīng)按照醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標和檢驗方法，并在附錄中明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求。產(chǎn)品技術(shù)要求中的產(chǎn)品性能指標應(yīng)與說明書保持一致。如申報試劑已有相應(yīng)的國家或行業(yè)標準發(fā)布，則產(chǎn)品技術(shù)要求不得低于上述標準要求。（四）產(chǎn)

17、品注冊檢驗報告根據(jù)辦法要求，首次申請注冊的第三類產(chǎn)品應(yīng)在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機構(gòu)進行連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢測。如申報試劑有適用的國家參考品，應(yīng)采用國家參考品進行注冊檢驗，并符合國家參考品的相關(guān)要求。（五）主要原材料的研究資料應(yīng)提供主要原材料如引物、 探針、酶、陰性對照、陽性對照以及企業(yè)參考品等的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量控制標準等的研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料購自其他供貨商，應(yīng)提供的資料包括：供貨商提供的質(zhì)量標準、出廠檢定報告或性能指標證書，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。申請人應(yīng)提供企業(yè)參考品的詳細的

18、制備過程，包括組成、來源、菌株特性（如名稱、種屬、靶基因的拷貝數(shù)、濃度等）等信息。企9業(yè)參考品的項目應(yīng)包括：陰性參考品、陽性參考品、最低檢測限參考品、重復(fù)性參考品等。陽性參考品應(yīng)著重考慮結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的代表菌株，陰性參考品則主要涉及對分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗證情況。建議采用滅活的菌株建立企業(yè)參考品，不宜采用質(zhì)粒、菌株的基因組提取 / 純化物或臨床樣本（如痰液） 。申報試劑的質(zhì)控體系通過設(shè)置陽性、陰性、內(nèi)對照（內(nèi)標）等各種對照來實現(xiàn)，需考慮對樣本核酸提取/ 純化、配液及加樣、試劑及儀器性能、擴增反應(yīng)抑制物（管內(nèi)抑制）、交叉污染、靶核酸降解等因素可能造成的假陰性或假陽性結(jié)果的質(zhì)量控制。陽性對

19、照的核酸性質(zhì)應(yīng)與待測樣本的核酸性質(zhì)一致，如同為DNA 或 RNA 。企業(yè)應(yīng)對各種對照的Ct 值做出明確的范圍要求。申報資料應(yīng)詳細描述對照的原料選擇、制備、定值過程等試驗資料。本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于熒光探針PCR 方法建立的，對于采用該方法學(xué)的結(jié)核核酸檢測試劑，建議至少設(shè)置陽性對照、陰性對照和內(nèi)對照。1內(nèi)對照（內(nèi)標）內(nèi)對照可對整個實驗過程可能存在的擴增反應(yīng)抑制物、儀器、試劑和操作等所導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進行質(zhì)量控制。內(nèi)對照可采用不含靶序列的質(zhì)?；蚓€性DNA 、非結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的病原體或克隆菌株（推薦），靶核酸為RNA 時可采用包裝的RNA 等。申請人應(yīng)對內(nèi)對照（內(nèi)標）的引物、探針和模板濃度做

20、精確的驗證，既要保證內(nèi)標熒光通道呈明顯的陽性曲線又要盡量降低對靶基因檢測造成的抑制而導(dǎo)致假陰性。2陽性對照10陽性對照對整個實驗過程進行質(zhì)控。陽性對照可為：含有靶序列的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合物菌株或其他病原體（推薦）、含有靶序列且濃度在最低檢測限附近的核酸（如含有靶序列的質(zhì)粒、結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌株的基因組核酸提取/ 純化物，靶核酸為RNA 時可采用包裝的 RNA 等）等。企業(yè)應(yīng)對各種陽性對照的Ct 值做出明確的范圍要求。陽性對照需參與樣本核酸的平行提取/ 純化（如有必要）。3陰性對照陰性對照對可能存在的交叉污染進行假陽性結(jié)果的質(zhì)控。陰性對照可以是空白對照。陰性對照需參與樣本核酸的平行提取/ 純化。

21、由于申報試劑所適用的臨床樣本比較復(fù)雜，其中可能含有各種影響 PCR 反應(yīng)的抑制物，從而影響后續(xù)試驗結(jié)果，造成假陰性的可能性。因此，申報試劑應(yīng)充分考慮對樣本核酸提取/ 純化環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，通過設(shè)置各種對照進行質(zhì)控。比如，采用克隆菌株作為內(nèi)對照，或者采用菌株作為陽性對照并參與樣本核酸的平行提取/純化，或者設(shè)置專門的核酸提取/ 純化對照（如菌株）等，以對樣本核酸提取 / 純化的質(zhì)量及效率進行評估。4. 核酸提取 / 純化組分（如適用）的主要組成、 原理介紹及相關(guān)的驗證資料。5. PCR 組分的主要材料（包括引物、探針、各種酶、內(nèi)標及其他主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標準及實驗研究資料，主要包括以下內(nèi)容

22、：（ 1 ）脫氧三磷酸核苷（ dNTP ）核酸的組成成分，包括：dATP 、dUTP 、dGTP 、dCTP 和 dTTP ，11對純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的詳細驗證資料。（2）引物由一定數(shù)量的 dNTP 構(gòu)成的特定序列，通常采用 DNA 合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE）或其他適宜方法純化。需提供對序列準確性、純度、穩(wěn)定性、功能性實驗等的驗證資料。如為外購，應(yīng)提供合成機構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明， 如 PAGE 電泳結(jié)果或高效液相色譜法（ HPLC ）分析圖譜。（ 3）探針特定的帶有示蹤物 （標記物）的已知核酸片段 （寡聚核苷酸片段） ，能與互補核酸序列退火雜交，用于特

23、定核酸序列的探測。合成后經(jīng) PAGE 或其他適宜方法純化，在 5'- 端(和/ 或 3'- 端)進行標記，如熒光素報告基團或其他發(fā)光標記物，在 3'- 端標記熒光素淬滅基團，并經(jīng) HPLC 或其他適宜方法純化，純度應(yīng)達到高效液相色譜純。如為外購，應(yīng)提供合成機構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC 分析圖譜；應(yīng)對探針的核酸序列及標記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進行核實，并作 HPLC 分析。（ 4）PCR 反應(yīng)所需酶DNA 聚合酶，應(yīng)具有 DNA 聚合酶活性， 無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性，如： 94 保溫 1 小時后仍保持50% 活性；尿嘧啶糖基化酶（UNG ），具有尿嘧啶糖基

24、化活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，應(yīng)對酶活性有合理驗證；應(yīng)提供有關(guān)保存穩(wěn)定性、活性及功能實驗等的驗證資料。6. 核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無脫氧核糖核酸酶（ Dnase ）或核糖核酸酶（ Rnase ）污染。12（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料主要生產(chǎn)工藝主要包括： 配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對pH 、電導(dǎo)率等關(guān)鍵參數(shù)進行有效控制。生產(chǎn)工藝研究資料應(yīng)能對反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、質(zhì)控體系設(shè)置、 Ct （臨界）值確定等，提供確切的依據(jù)，主要包括以下內(nèi)容：1.主要生產(chǎn)工藝

25、介紹，可以圖表方式表示。2.反應(yīng)原理介紹。3.基因序列的選擇、 PCR 方法學(xué)特性介紹。4.核酸提取 / 純化方法的優(yōu)化。5.確定最佳 PCR 反應(yīng)體系的研究資料，包括酶濃度、引物/ 探針濃度、 dNTP 濃度、陽離子濃度、樣本量及反應(yīng)體積等。6. 確定 PCR 反應(yīng)各階段溫度、時間及循環(huán)數(shù)的研究資料。7. 對于基線閾值（ threshold ）和閾值循環(huán)數(shù)（ Ct ）確定的研究資料。（七）分析性能評估資料企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對申報試劑進行的所有性能驗證的研究資料，包括具體的試驗方法（操作步驟）、內(nèi)控標準、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細資料。對于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸定性檢測試劑，建議著重對以下

26、分析性能進行研究。1. 最低檢測限（分析靈敏度）（ 1）最低檢測限的確定13建議使用結(jié)核分枝桿菌標準菌株、牛結(jié)核分枝桿菌標準菌株或BCG 標準菌株（如適用）的梯度稀釋液來確定最低檢測限。每個梯度進行不少于 20 次的重復(fù)檢測，將具有 95% 陽性檢出率的菌株濃度作為最低檢測限。應(yīng)明確每份菌株的來源、基因型特性、濃度、制備方法等信息。企業(yè)可采用鋪板計數(shù)細菌集落形成單位（colonyformingunit ， CFU）的方法進行菌株濃度的確認，以CFU/mL 作為菌株濃度的表示方式；也可采用國家參考品對菌株的濃度進行標定，以“個菌 /mL ”作為菌株濃度的表示方式。為確定痰樣本的最低檢測限，建議將

27、已知濃度的菌株與結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群陰性的痰樣本進行混合，完全按照申報試劑的操作步驟對此“制備痰液”進行樣本前處理、核酸提取 / 純化擴增等。對結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群陰性痰樣本的確認，應(yīng)采用涂片、培養(yǎng)鑒定、臨床診斷和其他已上市的核酸檢測試劑盒進行聯(lián)合確認。最低檢測限的濃度應(yīng)是“制備痰液”的最終菌株濃度。（ 2）最低檢測限的驗證應(yīng)在最低檢測限的菌株濃度對結(jié)核分枝桿菌、牛結(jié)核分枝桿菌或BCG 菌株（如適用）進行至少 20 次的重復(fù)試驗驗證，每種菌株的陽性檢出率應(yīng)至少為 95% 。企業(yè)應(yīng)能夠提供用于最低檢測限驗證的各個菌株的來源、制備方法及濃度等信息?！白畹蜋z測限的驗證”的試驗方法可參考“最低檢測限的確定

28、”。2. 分析特異性（ 1）交叉反應(yīng)用于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測試劑交叉反應(yīng)驗證的病原體種類主要考慮以下幾方面：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似14的臨床癥狀、采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他病原體。主要包括：非結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（NTM ）、常見的口腔和呼吸道共生的病原體等，具體目錄參見表1和表2。建議在病原體感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進行交叉反應(yīng)的驗證。建議進行交叉反應(yīng)驗證的分枝桿菌、細菌或者真菌的最低濃度為10 6CFU/mL ；進行交叉反應(yīng)驗證的病毒的最低濃度為10 5 PFU/mL（ plaque forming unit ，PFU，空斑形成單位）。應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗證的病原體的制備方

29、法、來源、種屬和濃度等信息。對于某些難以培養(yǎng)或者因為生物安全性無法培養(yǎng)的病原體，可采用病原體核酸樣本進行交叉反應(yīng)的驗證。應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗證的病原體核酸的來源、組成和濃度等信息。采用病原體核酸樣本進行試驗時，應(yīng)將核酸樣本視為實際使用過程中參與PCR 反應(yīng)的核酸樣本，根據(jù)試劑說明書的要求配制PCR 反應(yīng)體系，進行擴增。有關(guān)交叉反應(yīng)驗證的信息應(yīng)以列表的方式在產(chǎn)品說明書的【產(chǎn)品性能指標】項中體現(xiàn)。表 1用于交叉反應(yīng)性研究的其他分枝桿菌（非結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群）堪薩斯分枝桿菌蘇加分枝桿菌海分枝桿菌龜分枝桿菌土地分枝桿菌偶發(fā)分枝桿菌次要分枝桿菌恥垢分枝桿菌潰瘍分枝桿菌膿腫分枝桿菌戈登分枝桿菌胃分枝桿菌1

30、5蟾蜍分枝桿菌胞內(nèi)分枝桿菌鳥分枝桿菌草分枝桿菌瘰疬分枝桿菌表 2：用于交叉反應(yīng)研究的其他病原體肺炎鏈球菌金黃色葡萄球菌流感嗜血桿菌巴西諾卡氏菌大腸桿菌綠膿桿菌表皮葡萄球菌白色念珠菌人類副流感病毒（ 1,2,3 型）鼻病毒人流感病毒（ A 型和 B 型）腺病毒風(fēng)疹病毒水痘 - 帶狀皰疹病毒隱球菌（ 2）干擾物質(zhì)潛在的干擾物質(zhì)主要包括：內(nèi)源性物質(zhì)（如血液、粘液、人細胞等）和外源性藥物。建議使用醫(yī)學(xué)相關(guān)水平的干擾物濃度進行驗證，另外，建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(最差條件 )條件下進行評價。 對于常見藥物干擾試驗，建議參照相應(yīng)藥物藥代動力學(xué)研究確定的治療藥物濃度添加相應(yīng)藥物進行干擾驗證。1

31、6表 5：建議用于干擾研究的外源性藥物異煙肼乙胺丁醇利福平吡嗪酰胺卡那霉素鏈霉素抗生素（如：阿莫西林、左氧氟沙星）抗病毒藥（如：扎那米韋）鼻腔噴霧劑或滴鼻劑(如：腎上腺素、羥甲唑鼻腔糖皮質(zhì)激素（如：倍氯米松、地塞啉、含防腐劑的氯化鈉溶液)米松、氟尼縮松、曲安西龍、布地奈德、莫美他松、氟替卡松）鼻用軟膏類（如：莫匹羅星）3. 精密度測量精密度的評價方法并無統(tǒng)一的標準可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。具體實驗方法可以參考相關(guān)的 CLSI-EP 文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。企業(yè)應(yīng)對每項精密度指標的評價標準做出合理要求，如標準差或變異系數(shù)的

32、范圍等。針對申報試劑的精密度評價主要包括以下要求。（ 1）對可能影響檢測精密度的主要變量進行驗證， 除申報試劑（包括提取 / 純化組分和 PCR 組分）本身的影響外， 還應(yīng)對不同的適用機型（如 PCR 分析儀）、操作者、地點等要素進行相關(guān)的驗證。（ 2）合理的精密度評價周期，例如：為期至少12 天的檢測，每天至少由 2 人完成不少于2 次的完整檢測，從而對批內(nèi)/ 批間、日內(nèi)/ 日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。如有條件，申請人應(yīng)選擇不同的實驗室進行重復(fù)實驗以對室間精密度進行評價（參17考 FDA 的指導(dǎo)原則）。（ 3）建議采用結(jié)核分枝桿菌標準菌株（陰性樣本可能不適用）作為樣本，在以下

33、 3 個濃度水平進行驗證：陰性樣本：不含結(jié)核分枝桿菌標準菌株或者結(jié)核分枝桿菌標準菌株濃度低于最低檢測限的樣本， 陰性檢出率應(yīng)為 100% （n 20 ）。弱陽性樣本：結(jié)核分枝桿菌標準菌株濃度略高于試劑盒的最低檢測限，陽性檢出率應(yīng)高于 95% （n 20 ）。中等陽性樣本： 結(jié)核分枝桿菌標準菌株濃度約為最低檢測限的 2 倍或 3 倍，陽性檢出率為 100% 且 CV 15% （n 20 ）。4. 反應(yīng)性（包容性）應(yīng)證明申報試劑可以檢測代表不同基因多態(tài)性的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌株。應(yīng)至少對結(jié)核分枝桿菌、牛結(jié)核分枝桿菌或BCG 菌株 (如適用 )、非洲分枝桿菌和田鼠分枝桿菌進行驗證。應(yīng)采用略高于最低檢

34、測限濃度的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌株進行研究。應(yīng)提供各個菌株的來源、菌株特性及濃度等信息。應(yīng)證明所有采用的菌株含有目的基因。5.不同適用樣本類型、核酸提取/ 純化方法、樣本前處理方法的分析性能資料的要求由于痰和支氣管肺泡灌洗液樣本之間差異較大，如申報試劑同時包括這兩種樣本類型，申請人應(yīng)提交每種樣本類型的全項目分析性能評估資料。對于每種樣本類型而言，申請人應(yīng)提供適用的核酸提取/ 純化方法（進行全項目分析性能評估的核酸提取/ 純化方法除外）與后續(xù)試18驗配合進行的性能試驗（至少包括最低檢測限和精密性項目），以證明不同的核酸提取 / 純化方法等效。對于每種適用樣本類型而言，申請人應(yīng)提交適用的樣本前處理方

35、法（進行全項目分析性能評估的樣本前處理方法除外）與后續(xù)試驗配合進行的性能試驗（最低檢測限項目），以證明不同的樣本前處理方法等效。如果申報試劑同時適用于幾種不同的臨床樣本類型、樣本前處理方法和核酸提取 / 純化方法，每種樣本類型應(yīng)明確其適用的樣本前處理方法（一種或幾種）和核酸提取/ 純化方法（一種或幾種） 。如果申報試劑最終僅保留某種樣本類型、某種樣本前處理方法和某種核酸提取 / 純化方法，分析性能評估資料應(yīng)采用該組合進行。6注意事項對于適用多個機型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機型】項中所列的所有型號儀器的至少三批全性能評估資料。（八）陽性判斷值或參考區(qū)間確定資料對于此類試劑，陽性判斷值或參

36、考區(qū)間確定資料主要是指Ct 值的確認資料，建議申請人采用受試者工作特征（ROC ）曲線的方式確定申報試劑用于結(jié)果判斷的臨界值。有關(guān)ROC 曲線分析的細節(jié)，請參考CLSI 的 GP10-A的文件： AssessmentoftheClinicalAccuracy of Laboratory Tests Using Receiver Operating Characteristics(ROC) Plots) 。如存在灰區(qū)， 應(yīng)提交灰區(qū)上下限確定的詳細的研究資料。（九）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用19樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、運輸穩(wěn)定

37、性、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。申請人應(yīng)對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括冷藏和冷凍兩種條件下的有效期驗證， 可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇 35 個溫度點（應(yīng)至少包括范圍的上限和下限溫度），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行分析性能驗證，從而確認不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。用于樣本穩(wěn)定性研究的樣本應(yīng)包括最低檢測限濃度的樣本。除了定性結(jié)果之外，還需要提供原始信號的分析，如 Ct 。適于冷凍保存

38、的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。（十）臨床試驗1. 臨床試驗機構(gòu)的選擇申請人應(yīng)當選定不少于3 家（含 3 家）臨床試驗機構(gòu)，按照有關(guān)規(guī)定開展臨床試驗。臨床試驗機構(gòu)應(yīng)獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認可。申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點及其預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種、流行病學(xué)背景、病原微生物的特性等因素選擇臨床試驗機構(gòu)。臨床試驗機構(gòu)必須具有與試驗用體外診斷試劑相適應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員及儀器設(shè)備，并能夠確保該項試驗的實施。2 臨床試驗樣本的選擇和樣本量20臨床試驗對象的選擇應(yīng)滿足如下條件：（ 1）具有肺結(jié)核癥

39、狀/ 體征的疑似肺結(jié)核患者病例，不建議選擇正常健康人群；（ 2）最終臨床診斷為肺結(jié)核患者的病例不少于 350 例，并且涂片陰性的肺結(jié)核患者占所有肺結(jié)核患者的比例應(yīng)不小于 50% ；（3）應(yīng)包括其他易混淆疾病的病例（最終臨床診斷確定不是肺結(jié)核） ，以對試驗用體外診斷試劑的特異性進行評價，此部分病例不少于150 例；（ 2）單份臨床樣本應(yīng)足量，以便同時進行試驗用體外診斷試劑、對比試劑和其他合理的方法等的檢測。鑒于痰和支氣管肺泡灌洗液樣本之間的差異較大，如試驗用體外診斷試劑同時適用于兩種樣本類型，則每種樣本類型的例數(shù)不少于500 例。臨床試驗應(yīng)以新鮮樣本為主，如采用凍存樣本應(yīng)另行說明。臨床試驗應(yīng)對不

40、同的核酸提取/ 純化方法和樣本前處理方法進行驗證。3 對比試劑的選擇對于“已有同品種批準上市”的試劑的臨床試驗，可按照法規(guī)要求選擇境內(nèi)已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑與對比試劑進行比較研究試驗，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。同時，申請人還應(yīng)選擇一定數(shù)量的臨床樣本進行試驗用體外診斷試劑與培養(yǎng)鑒定方法的比較研究， 每種樣本類型不少于50 例經(jīng)培養(yǎng)和菌種鑒定方法確定為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的陽性樣本。其中，培養(yǎng)方法可采用傳統(tǒng)的固體培養(yǎng)方法或臨床普遍認可的液體培養(yǎng)方法，菌種鑒定方法可采用對硝基苯甲酸（ p-methylbenzylsulfonyl，

41、PNB ）、測序、高性能的液相層析、質(zhì)譜、或其他已上市的核酸檢測試劑盒方法。21對于無法選擇對比試劑的新研制的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測試劑，其臨床試驗應(yīng)選擇培養(yǎng)鑒定和 / 或核酸序列測定方法作為對比方法，總例數(shù)不少于 500 例。用于核酸序列測定的引物序列應(yīng)不同于試驗用體外診斷試劑中用于檢測靶基因的引物序列。如采用培養(yǎng)鑒定作為對比方法，考慮到檢測結(jié)果之間不具有直接的可比性，建議對所有陽性病例采用其他分子生物學(xué)技術(shù)（如核酸序列測定）對結(jié)果進行確認。如果試驗用體外診斷試劑同時適用于幾種不同的臨床樣本類型、樣本前處理方法和核酸提取 / 純化方法，每種樣本類型應(yīng)明確規(guī)定其適用的樣本前處理方法（一種或

42、幾種）和核酸提取 / 純化方法（一種或幾種）。如果試驗用體外診斷試劑最終僅保留某種樣本類型、某種樣本前處理方法和某種核酸提取 / 純化方法，臨床試驗應(yīng)采用該組合進行。4. 臨床試驗方法、臨床數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析（ 1）應(yīng)在臨床試驗方案或者臨床試驗報告中詳細描述試驗用體外診斷試劑和對比試劑的具體操作步驟。應(yīng)明確所有試驗采用同一份樣本進行。應(yīng)明確每個試驗陰陽性的判定標準，特別應(yīng)明確何為培養(yǎng)鑒定的陰陽性。（ 2）在臨床報告中，以列表的方式，明確：總樣本例數(shù)、涂片陽性的總樣本例數(shù)、涂片陰性的總樣本例數(shù)、臨床診斷為肺結(jié)核的患者總例數(shù)、涂片陰性的肺結(jié)核患者例數(shù)、涂片陽性的肺結(jié)核患者例數(shù)、非結(jié)核的其他呼吸道疾病患

43、者與易混淆疾病樣本例數(shù)，以判斷病例選擇的科學(xué)合理性。22（ 3）臨床試驗數(shù)據(jù)應(yīng)以列表的方式表示，包括每個樣本的涂片結(jié)果、臨床診斷結(jié)果、試驗用體外診斷試劑的結(jié)果、對比試劑的結(jié)果。（ 4）對臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如檢測結(jié)果一致性分析、受試者工作特征（ ROC ）曲線分析、陰性 / 陽性符合率等。（ 5）除了對總樣本進行統(tǒng)計分析外，還應(yīng)對涂片陰性的樣本和涂片陽性的樣本進行分層統(tǒng)計分析，統(tǒng)計方法同總樣本的統(tǒng)計方法。（ 6）臨床試驗中的某些樣本，采用試驗用體外診斷試劑檢測時為陽性，采用培養(yǎng)鑒定方法檢測時為陰性， 出現(xiàn)這種情況的原因有：（1 ）樣本前處理導(dǎo)致結(jié)核菌的培養(yǎng)受抑制； （2）樣

44、本中結(jié)核菌的濃度過低。這可能導(dǎo)致試驗用體外診斷試劑的特異性低。 因此，在進行（ 4）、（ 5）統(tǒng)計分析的同時，建議補充進行試驗用體外診斷試劑與最終臨床診斷的對比統(tǒng)計分析，以客觀地反應(yīng)試驗用體外診斷試劑的臨床特異性。對于試驗用體外診斷試劑與對比試劑的等效性評價，常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，對定性結(jié)果進行四格表卡方或 kappa 檢驗以驗證兩種試劑定性結(jié)果的一致性，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。在臨床試驗方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價試驗用體外診斷試劑與對比試劑是否等效的標準。5. 結(jié)果差異樣本的驗證在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本

45、，應(yīng)采用金標準或其他合理的方法進行復(fù)核，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進行分析。236. 臨床試驗方案臨床試驗實施前，研究者應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床試驗方案。各臨床試驗機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。試驗方案中應(yīng)確定嚴格的樣本入選 / 排除標準，任何已經(jīng)入選的樣本再被排除出臨床試驗都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定

46、試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各臨床試驗機構(gòu)選用的對比試劑應(yīng)保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，試驗用體外診斷試劑的樣本類型不應(yīng)超越對比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了對比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)選擇核酸測序或其他合理方法對額外的樣本類型進行驗證。7. 臨床試驗報告的撰寫根據(jù)體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床試驗報告中對以下內(nèi)容進行詳述。（ 1）臨床試驗總體設(shè)計及方案描述臨床試驗的

47、整體管理情況、臨床試驗機構(gòu)選擇、臨床主要研究24人員簡介等基本情況介紹。病例納入 / 排除標準、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標準。樣本類型，樣本的收集、處理及保存；痰液的培養(yǎng)、鑒定方法；培養(yǎng)陰性、陽性的具體涵義；鑒定陰性陽性的具體含義；等。統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。（ 2）具體的臨床試驗情況試驗用體外診斷試劑和對比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。對各試驗機構(gòu)的病例數(shù)、年齡分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品測量值的抽查結(jié)果評估。具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期

48、保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。（ 3）統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或其他合理方法的復(fù)核以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其 95% （或 99% ）的置信區(qū)間。以交叉表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，對定性結(jié)果進行四格表卡方或 kappa 檢驗以驗證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。（ 4）討論和結(jié)論25對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床試驗有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。四、名詞解釋1聚合酶鏈式反應(yīng)polymerase chain reaction, PCR：聚合酶鏈式反應(yīng)或多聚酶鏈式反應(yīng)是一種對特定的DNA 或 RNA片段在體外進行快速擴增的方法。由變性 - 退火 -