分子心血管學教育部重點實驗室轉基因動物平臺

1、12儀器設備：儀器設備： 顯微操縱系統(tǒng)、倒置顯微鏡、自制防震臺、顯微操縱系統(tǒng)、倒置顯微鏡、自制防震臺、細胞培養(yǎng)箱、超凈臺、方波電穿孔系統(tǒng)、高速細胞培養(yǎng)箱、超凈臺、方波電穿孔系統(tǒng)、高速冷凍離心機和獨立的動物飼養(yǎng)室。冷凍離心機和獨立的動物飼養(yǎng)室。功能：功能： 構建過表達心血管疾病相關基因載體，利構建過表達心血管疾病相關基因載體，利用轉基因或基因敲除的方法，制備心血管疾病用轉基因或基因敲除的方法，制備心血管疾病小鼠和家兔的模式動物，為系統(tǒng)地研究心血管小鼠和家兔的模式動物，為系統(tǒng)地研究心血管疾病病理機制、評價藥物藥效和藥理提供體內疾病病理機制、評價藥物藥效和藥理提供體內研究的技術手段。研究的技術手段。

2、 3Genetically Engineered Mouse Models:Transgenic characterize the ability of a promoter to direct tissue-specific gene expression examine the effects of overexpressing andmisexpressing endogenous or foreign genes at specific times and locations in the animals45內皮細胞內皮細胞Tie2平滑肌細胞細胞平滑肌細胞細胞SM22a a神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)

3、系統(tǒng)Neuron specific enolase,nestin, synapsin, GFAP肝臟肝臟Albumin, ApoE脂肪脂肪AP2腎臟腎臟Uromodulin, mSGLT 2,mKAP2, CYP27B1皮膚皮膚Keratin 5,keratin 6心臟心臟MHC, MLC2Transgene Design: Representative Examples of Tissue-Specific Expression Profiles全身表達全身表達EF1，CMV胰腺胰腺Elastase贏潤生物（Yrbio）長沙市國家高新技術開發(fā)區(qū) 678Pros: Relatively sim

4、ple and efficient Generate transgenics in 3 months Long transgenes possible Potentially all speciesCons: Multiple copies at a single locus Occasionally mosaic founders (late stage integration) 10% insertions result in phenotype due to disruption ofendogenous gene Deletion, complex rearrangements of

5、host genome Not all integrated transgenes are expressed. Expressionlevel do not correlate well with copy number91011定動物實驗日期實驗用動物種類和數(shù)量PMSG注射時間和量實驗日期HCG注射時間和量交配情況動物年齡飼養(yǎng)環(huán)境光照周期雄鼠淘汰雌鼠淘汰實驗記錄實驗記錄操作人操作人趙芙潔2011-10-82011-10-82011-10-92011-10-92011-10-102011-10-102011-10-82011-10-82011-10-92011-10-92011-10-102

6、011-10-10C57C57* *5 5C57C57* *9 9C57C57* *5 5150ul150ul（11:00AM11:00AM）150ul150ul（11:00AM11:00AM）150ul150ul（11:00AM11:00AM）趙芙潔，韓迎春2011-10-102011-10-102011-10-112011-10-112011-10-122011-10-12150ul150ul（10:00AM10:00AM）150ul150ul（10:00AM10:00AM）150ul150ul（10:00AM10:00AM）趙芙潔，韓迎春C57C57：=1:1=1:1* *5 5C57C

7、57：=1:1=1:1* *9 9C57C57：=1:1=1:1* *5 5ICRICR：結扎：結扎=1:1=1:1* *1818ICRICR：結扎：結扎=1:1=1:1* *1818ICRICR：結扎：結扎=1:1=1:1* *18183W3W3W3W3W3W2525252525257:00-19:007:00-19:007:00-19:007:00-19:007:00-19:007:00-19:0012實驗日期實驗日期見栓動物數(shù)量供體受體取卵開始時間取卵結束時間取卵數(shù)量加熱塊溫度注射基因名稱、片段確認和濃度稀釋離心情況注射臺溫度注射開始時間注射卵數(shù)量注射結束時間存活卵數(shù)量2011-10-6

8、2011-10-6操作人10王宇輝2 28:008:009:009:0080803636PCSK9PCSK9野生野生TETE稀釋，稀釋，3-3-5ng/ul5ng/ul，離心，離心353513:0013:00606016:0016:00101013每只動物回輸卵數(shù)量回輸動物體重戊巴比妥鈉用量回輸情況手術情況第二天情況第五天體重第10天體重第15天體重出生情況帶仔情況基因型鑒定10X1251%，200ul好順利恢復262628未生李海波14 供體鼠見栓率及取卵數(shù)統(tǒng)計供體鼠見栓率及取卵數(shù)統(tǒng)計年齡年齡3-4周周品系品系C57BL/6激素劑量激素劑量5U/只只見栓率見栓率60.0%平均取卵數(shù)平均取卵數(shù)27個個/只只 受體受體ICR雌鼠情況統(tǒng)計雌鼠情況統(tǒng)計年齡年齡8-16周周見栓率見栓率15%回輸數(shù)回輸數(shù)51只只產(chǎn)子母鼠數(shù)產(chǎn)子母鼠數(shù)20只只出生子鼠數(shù)出生子鼠數(shù)80只只制備轉基因品系制備轉