干擾素基因研究進(jìn)展和在抗病育種中的應(yīng)用展望論文

1、干擾素基因研究進(jìn)展與其在抗病育種中的應(yīng)用展望干擾素是動物機(jī)體最重要細(xì)胞因子之一，目前計有5種豬干擾素（I型干擾素、和II型干擾素）被發(fā)現(xiàn)。本文列舉了主要豬干擾素（INF、）的基因結(jié)構(gòu)、抗病毒和免疫調(diào)節(jié)功能，概述了干擾素在機(jī)體中以JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路方式為主的抗病毒機(jī)理，同時分析了豬干擾素基因可能存在與豬綜合抗病力密切相關(guān)的遺傳多態(tài)性與其在豬抗病育種中的應(yīng)用前景。1957年Isaacs和Lindenman在進(jìn)行雞胚細(xì)胞流感病毒感染試驗中首次發(fā)現(xiàn)一類能干擾和抑制病毒復(fù)制的可溶性細(xì)胞分泌物，故取名為干擾素（interferon）。Wheelock與Green分別于1965年和1969年相繼發(fā)

2、現(xiàn)免疫活性細(xì)胞經(jīng)絲裂原或抗原刺激后，產(chǎn)生一類對酸敏感的干擾素，稱為免疫干擾素。目前依據(jù)干擾素對酸的敏感性通常分為I型干擾素（酸敏感型）和II型干擾素（耐酸型）兩類。幾乎所有脊椎動物均可產(chǎn)生這兩類干擾素，根據(jù)產(chǎn)生干擾素細(xì)胞種類不同，I型干擾素至今已發(fā)現(xiàn)INF-、等6種類型，而II型干擾素迄今為止僅發(fā)現(xiàn)INF-一種（Domeika, 2003）。由于干擾素具廣譜、高效抗病毒功能，與其對免疫系統(tǒng)起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用，因此成為當(dāng)今免疫學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)研究最為活躍的領(lǐng)域之一2、豬干擾素與其基因結(jié)構(gòu)目前所發(fā)現(xiàn)的豬干擾素包括INF-、和INF-，并且INF-未在其它物種中發(fā)現(xiàn)（Domeika, 2003）。

3、豬INF-、分別是由12個和5個以上的相關(guān)功能基因編碼的蛋白質(zhì)家族，這些兩種干擾素的各亞型之間同源性很高，天然INF-常常是INF-、功能基因表達(dá)產(chǎn)物的混合體，而INF-、和INF-僅由單一基因編碼（Bonnardiere, et al., 1994）?，F(xiàn)在已完成基因克隆、測序和定位的豬干擾素基因主要包括INF-、和INF-，匯總?cè)缦拢?、干擾素作用機(jī)理3.1、干擾素主要生物學(xué)功能3.1.1、干擾素作用特點(diǎn) ：作為機(jī)體最重要的細(xì)胞因子之一，干擾素主要生物學(xué)功能體現(xiàn)為廣譜的抗病毒活性和免疫調(diào)節(jié)功能，其作用特點(diǎn)可概括為（業(yè)華主編，2000；周光炎主編，2000）： 1、干擾素屬誘生蛋白，正常細(xì)胞一

4、般不自發(fā)產(chǎn)生干擾素，在受誘生劑（包括病毒、細(xì)菌和某些化學(xué)合成物質(zhì)）激發(fā)后，干擾素基因去抑制而表達(dá)； 2、干擾素系統(tǒng)是目前所知的發(fā)揮作用最快的第一病毒防御體系，可在很短時間（幾分鐘）使機(jī)體處于抗病毒狀態(tài)，并且機(jī)體在1-3周時間對病毒的重復(fù)感染有抵抗作用； 3、干擾素的抗病毒效應(yīng)是通過與靶細(xì)胞受體結(jié)合，誘導(dǎo)抗病毒蛋白（AVP）而間接發(fā)揮作用，對病毒起抑制作用而非殺滅； 4、干擾素具有種屬特異性，并且不同病毒、不同細(xì)胞對干擾素敏感性不同； 5、I型和II型干擾素發(fā)揮不同效應(yīng)，不能相互替代。3.1.2、干擾素主要生物學(xué)功能： 目前對INF-、生物學(xué)功能和作用機(jī)理研究報道較多，I型和II型干擾素來源不同

5、（INF-主要由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，INF-來源于成纖維細(xì)胞，而INF-主要產(chǎn)生于T細(xì)胞、T細(xì)胞和NK細(xì)胞），揮發(fā)的生物學(xué)效應(yīng)存在一定差異。干擾素的主要生物學(xué)功能可概括為（Samuel,2001）： 1、廣譜抗病毒功能：I型和II型干擾素基因均可經(jīng)誘導(dǎo)劑激活而表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物通過特定信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，激活干擾素誘導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄，機(jī)體合成多種具阻斷病毒復(fù)制功能的抗病毒酶和蛋白質(zhì)，抵抗病毒對機(jī)體細(xì)胞的感染； 2、免疫調(diào)節(jié)功能：I型干擾素可增強(qiáng)MHC-I類分子表達(dá)，而強(qiáng)烈抑制MHC-II類分子表達(dá)；II型干擾素可促進(jìn)MHC-II類分子表達(dá)，兩類干擾素的協(xié)同調(diào)節(jié)作用，使機(jī)體處于最佳免疫應(yīng)答狀態(tài)。此外INF-的生

6、成可促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th1分化，而抑制Th2的生成，由于Th1和Th2分別介導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫，因此INF-可根據(jù)不同病原感染，與其它細(xì)胞因子（如IL-4等）共同作用，對機(jī)體進(jìn)行免疫干預(yù)，實現(xiàn)免疫系統(tǒng)防御功能。 3、免疫增強(qiáng)功能：I型和II型干擾素均可刺激NK細(xì)胞并增強(qiáng)其殺傷功能，有利于機(jī)體清除病毒感染；此外INF-是主要的巨噬細(xì)胞活化因子（macrophage-activating factor，MAF），促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬能力和炎癥反應(yīng)，并可直接促進(jìn)T、B細(xì)胞分化和CTL成熟，刺激B細(xì)胞分泌抗體，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能。3.2、干擾素抗病毒機(jī)理干擾素基因的激活和表達(dá)是機(jī)體第一道病毒防御體

7、系，它先于機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)。雖然干擾素還具其它多種生物學(xué)功能（如對免疫系統(tǒng)的調(diào)控、影響細(xì)胞生長、分化和凋亡等），但干擾素對入侵病毒的非特異性抑制功能，對于許多疾病的預(yù)防和治療意義重大。根據(jù)對人和小鼠的相關(guān)研究，干擾素對病毒的防御反應(yīng)主要是通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活通路，導(dǎo)致一系列受干擾素調(diào)控基因表達(dá)，生成多種直接作用于入侵病毒的酶和蛋白質(zhì)，保護(hù)機(jī)體免受感染,其中JAK-STAT通路是干擾素介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活的主要方式（Samuel,2001）。JAK為Janus家族的蛋白酪氨酸激酶，包括Jak-1、Jak-2、 Jak-3、 Tyk-2，STAT（signal transducer and

8、 activator of transcription）即細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子（包括STAT-1、STAT-2、STAT-3、STAT-4、STAT-5a、STAT-5b、STAT-6），其中Jak-1、Jak-2、Tyk-2與STAT-1、STAT-2直接參與了干擾素介導(dǎo)的JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。JAK-STAT通路具體過程可表示為（周光炎主編，2000；Samuel,2001）：（1）首先從受誘導(dǎo)表達(dá)的INF-/和INF-分別與異構(gòu)二聚體受體INFAR1-INFAR2和INFGR1-INFGR2的胞外區(qū)結(jié)合開始，由此激活與兩種受體胞區(qū)相連的蛋白酪氨酸激酶Jak-1、Tyk-2與Ja

9、k-1、Jak-2； （2）STAT-1、STAT-2在Jak-1、Tyk-2催化作用下，使蛋白鏈特定位置的酪氨酸磷酸化并形成異二聚體，再與干擾素調(diào)節(jié)因子-9（INF-9）形成三聚體，而兩分子的STAT-1在Jak-1、Jak-2作用下形成同源二聚體； （3）形成的三聚體和同源二聚體分別與染色體的ISRE元件和GAS元件結(jié)合，從而激活各種抗病毒基因啟動子，生成多種抗病毒蛋白，參與機(jī)體的病毒防御快速反應(yīng)。由干擾素誘導(dǎo)生成的抗病毒蛋白主要包括：（業(yè)華主編，2000；Samuel,2001） （1）雙鏈RNA依賴性蛋白激酶（PKR，常稱為P1/eIF-2），主要功能為阻斷宿主細(xì)胞mRNA合成病毒蛋白

10、質(zhì)； （2）2，5腺苷酸合成酶（2,5-oligoadenylate synthetase，OAS），主要功能為激活源性RNase L，活性RNase L可降解病毒mRNA；（3）腺苷脫氨酶I（adenosine deaminase 1，ADAR1），可將病毒RNA中堿基A修飾為I而阻止病毒蛋白質(zhì)合成；（4）Mx蛋白（一種GTP結(jié)合蛋白），可與病毒核蛋白結(jié)合而損傷病毒衣殼蛋白；（5）氮氧化物合成酶（nitric oxide synthase，NOS），可使機(jī)體產(chǎn)生NO，NO在免疫防衛(wèi)中可發(fā)揮重要作用。4、干擾素基因在豬抗病育種中的應(yīng)用展望4.1、畜禽抗病力性狀的遺傳基礎(chǔ)畜群對大多數(shù)疾病的抗性與

11、其他重要經(jīng)濟(jì)性狀同屬數(shù)量性狀，受微效多基因與環(huán)境的共同影響（Axford et al.，2000）。研究表明畜禽對多數(shù)呼吸道、消化道類疾病的抗病力性狀存在加性遺傳方差：Lundheim通過估計公畜遺傳方差組分，估計瑞典豬群對呼吸道疾病易感性h2為0.14，萎縮性鼻炎易感性h2為0.16（1979）；腸道疾病的h2為0.59（1988）。Pryztulski and Porzeczkowska (1980)估計了豬對螺旋體的抗病力h2為0.20-0.21；Bumstead et al.（1991）分析了8個不同雞的近交系試驗對7種不同種球蟲、沙門氏桿菌、大腸桿菌、馬立克氏病毒、傳染性支氣管炎病毒

12、以與5種禽白血病病毒的抗性，結(jié)果表明，各種近交系對病原的抗性均存在差異，結(jié)果表明畜禽抗病力大多受多基因與環(huán)境效應(yīng)共同影響。盡管數(shù)量性狀的多基因效應(yīng)為開展豬特定病原抗病力選育奠定了理論基礎(chǔ)，但在育種實踐中至今仍存在待以解決的問題，具體表現(xiàn)為：（1）對特定疾病抗性的直接選擇所耗費(fèi)的成本和對生產(chǎn)造成的損失極其巨大；（2）選擇對某種病原的抗性可能導(dǎo)致對其它病原的易感性；（3）對特定病原的抗性的間接選擇，實質(zhì)上導(dǎo)致對病原本身生存力的同步正向選擇，進(jìn)而阻礙了畜禽抗病力的選擇效果（Gandon et al.,2001）。因此對畜禽先天的、無病原特異性的綜合防御能力綜合抗病力的選擇成為畜禽抗病育種研究的重要容

13、，而尋找控制綜合抗病力主效基因（QTL）或遺傳標(biāo)記，是開展畜禽綜合抗病力選育重要手段。4.2、干擾素與抗病力的關(guān)系干擾素強(qiáng)大的抗病毒和多種免疫調(diào)節(jié)功能，使得干擾素基因有可能成為豬抗病力選育的理想侯選基因。迄今為止，有關(guān)豬干擾素基因的遺傳多態(tài)性與綜合抗病力的相關(guān)分析的研究仍未見報導(dǎo)。但有關(guān)人類疾病與干擾素基因多態(tài)性相關(guān)分析的研究報道對今后開展豬抗病力選育的研究具一定借鑒作用：如不同IFN-基因型與日本國腎病的易感性顯著相關(guān)（Masutani et al.,2003）；IFN-基因存在一與人肺炎易感群有關(guān)的單核苷酸標(biāo)記（Lopez-Maderuelo et al，2003）；人對乙肝病毒的易感性與

14、IFN-基因表達(dá)量差異有關(guān)（Ben-Ari et al.，2003）；Lio et al.（2002）、Stassen et al.（2002）、Lu et al（2002）也報導(dǎo)了類似研究結(jié)果。此外，大量體和體外試驗表明，豬干擾素對生產(chǎn)具重大威脅的傳染病病毒均具有防御和抑制作用。一系列體外試驗表明：用IFN-處理感染PRRSV(繁殖與呼吸綜合征病毒)的豬巨噬細(xì)胞，可抑制PRRSV增殖（Bautista & Molitor，1999)；用重組interferon-處理Marc-145細(xì)胞后，可抑制PRRSV野毒株和細(xì)胞適應(yīng)性毒株增殖（Rowland ，2001)；豬IFN-/能有效抑制

15、口蹄疫病毒的活力（Chinsangaram et al.，1999）；:豬重組IFN-可抑制感染傳染性胃腸炎冠狀病毒的豬上皮細(xì)胞和肺巨噬細(xì)胞中病毒復(fù)制（Charley B, et al，1988)；豬INF-可抑制感染豬瘟病毒的單核細(xì)胞和肺巨噬細(xì)胞的病毒復(fù)制（Esparza et al,1988）。動物體試驗表明，同時注射豬瘟疫苗和干擾素，可增強(qiáng)對豬瘟病毒的防御能力（Suradhat，et al. 2001）；感染TGEV的仔豬，可在腸道上皮組織中迅速產(chǎn)生抗TGEV的IFN-（Riffault et al.，2001)。干擾素(IFN)根據(jù)其產(chǎn)生細(xì)胞不同和理化性質(zhì)、犐z物學(xué)特性的差異可分為干擾

16、素(IFN-)、干擾素(IFN-)和-干擾素(IFN-)。它們在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、抗病毒感染中具有重要作用。檢測IFN的方法主要分為定量測定(常用ELISA)和生物學(xué)活性的檢測，后者較為常用。(一)原理干擾素能刺激某些指示細(xì)胞(如人羊膜上皮細(xì)胞Wish株、人喉癌細(xì)胞株Hep-2以與人胚肌皮或肺單層細(xì)胞)產(chǎn)生抗病毒蛋白，從而使細(xì)胞免受水皰性口炎病毒(VSV)的攻擊，根據(jù)待測樣品不同稀釋度的保護(hù)能力，計算出干擾素生物學(xué)活性單位。(二)操作步驟96孔培養(yǎng)板中加入不同稀釋度的IFN和標(biāo)準(zhǔn)IFN，每個稀釋度設(shè)3孔，每孔50l，病毒對照不加IFN。每孔加入100l 1.52×10 ml Wish或H

17、ep-2細(xì)胞懸液，37、CO?孵箱培養(yǎng)612h，使細(xì)胞貼壁為單層 。每孔加入50l含100個TCID50 VSV, 細(xì)胞對照不加病毒。根據(jù)細(xì)胞病變狀態(tài)，終止培養(yǎng)前34h。加入5mgml MTT, 15L。加入適量生理鹽水，用滴管輕輕吹吸。棄去懸浮病變細(xì)胞和死細(xì)胞。200l孔 二甲亞砜(DMSO)，作用10min。測OD(570nm),表示活細(xì)胞中含甲的量，也可用剛果紅攝入法、結(jié)晶紫染色法測定IFN對活細(xì)胞的保護(hù)水平計算:以保護(hù)半數(shù)(50)細(xì)胞免受病毒損害的最高干擾素稀釋度為1個干擾素活性單位。也可從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求得待測樣品的IFN活性單位。(三)試劑和器材1.VSV2.WISH、HeP-2細(xì)胞株

18、或人胚肌皮或肺單層培養(yǎng)物。3.MTT3-(4,5二甲噻唑-2-yl)-2,5-2苯基-四唑溴鹽，二甲亞砜(DMSO)，剛果紅，結(jié)晶紫等。4.10FCS RPMI1640, 培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶、CO?孵箱、超凈臺、酶聯(lián)檢測儀。(四)注意事項1.實驗時先加IFN，后加指示細(xì)胞，以使細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)板底部。2.本法對天然培養(yǎng)上清或重組IFN-、IFN-和IFN-均可檢測其活性單位。干擾素(IFN)在誘導(dǎo)細(xì)胞的抗病毒和抗生長反應(yīng)與調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。尤其是抗病毒反應(yīng)是干擾素的基本功能，其分子機(jī)制正逐步被揭示。IFN誘導(dǎo)的過程實際上是一個信號傳遞和級聯(lián)放大的過程。其主信號途徑通過位于細(xì)胞膜上的酪氨酸

19、激酶使酪氨酸磷酸化，激活信號傳導(dǎo)物和轉(zhuǎn)錄激活因子，然后信號傳導(dǎo)物和轉(zhuǎn)錄激活因子轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核。它們導(dǎo)致了許多基因產(chǎn)物的表達(dá)并由此產(chǎn)生一系列的生理學(xué)進(jìn)程 。干擾素(interferon，IFN)是細(xì)胞在病毒或其他誘生劑作用下產(chǎn)生，具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，干擾素有兩大類型，即I型(主要是和)和II型()干擾素，其中干擾素(IFN-)由白細(xì)胞產(chǎn)生，干擾素(IFN)由成纖維細(xì)胞產(chǎn)生，干擾素(IFN-)則在免疫相關(guān)細(xì)胞合成，每種類型的干擾素都包括多種分子亞型。干擾素的作用是通過與細(xì)胞膜上的特異性受體結(jié)合，引發(fā)級聯(lián)性的信號放大過程，將信號最后傳遞到細(xì)胞核，對一系列基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，并引發(fā)各種生理反應(yīng)，

20、/干擾素(IFN-/)與干擾素(IFN-)信號傳導(dǎo)經(jīng)不同但相關(guān)的途徑，人們在認(rèn)識細(xì)胞對IFN的反應(yīng)，特別是揭示誘導(dǎo)基因表達(dá)途徑等研究領(lǐng)域取得了很大進(jìn)展，現(xiàn)已知道這些途徑包括a、特異I型和II型受體形成后，接上"門神"激酶(Janus kinases，JAKs);b、JAKs對信號介質(zhì)和轉(zhuǎn)錄激活物(signal transducers and activators of transcription，STATs)磷酸化使信號放大。研究IFN信號傳遞所揭示的JAKs和STATs除參與對IFN的信號響應(yīng)外，還參與許多不同的細(xì)胞素和生長因子介導(dǎo)的途徑，目前已經(jīng)了解到哺乳類的4種JAK

21、s和7種STATs。因此，IFN作用于細(xì)胞的過程是：IFN與細(xì)胞上受體結(jié)合，與受體相聯(lián)的JAKs對STATs磷酸化;STATs中的特異酪氨酸殘基被JAKs磷酸化激活后，與磷酸化酪氨酸的Src同源區(qū)2(SH2)相互作用形成同體和異體二聚體。STAT二聚體結(jié)合到基因的-激活序列(gama-activated sequence，GAS)上驅(qū)使臨近基因的表達(dá)。不同的GAS偏好不同的STAT二聚體建立特異性反應(yīng)。此外，STATl-2異體二聚體和STATl同體二聚體都可以結(jié)合到一種干擾素調(diào)節(jié)因子(interferon regulatory factor，IRF)家族成員p48上，組成一個三體結(jié)構(gòu)。由STA

22、Tl-2異體二聚體與p48結(jié)合而成的三體結(jié)構(gòu)稱IFN激活的基因因子3(IFN-stimulated genefactor3，ISGF3)，它同一個結(jié)構(gòu)上與GAS迥然不同的IFN激活的調(diào)節(jié)序列(IFN stimulated regulatory elements，ISREs)結(jié)合,ISREs驅(qū)動多/調(diào)控的基因但也有少數(shù)的IFN-調(diào)控的基因表1、信號傳遞途徑1l 干擾素的信號傳遞途徑IFN-相關(guān)的信號傳遞，要求5個截然不同的蛋白參與，即I型膜蛋白IFNGRl和IFNGR2(IFN-受體亞基)以與JAKl，JAK2和STATl近期的研究揭示這一信號途徑對大多數(shù)IFN-生物學(xué)反應(yīng)而言是帶普遍性的。IF

23、N-受體幾乎在所有的細(xì)胞類型中有表達(dá)，僅可能在成熟的紅細(xì)胞中例外，并且表現(xiàn)出嚴(yán)格的與IFN-結(jié)合能力的物種間特異性，功能活躍的IFN-受體至少含有兩條種屬特異性多肽，IFNGRl(以前所稱的鏈或CD1l9w)，由人類6號染色體或小鼠第10號染色體上的基因編碼，在介導(dǎo)配體結(jié)合、配體通過細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)與信號傳導(dǎo)中起重要作用，IFNGR2(以前所稱鏈或結(jié)合因子1)，是由人類21號染色體或小鼠第16號染色體上基因編碼的一相對分子質(zhì)量為6.2X104多肽，在配體結(jié)合中作用甚微，但也是信號傳遞過程中所必需的。有3組實驗或分析表明JAKs和STATs在IFN-引起的細(xì)胞學(xué)反應(yīng)中起介導(dǎo)作用，一是人突變細(xì)胞系的分離

24、和互補(bǔ)性實驗，揭示JAKl和JAK2在IFN-處理的細(xì)胞中變得有選擇性的活躍，這是配體依賴性激活I(lǐng)FN-目標(biāo)基因的前奏;二是通過生化研究，STATl這一潛在的胞液轉(zhuǎn)錄因子被分離并表現(xiàn)出迅速的酪氨酸磷酸化活性，在IFN-處理的細(xì)胞中很活躍;三是對兩IFN-受體亞基的細(xì)胞間結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)與功能分析，確定了保守的JAKl和JAK2特異結(jié)合位點(diǎn)。此外，IFN-在受體上為STATl誘導(dǎo)出一特異的磷酸酪氨酸結(jié)合位點(diǎn)，由此為激活了的受體與其信號介導(dǎo)元件連接提供了可能。 根據(jù)已有的認(rèn)識，可以歸納一個相對完整的IFN-信號傳遞分子過程的模型，在未激活的細(xì)胞中，IFN-受體亞基彼此不緊密結(jié)合，但它們的膜結(jié)構(gòu)域特異地

25、與JAKl和JAK2結(jié)合，JAKl通過IFNGRl上膜結(jié)構(gòu)域臨近膜的區(qū)域中4個氨基酸殘基(266LPKS269)與之聯(lián)結(jié)，JAK2則聯(lián)結(jié)在IFNGR2膜結(jié)構(gòu)近膜區(qū)的富含脯氨酸的12個序列殘基(263PPSIPLQIEEYL274)上。 功能上活躍的IFN-是同體二聚體，結(jié)合到兩個IFNGRl亞基上，然后為兩個IFNGR2亞基的結(jié)合產(chǎn)生出結(jié)合位點(diǎn)，在由此形成的對稱性信號傳遞復(fù)合體中，受體亞基在細(xì)胞的結(jié)構(gòu)域與所帶的非活性JAKs緊密相鄰，JAKl和JAK2再在自主磷酸化和轉(zhuǎn)移磷酸化作用下依次活化，JAK2首先被活化，活化后的結(jié)構(gòu)特征表現(xiàn)出酶的作用，并對JAKl進(jìn)行活化。 一旦活化后，結(jié)合了受體的J

26、AKs對IFNGRl近C末端含酪氨酸的5殘基序列(440YDKPH444)磷酸化，使其為STATl的結(jié)合形成配對的配體誘導(dǎo)的錨定位點(diǎn)。兩個潛在的STATl蛋白這時結(jié)合到這些位點(diǎn)上，因為SH2識別酪氨酸磷酸化的YDKPH序列，結(jié)合受體的STATl蛋白上靠近C端的701位酪氨酸殘基又被與受體相連的激酶磷酸化，磷酸化了的STATl蛋白從受體上脫離，形成一同體二聚體，在依賴Ran/Tc4的GTPase活性機(jī)制作用下，轉(zhuǎn)位到核，STATl同體二聚體結(jié)合到IFN-誘導(dǎo)性基因的特異GAS序列并激活其表達(dá)。STATl同體二聚體的轉(zhuǎn)錄活性還可被MAP激酶特異作用，對其727位絲氨酸殘基磷酸化而使活性加強(qiáng)。 最近

27、才對IFN-信號的負(fù)調(diào)節(jié)作用有所了解，在某些細(xì)胞中，如T細(xì)胞，IFN-能通過抑制IFNGR2的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)來降低細(xì)胞對IFN-敏感性，但敏感性降低是否也在其他細(xì)胞類型中存在尚不清楚，受IFN-作用被活化后的IFNGRl亞基即迅速脫磷酸化，雖然還沒有資料顯示IFN-受體與特定的磷酸酶相連，但受體的脫磷酸化可能是由細(xì)胞通用磷酸酶作用的結(jié)果，IFN-以與幾類其他細(xì)胞素能誘導(dǎo)稱為SOCS/JAB/SSI的蛋白家族的表達(dá)，這些蛋白可與JAKs結(jié)合并抑制其活性，這一工作揭示細(xì)胞素通過誘導(dǎo)抑制JAK活性的蛋白的合成使細(xì)胞脫敏感性，雖然這些蛋白在細(xì)胞過度表達(dá)后表現(xiàn)出對IFN-誘導(dǎo)的生物學(xué)反應(yīng)的抑制作

28、用，但還沒有足夠的信息來確定其作為酶或細(xì)胞素的特異性，自然，對這些新蛋白的研究將為了解JAKSTAT途徑提供新的資料。 IFN-經(jīng)JAK-STAT的信號傳遞途徑與信號傳遞的特異性問題，通過對小鼠STATl基因敲除獲得的突變體研究進(jìn)行了生理性揭示。STATl突變小鼠表現(xiàn)出正常的組織和器官發(fā)育表型，能產(chǎn)生正常數(shù)量和分布的免疫細(xì)胞，并能繁殖后代，然而，這些小鼠的細(xì)胞對IFN-或IFN-都不能產(chǎn)生明顯的生物學(xué)反應(yīng)，在抵抗微生物和病毒的感染能力上表現(xiàn)出嚴(yán)重的缺陷，相反，體外激活STAT3和STATl表明，STATl突變的小鼠對一些其他的細(xì)胞素如生長激素、表皮生長因子(EGF)和白細(xì)胞介素(IL)-10的

29、反應(yīng)并不表現(xiàn)出異常，綜合起來，這些結(jié)果顯示，在生理條件下，IFN-(多數(shù)情況下也包括IFN-/) 誘導(dǎo)的生理反應(yīng)要求有STATI的參與，而且STATl的作用也主要局限于這一信號途徑，因此推測，IFN-信號傳遞的特異性主要是由STATl兩步過程的瞬時拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)變化而產(chǎn)生的，第一步是將STATl結(jié)合到膜上被激活的受體所形成的特異接納位點(diǎn)上，第二步是激活的STATl二聚體進(jìn)入細(xì)胞核激活一系列細(xì)胞素誘導(dǎo)性基因的表達(dá)。STATl可能與其他轉(zhuǎn)錄因子反應(yīng)來修飾其激活基因表達(dá)的能力，例如，IFN-依賴性誘導(dǎo)9-27基因的表達(dá)被STATl同體二聚體p48復(fù)合體與ISRE而不是GAS元件的反應(yīng)來傳遞，此外，IFN-

30、誘導(dǎo)ICAM-l基因的表達(dá)也依賴STATl與轉(zhuǎn)錄因子Spl的反應(yīng)，只有兩蛋白都與DNA結(jié)合時基因才能表達(dá)。綜上所述，IFN-對細(xì)胞類型特異基因的誘導(dǎo)至少可以部分解釋為細(xì)胞特異的正負(fù)調(diào)控因子對STATl的作用加以修飾的結(jié)果。12 和干擾素途徑響應(yīng)IFN/的主要途徑要求兩受體亞基、兩個JAKs，兩個STATs和IRF家族的轉(zhuǎn)錄因子p48的參與，形成一個多亞基的復(fù)合體，目前勾畫的IFN-/誘導(dǎo)的分子機(jī)制還比較粗略，只有對主要成員單獨(dú)或彼此結(jié)合形成的三維結(jié)構(gòu)加以分析，并在此基礎(chǔ)上對這些結(jié)構(gòu)加以操作，提示出對功能起關(guān)鍵作用的具體反應(yīng)，才能精細(xì)了解IFN-/的信號傳遞過程。 IFN-/信號的大致過程包括5

31、個主要步驟:1)IFN誘導(dǎo)細(xì)胞后，胞外受體在IFN的驅(qū)使下形成二聚體，導(dǎo)致2)啟動級聯(lián)的細(xì)胞酪氨酸磷酸化酶，使3)磷酸化的STATs形成二聚體，被激活后4)轉(zhuǎn)移至核，5)結(jié)合到特異的DNA序列上激活轉(zhuǎn)錄，目前對這一反應(yīng)過程的起始部分了解得較多些，另外還了解了對IFN激活基因(ISGs)在IFN缺乏時的抑制原理，以與在IFN持續(xù)存在時對初始信號反應(yīng)的負(fù)調(diào)節(jié)，除這一主途徑外，IFN-/還行使幾條其他的途徑，盡管這些途徑的生化證據(jù)很有說服力，但對其生理作用還知之甚少，很明顯，不同的IFN-/亞型可以激活截然不同的輔助反應(yīng)途徑，其機(jī)理可能涉與圖1所示不同的新途徑。 目前從分子水平已經(jīng)了解的情況，受體有

32、兩個主亞基：IFNARl(舊文獻(xiàn)稱a亞基)和IFNAR2c(L亞基)，IFNAR2亞基細(xì)胞外側(cè)的IFNAR2a結(jié)構(gòu)域為可溶性的，IFNAR2b(也稱s亞基)上帶有一個短的可通過拼接改變的胞質(zhì)域，當(dāng)過量表達(dá)時，會產(chǎn)生主要的負(fù)作用活性，只有IFNAR2c在IFNAR2基因抑活了的突變細(xì)胞系中恢復(fù)IFN-/的信號過程，與IFN-/受體的情形相反，IFNARl和IFANAR2都不能單獨(dú)與IFN-/結(jié)合，而當(dāng)兩亞基聯(lián)合后則與IFN/具有很強(qiáng)的親和力，一旦與IFN-/結(jié)合上，級聯(lián)作用即開始啟動，首先對預(yù)先聯(lián)系在IFNARl上的Tyk2磷酸化，預(yù)先結(jié)合在IFNAR2c上的JAKl能對Tyk2磷酸化和將其激活

33、，激活了的Tyk2又反過來對JAKI磷酸化并使其進(jìn)一步激活，Tyk2還起到一定的結(jié)構(gòu)作用，因為在Tyk2無效的細(xì)胞中IFNARl的量較少，激活的JAKl和Tyk2負(fù)責(zé)對IFNARl中的Y466，STAT2中的Y690和STATl中的Y701依次磷酸化激活。2、干擾素誘導(dǎo)的抗病毒活性IFNs賦予細(xì)胞抗病毒作用是其基本的功能，也是其得以發(fā)現(xiàn)和研究的原因 IFNs對高等脊椎動物的生存至關(guān)重要，因為它們?yōu)榭褂《镜那趾μ峁┝说谝坏婪谰€，較免疫反應(yīng)要早幾小時至幾天的時間，IFN-/和INF-受體缺損的小鼠對病毒的感染特別敏感，足見干擾素抗病毒作用的重要性，IFN誘導(dǎo)的抗病過程為對付不同的病毒，產(chǎn)生了多條

34、途徑，也衍生了幾種抗病機(jī)制，病毒復(fù)制的每一階段似乎都受到IFN相應(yīng)反應(yīng)的抑制作用，包括侵入與脫衣殼(如SV40，反轉(zhuǎn)錄病毒)，轉(zhuǎn)錄(流感病毒、囊炎病毒)，RNA的穩(wěn)定性(細(xì)小核糖核酸病毒)，翻譯起始(呼腸孤病毒、腺病毒、牛痘病毒)，成熟與組裝與釋放(反轉(zhuǎn)錄病毒、囊炎病毒)。 IFN誘導(dǎo)的抗病毒機(jī)制主要有3條途徑，既PKR(依賴dsRNA的蛋白激酶途徑)、2-5A合成酶途徑和Mx蛋白質(zhì)途徑，這3條途徑的具體作用過程已經(jīng)了解得比較清楚，可以歸納為圖1所示。PKR途徑：PKR(依賴dsRNA的蛋白激酶)是一種絲氨酸一氨酸激酶，在控制基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯中有多重功能，PKR通常是不活躍的，但一旦結(jié)合了ds

35、RNA，它便進(jìn)入自主磷酸化和隨后的不依賴dsRNA的底物磷酸化，PKR的N端為調(diào)節(jié)區(qū)，有兩個保守的dsRNA結(jié)合基點(diǎn)(motif)，第一個基點(diǎn)含有與dsRNA結(jié)合的高度保守性氨基酸序列，與dsRNA結(jié)合，與PKR結(jié)合的dsRNA則沒有序列上的特殊要求;C端為催化活性結(jié)構(gòu)域，但這一活性在dsRNA結(jié)合前是封閉的，當(dāng)N端基點(diǎn)上結(jié)合dsRNA后，可能通過蛋白質(zhì)構(gòu)型的改變，使C端的酶活性表現(xiàn)出來，活化的PKR能對蛋白質(zhì)合成的起始因子elF2的a亞基磷酸化，導(dǎo)致elF2-GDP和循環(huán)因子elF2B形成無活性的復(fù)合體，使蛋白質(zhì)合成迅速停止。 2-5A系統(tǒng)是一個多酶參與的IFN誘導(dǎo)系統(tǒng)，病毒dsRNA激活2

36、-5A合成酶，產(chǎn)生一系列短的2，5寡腺苷酸(2-5A)，2-5A再激活2-5A依賴性Rnase L，Rnase L的作用使大量單鏈RNA水解，由多個基因編碼這些2-5A合成酶，在細(xì)胞的多個部位以不活躍的單體形式存在，2-5A與之結(jié)合后，誘導(dǎo)其形成同體二聚體的活性形式，RNaseL的活性是雙向的，其N-端與2-5A的結(jié)合有關(guān)，C端為酶活性相關(guān)的結(jié)構(gòu)域Rnase L活性由小分子激活的特性，為藥物的設(shè)計開發(fā)提供了一個很好的突破，甚至哺乳動物的2-5A系統(tǒng)被克隆和轉(zhuǎn)入煙草后，轉(zhuǎn)基因煙草可以抗御幾種不同的病毒。 Mx蛋白可由IFN誘導(dǎo)產(chǎn)生，相對分子質(zhì)量7.0X1058.0Xl05，屬于GTPase大家系

37、中的豐富性成員,Mx蛋白質(zhì)在病毒轉(zhuǎn)錄與其他途徑，干擾病毒的復(fù)制、抑制流感病毒和其他負(fù)鏈RNA病毒的生長，鼠源的核Mxl蛋白抑制流感病毒、Thogoto與Dhori病毒，人的細(xì)胞質(zhì)蛋白MxA抑制流感病毒，Thogoto，人副流感病毒等，但不抑制Dhori病毒。 值得一提的是細(xì)胞與病毒的斗爭，幾乎類似于"道"與"魔"的斗法，在細(xì)胞抗御病毒侵染的同時，病毒也對細(xì)胞的防御進(jìn)行反擊，這種反擊不僅僅針對細(xì)胞的慣常防衛(wèi)系統(tǒng)，也有特異針對IFN系統(tǒng)的反擊方式，這種反擊包括采用新的侵染機(jī)制和通過合成新蛋白來削弱或干擾細(xì)胞對IFN的響應(yīng)，例如腺病毒就有一種聯(lián)系RNA(VA

38、RNA)，以VA RNA與PKR結(jié)合可以使其不被激活，流感病毒通過利用細(xì)胞的一種PRK抑制蛋白(分子伴娘hsp40)來抑制細(xì)胞對IFN的反應(yīng)。3、干擾素的其他生理作用(1)抑制細(xì)胞生長，IFN能抑制細(xì)胞生長，這種活性參與其對癌癥和感染的抑制作用，IFN對培養(yǎng)細(xì)胞表現(xiàn)出的抗增生作用對不同的細(xì)胞系差異很大，目前還未能鑒定出由IFN誘導(dǎo)產(chǎn)生的，直接參與抗增殖活性的基因產(chǎn)物，但I(xiàn)FN-a能針對細(xì)胞周期的控制體中的特異因子發(fā)生作用，包括c-myc，Prb，D3和cdc25A蛋白，來抑制細(xì)胞的增殖。(2)控制細(xì)胞凋亡，IFN在細(xì)胞對病毒或其他病源微生物的反應(yīng)關(guān)鍵作用，還包括控制細(xì)胞的死亡這一最終層次上，I

39、FN具有抑制或促進(jìn)細(xì)胞凋亡的雙重活性，發(fā)揮哪種活性取決于細(xì)胞的分化狀態(tài)等因素，例如IFN-便因血清存在與否和IFN-受體水平高低對人T細(xì)胞有促進(jìn)增殖或促進(jìn)死亡作用。 (3)IFN對免疫系統(tǒng)的作用，已知IFN幾乎影響免疫反應(yīng)的全過程，在IFN的大家庭里，IFN-起主要的免疫調(diào)節(jié)作用，它是由一組特定的免疫細(xì)胞(T細(xì)胞和原生殺傷細(xì)胞)在免疫響應(yīng)和發(fā)炎刺激下產(chǎn)生并對免疫效應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)生作用的細(xì)胞素，IFN-/作對免疫的調(diào)節(jié)作用較嚴(yán)謹(jǐn)，它們主要為細(xì)胞抗御病毒感染提供多條機(jī)制來加強(qiáng)免疫反應(yīng)。 總之，IFN對細(xì)胞的作用過程和功能是多方面的，這些功能的發(fā)揮借助信號傳遞過程和細(xì)胞因子的作用，對直接參與作用的蛋白質(zhì)加

40、以修飾，或者激活其活性或者抑制其功能來具體表現(xiàn)出來，這些作用既有針對生理生化過程的，例如對酶蛋白的作用，也有針對基因表達(dá)的，例如對轉(zhuǎn)錄因子和蛋白質(zhì)合成elF因子的作用，IFN的分子作用過程并不是單向的，IFN的誘導(dǎo)反應(yīng)還反過來抑制細(xì)胞對IFN的敏感性，使其對過量的IFN的作用變得遲鈍，病毒的致病作用與IFN誘導(dǎo)細(xì)胞的抗病作用也是一個互動性過程，某些病毒針對IFN的抗病機(jī)制發(fā)展出了特定的應(yīng)對措施。 IFN作用的信號傳遞過程，盡管已總結(jié)出了被廣為接受的模型，但這一模型中最基本的設(shè)想?yún)s受到最近研究發(fā)現(xiàn)的挑戰(zhàn)，Siegel和Takaoka等近來對Fas和腫瘤壞死因子的研究顯示，IFN受體在配體結(jié)合之前

41、便以二聚體形式等待IFN的到來.雞傳染性法氏囊病(IBD)本病在世界各地因造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，所以受到各國高度重視。我國自1979年廣、首先發(fā)現(xiàn)該病以來，迅速傳播全國各地。由于該病引起雛雞的免疫抑制，從而使病雞對多種病原微生物更易感，容易繼發(fā)新城疫、傳染性支氣管炎、大腸桿菌病、葡萄球菌病、慢性呼吸道病等，而且對多種疫苗接種的免疫應(yīng)答能力降低，因此該病已成為目前危害養(yǎng)雞業(yè)的三大主要疫?。∟D、IBD、MD）之一。該病的發(fā)生有明顯的季節(jié)性，多在春夏秋季發(fā)生，冬季發(fā)病相對少一些。在1989年，該病突然在全國呈爆發(fā)流行，發(fā)病率高，死亡率高，在一個養(yǎng)雞場每批雞都發(fā)病，很難控制，但使用疫苗后，免疫效果非常好

42、。發(fā)病雞拉白色米湯樣與綠色稀薄糞便，脫水嚴(yán)重，病變法氏囊出血呈紫色葡萄狀或腫大部出血外部有綠色膠凍樣物，死亡率高，造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，呈現(xiàn)一時的“恐慌”。廣大禽病工作者，對該病進(jìn)行了大量試驗研究，在病原方面各地分離鑒定了多株野毒，還進(jìn)行了血清亞型的研究，證實了亞型的存在和危害，并初步證明我國有超強(qiáng)毒株存在。對病毒結(jié)構(gòu)蛋白的分析和抗原特性的研究，初步揭示了野毒株和標(biāo)準(zhǔn)毒株之間的差異，從而探索了某些弱毒疫苗效果欠佳的原因。對病毒遺傳變異的分析以與利用核酶剪切病毒的RNA等使對該病毒的研究提高到分子生物學(xué)的水平。在診斷技術(shù)的改進(jìn)和提高方面，建立了多種免疫血清學(xué)方法，如獸醫(yī)試驗診斷所和獸醫(yī)研究所的傳染

43、性法氏囊病酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)診斷試劑。還研制成中和性單克隆抗體和核酸探針等，為該病毒抗原或抗體的檢測提供了先進(jìn)的測試手段。在免疫預(yù)防方面，目前國市場上已有多種不同毒力的弱毒疫苗和滅活疫苗，為正確地選擇適當(dāng)?shù)囊呙绾桶才藕侠淼拿庖叱绦蜻M(jìn)行了大量試驗研究，在研究和應(yīng)用更為實用有效的雙價或多價弱毒疫苗方面，獲得良好的免疫效果。在使用疫苗時要弱毒苗和中等毒力疫苗交替使用，或先使用弱毒苗然后再使用中等毒力疫苗對預(yù)防強(qiáng)毒法氏囊病毒的感染非常好。蛋種雞或肉種雞在一生中要免疫兩次油乳劑滅活苗，使小雛雞在早期有母源抗體的保護(hù)，減少發(fā)生傳染性法氏囊病。在防制該病的流行中，各地相對都比較重視實施綜合防制措

44、施，在搞好環(huán)境衛(wèi)生、凈化疫源、合理使用疫苗等措施上建立了一套較為有效的防制辦法。. 雞馬立克氏病(MD)目前呈世界性分布，也是危害養(yǎng)禽業(yè)的三種主要疫病之一。我國1975年開始聯(lián)合攻關(guān)，于1978年復(fù)制成功國際上廣泛應(yīng)用的HVT疫苗，1981年研制成同源弱毒疫苗“814”、CVI988和細(xì)胞游離毒的HVTF與二價苗等。近些年來常有HVT苗免疫失敗的報道，其原因與存在高度致病的超強(qiáng)毒株、母源抗體干擾與其它多種影響免疫失敗的因素有關(guān)。近年來在MDV的分子生物學(xué)研究方面取得了良好的進(jìn)展。應(yīng)用分子克隆技術(shù)成功地構(gòu)建了MDV抗原和B抗原的表達(dá)載體，并在我國首次研究B抗原基因在大腸桿菌和昆蟲多角體病毒中的表

45、達(dá)與其生物學(xué)活性，探討研制MD基因工程疫苗的可行性。還以桿狀病毒為載體，在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)了MDV的基因和B抗原基因，這種用重組DNA技術(shù)產(chǎn)生的和抗原基因，將有助于進(jìn)一步研究該基因產(chǎn)物在MDV所致腫瘤發(fā)生與抗MDV免疫保護(hù)中的生物學(xué)功能。此外，研制成的MDV單克隆抗體和核酸探針，能區(qū)分不同型MDV，為該病的特異性診斷和疫情預(yù)測預(yù)報提供了先進(jìn)手段?，F(xiàn)在基本普與了細(xì)胞菌（液氮苗），單純的使用凍干HVT疫苗保護(hù)率較低，選用疫苗時要盡量選質(zhì)量好的CVI988液氮苗或含有CVI988與HVT的二價苗。前幾年國有的獸醫(yī)生物制藥廠生產(chǎn)的MD疫苗不過關(guān)，污染了網(wǎng)狀皮增生癥病毒，造成網(wǎng)狀皮組織增生癥的發(fā)病，損失非

46、常巨大。還有從國外引進(jìn)的某種MD疫苗質(zhì)量出現(xiàn)問題，導(dǎo)致誰家使用該公司的疫苗誰家的雞發(fā)病，教訓(xùn)非常深刻，值得我們獸醫(yī)界反省。. 雞傳染性支氣管炎(IB)本病是由冠狀病毒屬傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種急性、高度接觸性呼吸道和泌尿生殖道疾病。在臨床和病理上通常可分為呼吸型和腎病變型兩類，IBV的血清型至少有30種之多。近二十年來，由荷蘭從典型呼吸型毒株培育的52和120弱毒疫苗的普遍應(yīng)用，呼吸型的流行受到一定程度的控制，但腎病變型的傳染性支氣管炎從1992年起，流行呈明顯上升趨勢，至今仍是養(yǎng)雞中危害嚴(yán)重的疫病之一。由于不同血清型之間交叉保護(hù)性弱，從而給IB的免疫預(yù)防帶來不少困難。我國近幾年

47、來從發(fā)病雞群中分離到多株腎病變型IBV，血清中和試驗表明，與國外的腎型IBV(美國的G株和澳大利亞的T株)抗原性相似，而與IBV標(biāo)準(zhǔn)株抗原性不同。常規(guī)疫苗（52、）對腎病變型的流行幾乎無效，Ma5可同時預(yù)防呼吸型傳支也或預(yù)防腎型傳支，最近六七年來28/86株對腎型傳染性支氣管炎的免疫效果較好，在發(fā)生該病時可以緊急免疫28/86疫苗，能大大減少發(fā)病率和死亡率。目前各地以腎病變型毒株制備的滅活疫苗雖有一定免疫效果，但其應(yīng)用尚有一定局限性，且不斷有變異的毒株出現(xiàn)，因此研制腎病變型弱毒疫苗已成為防制該病的重要課題。1997年江、等地報道一種腺胃型傳染性支氣管炎，分離的病毒與-和-株單抗有明顯的交叉反應(yīng)

48、，用分離毒株試制成滅活苗免疫雞群獲得較好的保護(hù)效果。寶依特公司生產(chǎn)的腺胃型傳染性支氣管炎疫苗保護(hù)率高，免疫原性好，深受養(yǎng)雞戶的喜愛。針對IBV的致病型和血清型的多樣性，進(jìn)行毒株篩選，研制多價IB疫苗可望更好地解決其防制問題。IBV的分子病毒學(xué)和分子流行病研究也已有一定進(jìn)展。蛋白形態(tài)多樣性導(dǎo)致IBV的多種血清型，利用中和試驗、HI試驗、免疫酶法、單克隆抗體法、寡核苷酸指紋圖譜、限制性片段長度多態(tài)性圖譜和核酸序列分析都證實了病毒存在多種血清型和極大的變異性。. 禽流感（AI）我國對該病的重視和研究起步較晚，學(xué)者h(yuǎn)ortridge1975年月1980年10月從南方出口到的家禽(雞、鴨、鵝)檢疫中，從

49、上萬份材料中分離到586株病毒，分屬62種血清亞型；1978年在遼寧從17種不同的野鳥收集標(biāo)本207份，在其中14種野鳥中分離到24株A型流感病毒；從173份野鴨中分離到9株A型流感病毒；郭元吉等1979年從鴨飲過的186份水標(biāo)本中分離到58株禽流感病毒；1981年從17種野鳥的207份標(biāo)分離到24株A型流感病毒；1980年廣東衛(wèi)生防疫站桂章從廣東健康鴨中分離到8株A型流感病毒；徐為燕等1980年從健康鴨群中采集86份泄殖腔樣品，分離到15株A型流感病毒。以上的分離株均為不致病的低毒力病毒株，未引起禽流感的流行。1992年伯倫、澤紀(jì)從廣東病雞群中分離到毒株，并稱該毒株為中等毒力偏下，引起農(nóng)業(yè)部

50、的重視，并采取防制措施。其后，農(nóng)業(yè)部指定獸醫(yī)研究所對禽流感進(jìn)行診斷、研究，并已建立起動物流感中心。隨之國學(xué)者已先后報道了禽流感病毒的分離、鑒定。1996年福勇等從某雞場分離到毒株，1998年唐秀英等報道，186份病料中分離到6株禽流感病毒，分別是：從發(fā)病雞群分離到毒株，2株、3株；從鵝體分離到毒株，經(jīng)鑒定，達(dá)到對雞的高致病力標(biāo)準(zhǔn)。唐秀英等還從雞、鴨、鵪鶉體中分離到16株、3株、毒株。我國對禽流感的疫情調(diào)查、診斷、監(jiān)測、病毒分離和鑒定、疫苗研制與免疫、病毒分子生物學(xué)等進(jìn)行了卓有成效的研究。1997年禽流感事件(認(rèn)為禽源毒株是直接感染人并致死亡的原因)尚需進(jìn)一步研究。近年來國對禽流感的亞型H9N2

51、株和亞型H5N1株的疫苗研究已經(jīng)達(dá)到了比較成熟的程度，疫苗的保護(hù)效率也較高。最近三四年禽流感的控制狀況說明，疫苗還是非常可取的，另外抗病毒藥物如金剛烷胺和中藥與禽用干擾素等在治療禽流感時效果較好。流感的變異雖然很快，但當(dāng)前還沒有出現(xiàn)H7亞型的臨床病例。值得一提的是在2003年12月上旬以來國發(fā)生了嚴(yán)重的禽流感，造成了大量的雞只死亡，已經(jīng)引起國際上廣泛的關(guān)注。中國應(yīng)在預(yù)防禽流感方面多做一些工作. 大腸桿菌病由一定血清型致病性大腸埃希氏桿菌引起的、近年來已上升為危害養(yǎng)禽業(yè)最主要、防治最棘手的疾病之一。目前集約化禽場由于種禽凈化與早期用藥控制白痢等間接地控制了低日齡雛禽大腸桿菌病的發(fā)生，低日齡雛禽大

52、腸桿菌病的發(fā)生在個別種雞孵化場與育雛場偶爾發(fā)生，引起出雛率低和早期雛的死亡率高，經(jīng)消毒、用藥等綜合控制效果良好。而在育雛末期至育成期、成年禽生產(chǎn)期間，本病的發(fā)生較為嚴(yán)重，引起較高的發(fā)病率和死亡率。本病常易成為其它疾病的并發(fā)病或繼發(fā)病，各種應(yīng)激特別是環(huán)境衛(wèi)生和飼養(yǎng)管理條件不良，均可加重本病的發(fā)生。本病的臨診病型復(fù)雜多樣，其中最常見和危害最大的是急性敗血型、肝周炎、氣囊炎和卵巢炎大腸桿菌病。大腸桿菌分布廣泛，血清型繁多且極易產(chǎn)生耐藥性菌株，給防制工作帶來較大困難。我國各地區(qū)流行的血清型不一，除常見的、外，迄今已報道的雞致病性血清型有50多個，現(xiàn)已知其中有12個優(yōu)勢致病性血清型。已研制成蜂膠、油乳劑

53、、氫氧化鋁等佐劑的多價滅活苗，在防制中取得一定效果。但對于一些養(yǎng)雞場來說最好使用本場分離株制作的疫苗，其免疫保護(hù)率更高。在探討菌毛與致病性關(guān)系方面，制成菌毛苗與其油乳劑菌，已取得實驗性成功。此外，還開展了雞大腸桿菌質(zhì)粒DNA指紋圖譜分析，表明質(zhì)粒圖譜法將在本病流行病學(xué)調(diào)查中發(fā)揮重要作用。對大腸桿菌生物學(xué)特性的研究表明，雞源大腸桿菌與畜源、人源大腸桿菌相比具有明顯不同的特性。在用藥方面要根據(jù)藥敏試驗合理用藥，既降低了用藥成本，又發(fā)揮了藥效，目前藥效較好的藥有先鋒霉素系列（先鋒V號，號，頭孢噻肟、頭孢哌酮、頭孢曲松鈉等），丁胺卡那霉素、慶大霉素、某些喹諾酮類等。對種雞定期投藥以凈化雞場是可行的。為了預(yù)防小雛雞剛出生時發(fā)生大腸桿菌病，注射頭孢噻呋鈉（速可生、美樂仙）是可行的。.沙門氏菌病沙門氏菌病(包括雛白痢、雞傷寒和禽副傷寒)是由各種沙門氏桿菌引起的一類細(xì)菌性傳染病。一般認(rèn)為雞白痢沙門氏菌主要侵害雛雞，但近年來發(fā)現(xiàn)各種年齡的雞均可感染發(fā)病，在鵪鶉和珍珠雞中亦見爆發(fā)本病