葉綠體色素的提取分離實驗報告(共3頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上葉綠體色素的提取分離、理化性質(zhì)實驗報告第一部分 提取與分離一 實驗?zāi)康膶W習應(yīng)用薄層色譜法分離葉綠體色素的實驗方法二 實驗原理葉綠體是進行光合作用的細胞器。葉綠體中的葉綠體a(C55H72O5N4Mg)、葉綠素b(C55H72O6N4Mg)、胡蘿卜素(C40H56)和葉黃素(C40H56O2)與類囊體膜結(jié)合成為色素蛋白復合體。這些色素都不溶于水，而溶于有機溶劑，故可用乙醇等有機溶劑提取。提取液可用薄層色譜法加以分離與鑒別。薄層色譜分析法是將吸附劑均勻的涂在玻璃板上成一薄層，將此吸附劑薄層做固定相，把待分離的樣品溶液點在薄層板的下端，然后用一定量的溶劑做流動相，將薄層板的

2、下端浸入到展開劑中。流動相通過毛細管作用由下而上的逐漸浸潤薄層板，并帶動樣品在板上也向上移動，樣品中各組分在吸附劑和展開劑之間發(fā)生連續(xù)不斷的吸附、脫附、再吸附、再脫附的過程。由于吸附劑的吸附能力大小不同，吸附力強的物質(zhì)相對移動慢一些，而吸附力弱的則相對移動快一些，從而使各組分有不同的移動速度而彼此分開。三 實驗材料與試劑1 新鮮的菠菜葉片2 體積分數(shù)為95%的乙醇，碳酸鈣粉末，展開劑(石油醚:丙酮:苯=7:5:1，體積比)3 天平，研缽，漏斗，三角瓶，剪刀，點樣毛細管，層析缸，硅膠預(yù)制板，濾紙四 實驗步驟(一) 色素提取液的制備1 取新鮮葉片4至5片(2g左右)，洗凈，擦干葉表面，去中脈剪碎，

3、放入研缽中。2 研缽中加入少量碳酸鈣粉末，加2至3ml體積分數(shù)為95%的乙醇，研磨至糊狀，再加10至15ml體積分數(shù)為95%的乙醇，上清液用漏斗過濾，殘渣再用10ml體積分數(shù)為95%的乙醇沖洗一次，一同過濾于三角瓶中，即制成葉綠體色素提取液。提取液應(yīng)避光保存。(二) 葉綠體色素的分離1 取硅膠預(yù)制板一個，用點樣毛細管吸取上述提取液，平行于硅膠板的短邊，距下邊緣約1cm處用毛細管劃線，風干后再劃第二次，重復操作3至4次。2 在干潔的層析缸中加入適量的展開劑，高度約0.5cm，將硅膠預(yù)制板帶有色素的一端放下，使其浸入展開劑中(但不要使待測樣品浸入展開劑中)。迅速蓋好層析缸蓋。此時，展開劑借毛細管作

4、用沿硅膠預(yù)制板向上擴散，并把葉綠體色素向上推動，不久即可以看到各種色素的色帶。3 當各種色素的得到較好分離，展開劑前沿接近硅膠預(yù)制板上端近邊緣處時，取出硅膠預(yù)制板，并迅速用鉛筆標出展開劑前沿和各色素帶的位置。五 實驗結(jié)果及數(shù)據(jù)、分析經(jīng)過薄層色譜分離后，葉綠素a為藍綠色，葉綠素b為黃綠色，葉黃素為鮮黃色，胡蘿卜素為橙黃色。各色素帶在薄層中的位置可用相對比移值Rf表示，即Rf=斑點中心到原點的距離/溶劑前沿至遠點的距離由于不同組分具有不同的Rf值，所以比較Rf值可以進行定性分析。但是，實驗中的很多因素也可以影響到Rf的值，例如吸附劑的種類、層析缸的形狀大小、溫度、展開劑的濃度等等。最后測得數(shù)據(jù)：R

5、f(胡蘿卜素)=0.972，Rf(葉綠素a)=0.908, Rf(葉綠素b)=0.856，Rf(葉黃素)=0.804。第二部分 理化性質(zhì)一 實驗?zāi)康尿炞C葉綠體色素的理化性質(zhì)二 實驗原理葉綠素是一種由葉綠酸和葉綠醇形成的復合酯，故可與堿起皂化反應(yīng)而生成甲醇和葉綠醇及葉綠酸鹽，產(chǎn)生的鹽能溶于水，故可用此法將葉綠素和類胡蘿卜素分開。葉綠素吸收光量子而轉(zhuǎn)變成為激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)的葉綠素分子很不穩(wěn)定，當它變回倒基態(tài)時可發(fā)射出紅光量子，因而產(chǎn)生熒光。葉綠素的化學性質(zhì)很不穩(wěn)定，容易受到強光的破壞，特別是當葉綠素與蛋白質(zhì)分離以后，破壞更快，而類胡蘿卜素則較穩(wěn)定。葉綠素中的鎂可以被H+所取代而生成褐色的去鎂葉綠素。

6、去鎂葉綠素遇銅則成為銅代葉綠素，銅代葉綠素很穩(wěn)定，在光下不易被破壞，故常用此法制作綠色多汁植物的浸漬標本。三 實驗材料及試劑1 新鮮菠菜葉片2 刻度試管，小試管，試管架，水浴鍋，10ml移液管3 體積分數(shù)為95%的乙醇，苯，醋酸銅粉末，質(zhì)量分數(shù)為5%的稀鹽酸，醋酸-醋酸銅溶液，氫氧化鉀-甲醇溶液四 實驗步驟(一) 光對葉綠素的破壞作用1 取2支小試管，各加入2.5ml葉綠體色素乙醇提取液，并用體積分數(shù)為95%的乙醇稀釋一倍。其中一支放在直射日光下，另外一支放在暗處或用錫箔紙包嚴，40分鐘后對比觀察顏色有何變化。2 另取本實驗中用薄層層析分離成的硅膠色譜板一個，按長度方向?qū)⒁话胗煤谏埢蛩芰媳∧?/p>

7、包住，放在直射日光下，半小時后觀察，比較色譜板上各色素的顏色有何變化。(二) 皂化作用1 取1支10ml刻度的試管加入3ml濃的葉綠體色素乙醇提取液，加入1ml氫氧化鉀-甲醇溶液，充分搖勻。2 片刻后，加入3ml苯，搖勻，再沿試管壁慢慢加入1ml左右的蒸餾水，輕輕搖勻(勿激烈搖蕩)，然后置于試管架上靜置分層。若溶液不分層，則用滴管吸取蒸餾水，沿管壁滴加，邊滴加邊搖動，直到溶液開始分層時，靜置。(三) H+和Cu+對葉綠素分子中的Mg+的取代作用1 取兩支試管，第一支試管中加葉綠體色素提取液5ml，作為對照。第二支試管中加入葉綠體色素提取液5ml后，再加入質(zhì)量分數(shù)為5%的HCl數(shù)滴，搖勻，觀察溶

8、液顏色變化。當溶液變褐后，再加入少量醋酸銅粉末，60水浴加熱，觀察溶液顏色變化情況，并與對照試管相比較。2 取新鮮植物葉片兩片，放入試管中，加醋酸-醋酸銅溶液，使之沒過葉片，90水浴加熱，隨時觀察葉片顏色的變化，直至顏色不再變化為止。(四) 熒光現(xiàn)象的觀察取一支小試管加入3ml濃的葉綠素乙醇提取液，在直射光下照射，比較溶液的透射光與反射光的顏色有何不同。五 實驗結(jié)果及分析1 在光對葉綠素的破壞的實驗中，未觀察到提取液的顏色變化以及個色素的顏色變化，分析其原因，可能是因為當時的陽光已經(jīng)不夠強烈，不足以對色素達到破壞的程度，而且放置的位置不夠好，不能使樣品被陽光直射，而且放置的時間也可能不夠長，所以導致此試驗失敗。2 靜置一段時間之后，溶液逐漸分為兩層，下層是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的葉綠素a和葉綠素b(以及少量的葉黃素)，呈綠色；上層是苯溶液，其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素，呈黃色；最下層有少量黃色乳狀液體，這是由于皂化液沉積引起的。3 ·當加入了少量的鹽酸后，溶液在短時間內(nèi)變?yōu)榱撕稚?，再加入少量的醋酸銅粉末，水浴加熱一段時間后，溶液又重新變?yōu)榱怂{綠色。 ·90水浴加熱約半個小時以后，葉片變?yōu)辄S色，約一個半小時以后，葉片又逐漸恢復為藍綠色。4 熒光現(xiàn)象:透射光下呈綠色，反射光下呈紅褐色。第三部分 實驗感想1 實驗過程中，同組人