產(chǎn)ESBLs、ESBLsAmpC酶的肺炎克雷伯菌檢出及其耐藥性分析(一)

1、產(chǎn) ESBLs、ESBLs+AmpC酶的肺炎克雷伯菌檢出及其耐藥性分析(一)作者：卜黎紅徐瑞龍單小云許健波朱以軍【關鍵詞】肺炎克雷伯菌近年來，隨著 -內(nèi)酰胺類抗生素，尤其是頭孢三代類藥物的廣泛應用，引起產(chǎn)超廣譜-內(nèi)酰胺酶（ ESBLs）、 AmpC-內(nèi)酰胺酶（ AmpC 酶）、ESBLs+AmpC酶等一系列耐藥菌株的產(chǎn)生，細菌耐藥現(xiàn)象日益嚴重。為更好地了解我院臨床分離菌株中產(chǎn)ES-BLs、ESBLs+AmpC酶肺炎克雷伯菌的檢出率及耐藥性， 對 138 株肺炎克雷伯菌進行ESBLs、ESBLs+Am-pC酶測定及藥敏試驗，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。1 材料與方法1.1 材料試驗菌株 138 株肺炎克雷

2、伯菌均為我院2003 年 8 月 2004 年 8月住院及門診病人感染標本中分離的菌株，根據(jù)臨床資料去除重復菌株。質(zhì)控菌株大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603，分別作為產(chǎn) ESBLs陰性和陽性對照菌。細菌鑒定系統(tǒng)及配套的GNI 鑒定卡與 GNS-120藥敏卡為生物梅里埃公司生產(chǎn)。藥敏紙片頭孢替坦（ CTT）、頭孢吡肟（ FEP）為英國 Oxoid 產(chǎn)品，亞胺培南（ IPM）由默沙東公司提供，頭孢哌酮/ 舒巴坦（ SCF）為舒普深公司提供， 哌啦西林 / 他唑巴坦（TZP）等紙片購自北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司。藥敏用培養(yǎng)基 Mueller-Hinton 瓊脂，英國 O

3、xoid 產(chǎn)品。1.2 方法菌株培養(yǎng)和鑒定細菌分離培養(yǎng)按照全國臨床檢驗操作規(guī)程進行。用 VITEK-AMS專用卡 GNI+鑒定。檢測（1）VITEK-AMS測定 :采用 GNS-120專用藥敏卡，嚴格按說明書操作，儀器自動檢查其 ESBLs4個檢測孔，頭孢他啶（ CAZ）與頭孢他啶 / 克拉維酸（ CAZ/CA），頭孢噻肟（ CTX）與頭孢噻肟 / 克拉維酸（ CAZ/CA）孔的生長濁度 50%時，判定為 ESBLs陽性。（2）雙紙片協(xié)同試驗及確認試驗:將阿莫西林 / 克拉維酸（ AMC）紙片置 Mueller-Hinton 平板中央，依次貼上頭孢曲松 （CRO）、CAZ、CAZ/CA、ATM

4、、CTX、CTX/CA，其中 CRO、CAZ、氨曲南（ ATM）、CTX與 AMC 距離為 18mm，CAZ/CA、CTX/CA與 AMC 距離為 25mm，且 CAZ/CA、CTX/CA與其它紙片間距離 >24mm。（3）雙紙片協(xié)同試驗結(jié)果判斷:如在 AMC 紙片與其周圍 CRO、CAZ、ATM、CTX任一種紙片處出現(xiàn)協(xié)同抑菌視為產(chǎn)超廣譜-內(nèi)酰胺初篩陽性。（4）確認試驗 :按 NCCLs紙片標準， CAZ、CAZ/CA和 CTX、CTX/CA2組抗生素紙片任一組中含CA 的紙片和不含 CA的紙片菌抑菌圈直徑相差 5mm，即為產(chǎn) ESBLs菌株。產(chǎn) ESBLs+AmpC酶株的檢測（1）表

5、型篩選試驗參閱文獻1，2選用IPM、 FEP、CAZ/CA、CAZ、CTX/CA、CTX、CTT7種抗生素進行篩選試驗。 若 IPM 敏感，而 CTT、FEP、CAZ、 CAZ/CA、CTX、 CTX/CA耐藥為產(chǎn) ESBLs+AmpC酶株。（2）擴散協(xié)同試驗參閱文獻 3，4經(jīng)表型篩選試驗為產(chǎn)ESBLs+AmpC酶株作擴散協(xié)同試驗，每株菌取兩平板，一平板將AMC 紙片置Mueller-Hinton 平板中央，四周依次貼上 CAZ、CTX、ATM、CRO;另一平板將 AMC紙片置 Mueller-Hinton 平板中央，在與 AMC紙片距離為 15mm、20mm、25mm、30mm 處各貼 FEP。若 AMC 與 CAZ、CTX、ATM、CRO不協(xié)同，但與FEP協(xié)同為產(chǎn) ESBLs+AmpC酶株。藥敏試驗采用紙片擴散（K-B法），判斷標準按 NCCLs2002版標準執(zhí)行。統(tǒng)計分處理采用WHONET5軟件。2 結(jié)果2.1 產(chǎn) ESBLs陽性率及病房分布臨床分離株 138 株，經(jīng) VITEKGNS-120卡鑒定 56 株產(chǎn) ESBLs，紙片協(xié)同法 55 株產(chǎn) ESBLs，紙片確認法 57株產(chǎn) ESBLs占 41.3%（57/138）。各科室產(chǎn) ESBLs株從高到低依次為