藥物分析課件-第四章_藥物的含量測(cè)定方法

1、第四章第四章 藥物的含量測(cè)定方法藥物的含量測(cè)定方法 與驗(yàn)證與驗(yàn)證前言前言 藥物的含量：指藥物中所含主成分的量，是評(píng)價(jià)藥物質(zhì)量的重要指標(biāo)。前言前言藥物的含量測(cè)定分兩類基于化學(xué)或物理學(xué)原理的含量測(cè)定?；谏飳W(xué)原理的效價(jià)測(cè)定。目標(biāo)基礎(chǔ)本章的目標(biāo)：含量測(cè)定。生物檢定法，微生物檢定法，酶法。P40：效價(jià)測(cè)定方法：凡以生物學(xué)方法或者酶學(xué)方法對(duì)藥品中的特定成分以標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照，作量反應(yīng)平行線測(cè)定方法進(jìn)行的生物活性（效力）測(cè)定。前言前言藥物的含量測(cè)定第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn) 一、容量分析法，亦稱滴定法 定義：將已知濃度的滴定液（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液）由滴定管滴加到被測(cè)藥物的溶液中

2、，直至滴定液與被測(cè)藥物反應(yīng)完全（通過(guò)適當(dāng)方法指示），然后根據(jù)滴定液的濃度和被消耗的體積，按化學(xué)計(jì)量關(guān)系計(jì)算出被測(cè)藥物的含量。通過(guò)指示劑顏色變化 ，或者電子設(shè)備的電位或電流突變來(lái)指示滴定終點(diǎn)，滴定終點(diǎn)和計(jì)量不一致，就會(huì)引入滴定誤差，應(yīng)該盡量避免。一、容量分析法一、容量分析法 特點(diǎn)： 1.方法簡(jiǎn)便易行：所用儀器價(jià)廉易得，操作簡(jiǎn)便快速； 2.方法耐用性高：影響測(cè)定的試驗(yàn)條件與環(huán)境因素少； 3.測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確：誤差低于0.2%，滿足準(zhǔn)確度高樣品； 4.方法專屬性差：對(duì)相近雜質(zhì)干擾缺少選擇，適用于主成分含量較高的樣品分析。 適用范圍： 廣泛應(yīng)用于化學(xué)原料的測(cè)定，較少應(yīng)用于藥物制劑的測(cè)定。（二）容量分析法的

3、有關(guān)計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算 滴定度：每1mL規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物質(zhì)量。中國(guó)藥典用毫克（mg）表示。（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算 滴定度的計(jì)算aAbBcCdDABABWWaMbM被測(cè)藥物滴定液用B滴定A被測(cè)藥物反應(yīng)的質(zhì)量滴定液反應(yīng)的質(zhì)量滴定液的摩爾質(zhì)量被測(cè)藥物的摩爾質(zhì)量（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算 滴定度的計(jì)算用B滴定ABAABABBBAWaWMnMb MbamVMb滴定液待測(cè)液濃度乘體積=nB濃度mB等于1mL計(jì)算有一個(gè)從質(zhì)量到物質(zhì)的量，再到濃度再到滴定度的轉(zhuǎn)變過(guò)程 示例一 計(jì)算Vc的滴定度T 碘量法測(cè)定Vc含量M（C6H6O

4、6）=176.13，C（I2）=0.05mol/L(/)aT mg mLmMb6862666210.05176.138.806(/)1C H OIC H OHIaTmMmg mLb （二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算 示例二 異煙肼的滴定度 溴酸鉀法測(cè)定異煙肼含量M（C6H7N3O）=137.14，C溴酸鉀=0.01667mol/L(/)aT mg mLmMb67336522232332330.01667137.14 3.429(/)2C H NOKBrOC H NONKBrH OaTmMmg mLb （二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)

5、計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算 3.含量計(jì)算方法：直接滴定法與間接滴定法 直接滴定法% =100%VTW含量（ ） 在實(shí)際工作中，滴定液的濃度可能與藥典規(guī)定的濃度并不一致，所以應(yīng)該進(jìn)行校正。=FF實(shí)際摩爾濃度實(shí)際摩爾濃度規(guī)定摩爾濃度規(guī)定摩爾濃度（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算 直接滴定法的含量計(jì)算方法% =100%VTFW含量（ ）自己標(biāo)定藥典規(guī)定直接讀取取樣量（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算（1）生成物滴定法）生成物滴定法（1）生成物滴定法）生成物滴定法 示例三 葡萄糖酸銻鈉的含量測(cè)定本法先用葡萄糖酸銻鈉與碘離子反應(yīng)生成碘，再用碘與硫代硫酸鈉反應(yīng)生成碘

6、離子，相當(dāng)于是用硫代硫酸鈉在滴定葡萄糖銻鈉，因此要找出它們兩者的量反應(yīng)關(guān)系，也就是a和b。 0.3g供試品+水100mL+鹽酸15mL+碘化鉀試液10mL密塞，振搖后暗處放置10min碘量法5-322222346b2b22SISIIS OIS OSb5+2S2O32-（1）生成物滴定法）生成物滴定法(2)剩余量滴定法剩余量滴定法(2)剩余量滴定法剩余量滴定法(2)剩余量滴定法剩余量滴定法 示例四 司可巴比妥鈉的含量測(cè)定取本品約0.1g，精密稱定，置250mL碘瓶中，加水10mL，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L) 25mL，再加鹽酸5mL，立即密塞，并振搖1min，在暗處放置15

7、min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10mL，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定得的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。(2)剩余量滴定法剩余量滴定法(2)剩余量滴定法剩余量滴定法 示例四 司可巴比妥鈉的含量測(cè)定已知：司可巴比妥鈉M=260.27；司可巴比妥鈉與溴反應(yīng)摩爾=1：1；W=0.1022g；硫代硫酸鈉濃度校正因子=1.038；供試品滴定Vs=15.73mL；空白試驗(yàn)滴定Vo=23.21mL；01(/)0.05260.2713.01(/)1)% =100%SBBBAaT mg mLmMmg mLbVVFTW （含量（ ）討

8、論討論 在剩余量滴定法中，第一滴定液與第二滴定液的濃度是相當(dāng)?shù)摹?如上例中，第一滴定液為溴滴定液（0.05mol/L），第二滴定液為硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）。 Br2I22Na2S2O3 本公式適用于空白校正情形(2)剩余量滴定法剩余量滴定法 本公式適用于沒有做空白校正情形 習(xí)題一 剩余碘量法測(cè)定異煙肼含量異煙肼在弱堿性溶液中，加定量過(guò)量的碘滴定液（0.1mol/L)氧化，反應(yīng)完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L)滴定（以淀粉為指示劑）。（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算 習(xí)題二 非那西丁含量測(cè)定精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流1小

9、時(shí)后，放冷，用亞硝酸鈉液（0.1010mol/L)滴定，用去20.00mL。每1mL亞硝酸鈉液（0.1mol/L)相當(dāng)于17.92mg的C10H13O2N，請(qǐng)計(jì)算非那西丁的含量。（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算二、光譜分析法二、光譜分析法光譜分析法藥典收載紅外分光度法火焰光度法紫外可見分光度法熒光分析法原子吸收分光光度法本章講敘紫外可見分光度法熒光分析法（一）紫外（一）紫外-可見分光光度法可見分光光度法 基于物質(zhì)分子對(duì)紫外光區(qū)（波長(zhǎng)為200400nm）和可見光區(qū)（波長(zhǎng)為400760nm）的單色光輻射的吸收特性建立起來(lái)的光譜分析方法。 1、朗伯-比爾定律2、方法特點(diǎn)與適用范圍

10、、方法特點(diǎn)與適用范圍（1）簡(jiǎn)便易行：本法使用的儀器價(jià)格比較低廉，操作簡(jiǎn)單，易于普及（2）靈敏度高：本法靈敏度可達(dá)10-710-4g/mL，適用于低濃度試樣分析（3）準(zhǔn)確度較高：本法誤差在2%5%之間，適用于對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度要求較高的樣品（4）專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對(duì)結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性。 本法紫外區(qū)須選用石英比色皿，比色皿一般為1cm，吸光度在0.30.7之間為宜，選用最大吸收光波長(zhǎng)。 本法比較少應(yīng)用于原料藥的含量測(cè)定，可用于制劑的含量測(cè)定。（1）對(duì)照品比較法）對(duì)照品比較法 分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)藥物的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分規(guī)定量

11、的10010%，所用溶劑量?jī)烧呦嗤谝?guī)定的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。按下式計(jì)算結(jié)果：xRxRACCACx供試品溶液濃度；CR對(duì)照品溶液濃度；Ax，AR對(duì)應(yīng)吸光度；（1）對(duì)照品比較法）對(duì)照品比較法 對(duì)原料藥:% =100%=100%:xCDWCxDW測(cè)得量含量（ ）稱樣量供試品濃度；：稀釋體積；：供試品的量；對(duì)應(yīng)于稀釋體積濃度（1）對(duì)照品比較法）對(duì)照品比較法 對(duì)于固體制劑:P16：制劑的標(biāo)示量：系指每一支、片或每一個(gè)單位制劑中含有主藥的重量（或效價(jià)）或含量或裝量。% =100%CxD WWBWB標(biāo)示量（ ）：制劑平均重量（裝量）；：制劑的標(biāo)示量；（一）紫外（一）紫外-可見分光光度法可見分光光度法（2）

12、吸收系數(shù)法）吸收系數(shù)法 引入吸光系數(shù)的含量計(jì)算方法1%1100XXcmACE1%1c1000% =100%100mA D VEVB標(biāo)示量（ ）1%1c1000% =100%100mA D WEWB標(biāo)示量（ ） 溶液 片劑mg轉(zhuǎn)化單位g/mL（2）吸收系數(shù)法）吸收系數(shù)法 示例：鹽酸氯丙嗪注射液的含量測(cè)定： 精密量取本品適量（約相當(dāng)于鹽酸氯丙嗪50mg），置200mL量瓶中，加鹽酸溶液（9-1000）稀釋至刻度，搖勻；精密量取2mL，置100mL量瓶中，用鹽酸（91000）稀釋至刻度，搖勻；在254nm下測(cè)定吸光度，按鹽酸氯丙嗪的吸收百分系數(shù)計(jì)算，即得。 注射液，選溶液公式，如下：1%1cm100

13、0% =100%100A D VEVB標(biāo)示量（ ）（2）吸收系數(shù)法）吸收系數(shù)法 D為供試品溶液的稀釋體積：共稀釋了200mL1002=10000mL1%1cm1000% =100%100A D VEVB標(biāo)示量（ ） ，是注射液規(guī)格（mL/支）：已知 B，注射液標(biāo)示量（mg/支）：已知 V，供試品取樣量：2mL A，吸光度：測(cè)量值，已知 ：已知V1%1cmE 固體試劑公式推導(dǎo)如下：（2）吸收系數(shù)法）吸收系數(shù)法 3.計(jì)算分光光度法 多種，具體按每種藥物規(guī)定的方法進(jìn)行 如：VA的三點(diǎn)校正法 不宜做含量測(cè)定 4.比色法 加入顯色劑后，按照對(duì)照品比較法測(cè)定影響顯色因素很多，故需注意平行操作空白溶劑：溶劑

14、+顯色劑，同法處理（一）紫外（一）紫外-可見分光光度法可見分光光度法（二）熒光分析法（二）熒光分析法 特點(diǎn) 靈敏度高，可達(dá)10-1010-12g/mL 要求低濃度下測(cè)定，防止自熄滅作用 干擾因素多，須做空白測(cè)定 熒光弱的藥物可衍生化后測(cè)定，可提高靈敏度和選擇性含量測(cè)定 原理：當(dāng)激發(fā)光強(qiáng)度、波長(zhǎng)、所用溶劑及溫度等條件固定時(shí)，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其熒光強(qiáng)度R與該物質(zhì)濃度C成正比 方法：對(duì)照品比較法 計(jì)算：對(duì)對(duì)對(duì)對(duì)空空白白對(duì)對(duì)供供空空白白供供供供CRRRRC （二）熒光分析法（二）熒光分析法 根據(jù)混合物中各組分的色譜行為差異，先行分離后再在線或離線對(duì)各組分逐一進(jìn)行分析的方法，是分離分析混合物的最有

15、力手段。 按分離原理：吸附；分配；離子交換；排阻色譜分類 按分離方法：PC；TLC；柱色譜；GC；HPLC 特點(diǎn)：高靈敏度、 高效能、高速度、應(yīng)用廣泛三、色譜分析法三、色譜分析法h hW W1/21/2 0.50.5h h0.6070.607h hW W0tt0tR色譜柱填充劑常用：十八烷基硅烷鍵合硅膠1. 對(duì)儀器一般要求 固定相種類、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類型不得任意改變 其他均可適當(dāng)改變 色譜圖20分鐘內(nèi)記錄完畢 2. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱的理論板數(shù)：n = 5.54(tR /Wh/2)2 分離度：R = 2（tR1 tR2)/(W1 + W2); 應(yīng)大于1.5 重復(fù)性：對(duì)照液連續(xù)進(jìn)樣5次，

16、峰面積RSD2.0 拖尾因子：T = W0.05h/2d1 應(yīng)在0.95 1.05（一）（一）HPLC（1）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量對(duì)照液（對(duì)照液（R）：）： AR CR 峰面積 含量?jī)?nèi)標(biāo)液（內(nèi)標(biāo)液（S）：）： AS CS供試液（供試液（X）：）： AX CXf= AS/CSAR /CRf= AS / CSAx /CxCx=f AxAS / CS3. HPLC測(cè)定法測(cè)定法（2）外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量對(duì)照液（對(duì)照液（R）：）： AR CR 供試液（供試液（X）：）： AX CXCX CRAX ARCXCR AXAR要求：進(jìn)樣量準(zhǔn)確、操作條件穩(wěn)定3. HPLC測(cè)定法測(cè)定法3.

17、HPLC測(cè)定法測(cè)定法 示例一 炔諾酮的含量測(cè)定 照高效液相色譜法（附錄VD測(cè)定） 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（65：35）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為244nm。理論塔板數(shù)按炔諾酮峰計(jì)算不低于1500，炔諾酮峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度及主成分峰后一雜質(zhì)峰與主成分峰的分離度均應(yīng)符合要求。 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取黃體酮約25mg，精密稱定，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。3. HPLC測(cè)定法測(cè)定法 示例一 炔諾酮的含量測(cè)定 測(cè)定法 取本品約25mg，精密稱定，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液2mL與內(nèi)標(biāo)溶液3mL，置10mL量瓶中，

18、加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取20L注入液相色譜儀，記錄色譜儀，記錄色譜圖；另取炔諾酮對(duì)照品適量，精密稱定，同法測(cè)定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。1. 對(duì)GC儀器一般要求 載 氣：氮?dú)?色譜柱：填充柱或毛細(xì)管柱 填充柱：內(nèi)徑24mm，長(zhǎng)110m，內(nèi)裝吸附劑 高分子多孔小球或涂漬固定液的載體 毛細(xì)管柱：內(nèi)徑0.20.5mm，長(zhǎng)10100m，一般 為空心柱，內(nèi)壁或載體經(jīng)涂漬或交聯(lián) 固定液檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器色譜圖：30分鐘內(nèi)記錄完畢（二）氣相色譜法（二）氣相色譜法2. 色譜適用性實(shí)驗(yàn)：同HPLC3.測(cè)定法：同HPLC（二）氣相色譜法（二）氣相色譜法示例 松節(jié)油的含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

19、用聚乙二醇（PEG）-20M為固定相，涂布密度為20%；柱溫為90攝氏度。理論塔板數(shù)按-蒎烯峰計(jì)算應(yīng)不低于1500.校正因子測(cè)定 取正丁醇適量，精密稱定，加石油醚（3060 。C ）至刻度，搖勻，吸取1微升注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。（二）氣相色譜法（二）氣相色譜法示例 松節(jié)油的含量測(cè)定測(cè)定法 取本品約35mg，精密稱定，置10mL棕色量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2mL，用石油醚（3060。C ）溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取1微升注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。本品含-蒎烯（C10H16）不得少于70%。 外標(biāo)法 標(biāo)準(zhǔn)加入法（二）氣相色譜法（二）氣相色譜法1.結(jié)構(gòu)特征與分析方法之間的關(guān)系 含鹵素有機(jī)

20、藥物 R-X （F，Cl, Br, I ） 鹵素與芳環(huán)相連 Ar-X 結(jié)合牢固， 需有機(jī)破壞 鹵素與脂肪鏈相連 R-X 結(jié)合較不牢固，不需有機(jī)破壞 含金屬有機(jī)藥物 含金屬有機(jī)藥物 R-O-Me，有機(jī)酸或酚的金屬鹽/配位化合物； 結(jié)合不牢固，可直接測(cè)定 有機(jī)金屬藥物 R-Me ，結(jié)合牢固，適當(dāng)處理后測(cè)定 第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法（一）直接測(cè)定法適用范圍：金屬原子不直接于碳原子相連或某些C-M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物。 例如：富馬酸亞鐵的含量測(cè)定 終點(diǎn)：終點(diǎn)： 鄰二氮菲鄰二氮菲(+Fe3+)溶于熱稀礦酸溶于熱稀礦酸Fe2+鈰量法鈰量法Ce4+Fe3+指示劑指示劑:鄰

21、二氮菲鄰二氮菲 (+Fe2+)紅色紅色淡藍(lán)色淡藍(lán)色一、不經(jīng)有機(jī)破壞的前處理方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的前處理方法（二）經(jīng)水解后測(cè)定法1. 堿水解后測(cè)定法 適用于鹵素原子結(jié)合不牢固的含鹵素有機(jī)藥物，如鹵素與脂肪鏈相連的鹵代烷烴 例如：三氯叔丁醇的含量測(cè)定 CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH (CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2O NaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCN AgSCN + NH4NO3 2. 酸水解后測(cè)定法 常用于水難溶的含金屬的有機(jī)藥物，例如：硬脂酸鎂的含量測(cè)定 Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 Mg

22、SO4 + 2C17H35COOH H2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2H2O 一、不經(jīng)有機(jī)破壞的前處理方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的前處理方法（三）經(jīng)還原分解后測(cè)定法 適用于Ar-I的藥物 例如：碘他拉酸的含量測(cè)定COOHIIINHCOCH3CH3CONHCOOHH2NNH2+ 11NaOH + 3Zn+ 3NaI + 2CH3COONa + 3NaZnO2 + 3H2O NaI + AgNO3 AgI + NaNO3 指示劑：曙紅鈉指示劑：曙紅鈉終點(diǎn)：黃終點(diǎn)：黃紅紅一、不經(jīng)有機(jī)破壞的前處理方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的前處理方法 金屬原子、鹵素等與金屬原子、鹵素等與C結(jié)合牢固者，必須有機(jī)破壞結(jié)

23、合牢固者，必須有機(jī)破壞 濕法破壞濕法破壞 藥物分析中常用的有機(jī)破壞的方法有藥物分析中常用的有機(jī)破壞的方法有 H H2 2SOSO4 4-HNO-HNO3 3法法(一)濕法破壞 H H2 2SOSO4 4-HClO-HClO4 4法法 H H2 2SOSO4 4- -硫酸鹽法硫酸鹽法 H H2 2SOSO4 4-H-H2 2O O2 2,HNO,HNO3 3-KMnO-KMnO4 4法等法等干法破壞干法破壞凱氏定氮法凱氏定氮法二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法凱氏定氮法 常量法含氮量2530mg 半微量法含氮量1.02.0mg 應(yīng)用：含有氨基或酰氨（胺）結(jié)構(gòu)的藥物含量。342444

24、42)(SOHN42NHSONHHSONHNaOHSOH 藥物藥物含含堿滴定堿滴定酸酸吸收液吸收吸收液吸收/凱氏定氮法凱氏定氮法（二）干法破壞 適用于含鹵素、S、P等有機(jī)藥物分析的前處理，也用于某些藥物中Se及砷鹽的檢查 1. 高溫?zé)胱品?用于含鹵素、含磷藥物和藥物中砷鹽的檢查。 加無(wú)水Na2CO3、硝酸鎂、氫氧化鈣或ZnO以輔助灰化。2.氧瓶燃燒法測(cè)定測(cè)定吸收吸收無(wú)機(jī)離子無(wú)機(jī)離子有機(jī)藥物有機(jī)藥物、含含吸收液吸收液、燃燒、燃燒 2OSePSX二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 1） 儀器裝置儀器裝置 500ml, 1000ml, 2000ml, 磨口、硬質(zhì)磨口、硬質(zhì) 玻璃錐形瓶玻

25、璃錐形瓶 2）稱樣）稱樣 固體樣；液體樣要求固體樣；液體樣要求 3） 燃燒分解操作法燃燒分解操作法 4） 吸收液的選擇吸收液的選擇 用于用于X、S、Se等的鑒別、檢查、等的鑒別、檢查、 含量測(cè)定時(shí)多數(shù)是含量測(cè)定時(shí)多數(shù)是H2O或或H2O-NaOH；少數(shù)為少數(shù)為 H2O-NaOH-H2O2.氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法應(yīng)用示例：碘苯酯的測(cè)定 目的：證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測(cè)要求。 起草藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 生產(chǎn)工藝變更生產(chǎn)工藝變更 制劑組分改變制劑組分改變 原分析方法修訂原分析方法修訂均需對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證均需對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證驗(yàn)證內(nèi)容：準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性

26、第三節(jié)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證一、準(zhǔn)確度 是指用該方法測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，用回收率表示（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度 1. 原料藥：可用已知純度對(duì)照品或供試品進(jìn)行測(cè)定；或與已知準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較 加加入入量量測(cè)測(cè)得得量量回回收收率率100 第三節(jié)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證2. 制劑：考察其他組分和輔料對(duì)回收率的影響用含已知量被測(cè)物的制劑各組分混合物（包括制劑輔料）進(jìn)行測(cè)定，回收率計(jì)算同原料藥向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定與已知準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較加入量加入量本底量本底量測(cè)得量測(cè)得量回收率回收率1

27、00 一、準(zhǔn)確度一、準(zhǔn)確度（二）具體做法：測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度，n=3, 共9個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)價(jià)回收率；用UV和HPLC法時(shí)，一般回收率可達(dá)98%102%；容量法可達(dá)99.7%100.3%。一、準(zhǔn)確度一、準(zhǔn)確度 是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。 （一）精密度表示方法 1. 偏差(deviation , d) d = 測(cè)得值-平均值=Xi-X 相對(duì)偏差（RD）d / X 100最大相對(duì)偏差（允許差） 容量分析法0.3，儀器分析法3二、精密度二、精密度 2. 標(biāo)準(zhǔn)偏差（standard deviation, SD或S） S =(Xi X)2/(n-1)1/2

28、3. 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation, RSD) RSD=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值100%=S/X 100%二、精密度二、精密度（二）驗(yàn)證內(nèi)容 1. 重復(fù)性 在相同條件下,由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度. 2. 中間精密度 在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。 3. 重現(xiàn)性 在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。二、精密度二、精密度指在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。 鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性。 （一）鑒別反應(yīng) 應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或相似化合物區(qū)分，不

29、含被測(cè)組分的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。三、專屬性三、專屬性（二）含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定 色譜法和其他分離法，應(yīng)附代表性的圖譜，以說(shuō)明專屬性。 圖中應(yīng)注明各組分的位置，色譜法中分離度應(yīng)符合要求。 在能獲得雜質(zhì)的情況下，可加到試樣中，考察對(duì)結(jié)果的干擾。 在雜質(zhì)和降解物不能獲得的情況下，可用已驗(yàn)證方法或藥典方法進(jìn)行對(duì)照；也可用對(duì)試樣加速破壞的方法，比較兩種方法。三、專屬性三、專屬性是指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量，是限度檢驗(yàn)指標(biāo)。它無(wú)需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。1.目視法 用含已知濃度被測(cè)物的試樣進(jìn)行分析，目視確定能被可靠地檢測(cè)出的被測(cè)物的最低濃度或量，常用于顯色鑒別法，TLC 2

30、.信噪比法 當(dāng)用GC和HPLC法時(shí)，一般以S/N2或3時(shí)的相應(yīng)濃度來(lái)確定檢測(cè)限。四、檢測(cè)限四、檢測(cè)限 LOD是指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。 雜質(zhì)和降解產(chǎn)物進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，要求LOQ。常用信噪比法確定定量限，一般以S/N=10時(shí)相應(yīng)的濃度進(jìn)行測(cè)定。五、定量限五、定量限 LOQ是指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度或量直接呈正比關(guān)系的程度。 回歸方程的相關(guān)系數(shù)（r）越接近1，表明線性越好。六、線性六、線性可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列（至少5份）供試液進(jìn)行測(cè)定，以響應(yīng)值對(duì)濃度作圖，建立回歸方程，求出r。如UV：制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，

31、濃度點(diǎn)n =5 A=0.3-0.7 建立回歸方程C = aA + b r 0.9999是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性、測(cè)試方法適用的高低限度或量的區(qū)間。 如原料藥和制劑含量測(cè)定：應(yīng)為測(cè)試濃度的80%120%制劑含量均勻度檢查：應(yīng)為測(cè)試濃度的70%- 130%。 溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定：應(yīng)為限度的20%。七、范圍七、范圍 是指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。典型的變動(dòng)因素有：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時(shí)間等。HPLC變動(dòng)因素有：流動(dòng)相組成與pH，色譜柱，柱溫，流速等。GC變動(dòng)因素有：色譜柱，固定相，擔(dān)體、柱溫、進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等。 八、耐用性八、耐用性已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充 視具體情況予以驗(yàn)證九、驗(yàn)證內(nèi)容的選擇九、驗(yàn)證內(nèi)容的選擇+各種含量測(cè)定方法對(duì)效能指標(biāo)的要求各種含量測(cè)定方法對(duì)效能指標(biāo)的要求 1.容量分析法 用原料藥精制品（含量9